本發明專利技術公開了一種靜注人免疫球蛋白生產方法，其技術方案要點是一種靜注人免疫球蛋白生產方法，主要依次包括組分I的制作與離心、組分Ⅱ+Ⅲ的制作和離心、組分Ⅲ的制作和離心、組分Ⅱ的制作和離心、組分Ⅱ的溶解過濾、層析、超濾透析、配制、除菌、低pH孵放、灌裝、檢定的步驟，所述組分Ⅱ的溶解過濾的步驟中采用進行層析柱純化分離和DEAESepharoseFastFlow離子交換層析柱純化分離兩步進行過濾得到層析純化液，之后對層析純化液進行超濾透析，超濾透析過程中調節pH值至3.9~4.3，并采用連續等倍透析法進行過濾，旨在提供一種靜注人免疫球蛋白成品純度高，低抗補體活性，產品質量好的靜注人免疫球蛋白生產方法。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物制藥領域，更具體地說，它涉及。
技術介紹
靜注人免疫球蛋白的活性成份為蛋白質，其中95%以上為免疫球蛋白。由健康人收集獲得的原料血漿， 經低溫乙醇蛋白分離法(壓濾分離法)分離純化，去除抗補體活性并經病毒滅活處理制成。目前，靜注人免疫球蛋白由于乙醇濃度、溫度、PH值等工藝參數的選擇不合理，所生產的靜注人免疫球蛋白成品的純度基本在97%~98%之間，抗補體活性在30%~40%之間，靜注人免疫球蛋白成品純度低，抗補體活性高，產品質量低下，且其各組分沉淀的過程中都需要靜置并離心，使得現有的靜注人免疫球蛋白成品生產工藝繁瑣，加工效率低下。
技術實現思路
針對現有技術存在的不足，本專利技術的目的在于提供一種靜注人免疫球蛋白成品純度高，低抗補體活性，產品質量好的靜注人免疫球蛋白生產方法。為實現上述目的，本專利技術提供了如下技術方案:，主要依次包括組分I的制作與離心、組分II +III的制作和離心、組分III的制作和離心、組分II的制作和離心、層析、超濾透析、配制、除菌、低PH孵放、灌裝、檢定的步驟，所述層析的步驟中采用DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析柱純化分離得到層析純化液,之后的超濾透析步驟中調節層析純化液PH值至3.9^4.3，并采用連續等倍透析法對層析純化液進行過濾。通過采用上述技術方案,采用DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析柱純化分離，并在低PH值的環境下進行連續等倍透析使得靜注人免疫球蛋白成品純度高，具有低抗補體活性，提升了產品質量。本專利技術進一步設置為:所述配制、除菌、低pH孵放、灌裝、檢定的步驟中采用DV-50納米膜過濾除病毒，并通過0.2um和0.45um孔徑的除脂濾芯進行除菌過濾。通過采用上述技術方案，DV-50納米膜過濾除病毒，提高了病毒安全性，通過0.2um和0.45um孔徑的除脂濾芯進打除囷過濾可去除脂蛋白和細囷提聞廣品穩定性。本專利技術進一步設置為:所述組分I的制作與離心、組分II +III的制作和離心、組分III的制作和離心、組分II的制作和離心、層析、超濾透析、配制、除菌、低PH孵放、灌裝、檢定的步驟具體為: (I)、組分I的制作與離心，取原料血漿溫室融化，過程中保持原料血漿溫度2~4°C得到混合血漿，調節混合血漿的pH值至7.00-7.40保持液溫為-2.5^-3.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至8%(V/V)，調節離子強度為0.15，調節蛋白質濃度至4.0%~5.5%得到組分I，調節組分I的PH值至6.85~6.95保持液溫為-4.5~-5.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至20% (V/V)，調節離子強度為0.14，調節蛋白質濃度至3.5%~5.0%得到組分II + III溶液和組分I沉淀。(2)、組分II + III的制作和離心，取組分II + III溶液按28g/L血漿的量添加硅藻土，攪拌30min后壓濾，壓濾過程中過濾壓力≤2.0Kg/cm2,得到組分II + III沉淀和組分II + III上清液。(3)、組分III的制作和離心，取組分II +III沉淀加入注射用水并調節液溫至3~7°C溶解，得到組分II +III溶解液，調節組分II +III溶解液PH值至5.10-5.20,保持液溫為-4.5^-5.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至18%(V/V)，調節離子強度至0.015得到組分III，取組分III壓濾，壓濾過程中過濾壓力< 2.0Kg/cm2,得到組分III上清液和組分III沉淀。(4)、組分II的制作和離心，調節組分III上清液pH值至7.30-7.50,保持液溫-9.0--10.(TC，加入乙醇并調節乙醇濃度至25%(V/V)，調節離子強度為0.05得到組分II，對組分II進行壓濾，壓濾過程中過濾壓力(2.0Kg/cm2,得到組分II沉淀和組分II上清液。(5)、層析，取組分II沉淀加7倍沉淀量的注射用水溶解，保持液溫:T7°C，得到組分II溶解液，對組分II溶解液進行澄清過濾后調節ρΗ6.50-7.00，調節導電率至1.3~1.4ms/cm再進行DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析柱純化分離,得到層析純化液。 (6)、超濾透析，調節層析純化液pH值至3.9^4.3后進行超濾透析，超濾透析過程中采用連續等倍透析法進行過濾，之后調節麥芽糖含量至9.0-11.0%，蛋白含量5(T65g/L，經筒式過濾器除菌之后在23~25°C恒溫下低PH孵放21天，得到靜注人免疫球蛋白原液。