本發明專利技術涉及局灶性節段性腎小球硬化的蛋白標志物。更特別地，本發明專利技術涉及選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分，在制備人局灶性節段性腎小球硬化疾病發展過程中的診斷試劑中的用途，所述一種或多種蛋白選自α1抗蛋白酶、α白蛋白、血清白蛋白、β-2-微球蛋白、銅藍蛋白、胎球蛋白-B、激肽原、血清轉鐵蛋白、羧酸酯酶、免疫球蛋白γ-2A鏈C區、纖維蛋白溶解酶原、溶酶體酸性磷酸酶、蛋白YIPF3、鋅α2糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、蛋白AMBP、或T細胞免疫球蛋白。具體而言，本發明專利技術涉及利用大鼠模型和質譜分析獲得的人局灶性節段性腎小球硬化尿蛋白潛在標志物的用途。
【技術實現步驟摘要】
局灶性節段性腎小球硬化的蛋白標志物
本專利技術涉及人局灶性節段性腎小球硬化相關的蛋白標志物。具體而言，本專利技術涉及利用阿霉素大鼠腎病模型和質譜分析獲得的人局灶性節段性腎小球硬化與疾病嚴重程度相關的蛋白標志物的用途。
技術介紹
尿蛋白質組學在腎臟疾病研究中的意義:不同于血液有維持內環境穩態的能力，尿液更容易產生變化，這些變化反映身體機能的改變，即尿液是生物標志物的重要來源，參見Youhe G.Can urine be the gold minefor biomarker discovery?.Sci China Life Sci2013;43.。尿液常可以在一定程度表現出泌尿系統的功能，利用尿液變化診斷腎臟疾病方便簡單。泌尿系統功能變化不易察覺，目前診斷方法主要依賴于活組織檢查，使早期診斷、早期治療、提高治愈率十分困難。尿蛋白質組主要由通過腎小球濾過的血漿蛋白質和腎臟、泌尿道分泌蛋白質共同組成，所以腎臟和泌尿道功能的變化可以通過尿蛋白質組反映出來，其高敏感性使之成為尋找泌尿系統損傷的生物標志物的重要方法。尿液作為腎臟的主要輸出物，在反映腎臟狀況方面具有得天獨厚的優勢，并且可以很容易大量地、無創性地獲得，因此尿檢常被稱為體外的腎活檢，在臨床上具有重要的診斷意義。局灶性節段性腎小球硬化(FSGS)是引起腎病綜合癥的一種常見的腎小球病變，占兒童腎病綜合癥的20 %,占成人的40%，發病率大約為7/100萬，患者常通過尿液變化發現患病，確診方法主要依賴于腎臟活組織檢查，參見Kitiyakara C，Kopp JB, EggersP.Trends in the epidemiology of focal segmental glomerulosclerosis.SeminNephrol2003;23:172-82。FSGS是由于腎小球濾過屏障受損引起的，病理改變包括系膜硬化、足細胞數量減少、腎小管和Bowman’ s囊融合,其中，足細胞損害起著重要作用，參見D’Agati VD, KaskelFJ, Falk RJ.Focal segmental glomerulosclerosis.The New England journal ofmedicine2011; 365:2398-411。目前研究主要通過比較對照組和疾病組尿蛋白質組的不同尋找疾病標志物，通常反映某一時間點的尿蛋白差異，有很大的局限性，主要體現在:(I)實驗設計方面，針對某一疾病狀態的研究，不能區分疾病嚴重程度。沒有完整全面的尿蛋白組學的數據說明機體從病變初始直至腎臟衰竭的整個過程中尿液蛋白質組的變化，無法診斷疾病的病程，實用性不強。(2)臨床病人發現腎臟病變多處于疾病中晚期，得到的生物標志物多體現在腎臟功能衰竭時，對早期診斷、早期治療、提高患者生存率幫助不大。(3)在血尿素氮、肌酐等血清學指標未出現變化之前，利用蛋白質組學這種相對敏感的方法，能否可以從尿液中尋找標志物沒有定論。(4)對于疾病發生發展過程中機體的病理生理變化未有明確認識。(5)傳統的2-DE方法主要針對高豐度蛋白，應用有很大的局限性，不夠全面。阿霉素腎病(ADN)大鼠模型通過誘導足細胞損害模擬FSGS損傷，是成熟的FSGS動物模型，已被用來研究FSGS發病機制，測試藥物療效等，