(7)、配制、除菌、低pH孵放、灌裝、檢定，調節靜注人免疫球蛋白原液的蛋白含量高于50g/L，麥芽糖含量9.(Til.0%，之后DV-50的納米膜對靜注人免疫球蛋白原液進行過濾除病毒過濾，再通過0.2um和0.45um孔徑的除脂濾芯進行除菌過濾，最后經過無菌灌裝、二次燈檢之后包裝入庫得到靜注人免疫球蛋白成品。通過采用上述技術方案，在制作組分I沉淀、組分II沉淀和組分III沉淀再分離的過程中無需進行靜置和離心的操作，簡化了生產工藝，提升了加工效率。且各個步驟的乙醇濃度、溫度、PH值等工藝參數更加科學合理保證了靜注人免疫球蛋白成品的高純度、低抗補體活性的特性，提升了產品質量。【附圖說明】圖1為本專利技術靜注人免疫球蛋白生產方法實施例的流程圖。【具體實施方式】參照圖1對本專利技術靜注人免疫球蛋白生產方法實施例做進一步說明。，依次包括組分I的制作與離心、組分II +III的制作和離心、組分III的制作和離心、組分II的制作和離心、層析、超濾透析、配制、除菌、低PH孵放、灌裝、檢定的步驟具體為: (I)、組分I的制作與離心，取原料血漿溫室融化，過程中保持原料血漿溫度2~4°C得到混合血漿，調節混合血漿的pH值至7.00-7.40保持液溫為-2.5^-3.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至8%(V/V)，調節離子強度為0.15，調節蛋白質濃度至4.0%~5.5%得到組分I，調節組分I的PH值至6.85~6.95保持液溫為-4.5~-5.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至20% (V/V)，調節離子強度為0.14，調節蛋白質濃度至3.5%~5.0%得到組分II + III溶液和組分I沉淀(可用于制作限位蛋白原)。(2)、組分II +III的制作和離心，取組分II +III溶液按28g/L血漿的量添加硅藻土，攪拌30min后壓濾，壓濾過程中過濾壓力≤2.0Kg/cm2,得到組分II + III沉淀和組分II + III上清液(可用于制作人血白蛋白)。(3)、組分III的制作和離心，取組分II +III沉淀加入注射用水并調節液溫至3~7°C溶解，得到組分II +III溶解液，調節組分II +III溶解液PH值至5.10-5.20,保持液溫為-4.5^-5.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至18%(V/V)，調節離子強度至0.015得到組分III，取組分III壓濾，壓濾過程中過濾壓力≤ 2.0Kg/cm2,得到組分III上清液和組分III沉淀。(4)、組分II的制作和離心，調節組分III上清液PH值至7.30-7.50,保持液溫-9.0--10.(TC，加入乙醇并調節乙醇濃度至25%(V/V)，調節離子強度為0.05得到本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種靜注人免疫球蛋白生產方法，主要依次包括組分I的制作與離心、組分Ⅱ+Ⅲ的制作和離心、組分Ⅲ的制作和離心、組分Ⅱ的制作和離心、層析、超濾透析、配制、除菌、低pH孵放、灌裝、檢定的步驟，其特征是：所述層析的步驟中采用DEAE?Sepharose?Fast?Flow離子交換層析柱純化分離得到層析純化液，之后的超濾透析步驟中調節層析純化液pH值至3.9~4.3，并采用連續等倍透析法對層析純化液進行過濾。
【技術特征摘要】
1.一種靜注人免疫球蛋白生產方法，主要依次包括組分I的制作與離心、組分II +III的制作和離心、組分III的制作和離心、組分II的制作和離心、層析、超濾透析、配制、除菌、低PH孵放、灌裝、檢定的步驟，其特征是:所述層析的步驟中采用DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析柱純化分離得到層析純化液，之后的超濾透析步驟中調節層析純化液PH值至3.9^4.3，并采用連續等倍透析法對層析純化液進行過濾。2.根據權利要求1所述的靜注人免疫球蛋白生產方法，其特征是:所述配制、除菌、低PH孵放、灌裝、檢定的步驟中采用DV-50納米膜過濾除病毒，并通過0.2um和0.45um孔徑的除脂濾芯進行除菌過濾。3.根據權利要求2所述的靜注人免疫球蛋白生產方法，其特征是所述組分I的制作與離心、組分II + III的制作和離心、組分III的制作和離心、組分II的制作和離心、層析、超濾透析、配制、除菌、低pH孵放、灌裝、檢定的步驟具體為: (1)、組分I的制作與離心，取原料血漿溫室融化，過程中保持原料血漿溫度2~4°C得到混合血漿，調節混合血漿的pH值至7.00-7.40保持液溫為-2.5^-3.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至8%(V/V)，調節離子強度為0.15，調節蛋白質濃度至4.0%~5.5%得到組分I，調節組分I的PH值至6.85~6.95保持液溫為-4.5~-5.5°C，加入乙醇并調節乙醇濃度至20% (V/V)，調節離子強度為0.14，調節蛋白質濃度至3.5%~5.0%得到組分II + III溶液和組分I沉淀； (2)、組分II+III的制作和離心，取組分II +III溶液按28g/L血漿的量添加硅藻土，攪拌30min后壓濾，壓濾過程中過濾壓力≤2.0Kg/cm2，得到組分II + III沉淀和組分II + III上清液； ...
【專利技術屬性】
技術研發人員：沈榮杰，湯浩宇，萬天金，莊建芬，胡云剛，
申請(專利權)人：浙江海康生物制品有限責任公司，
類型：發明
國別省市：浙江;33
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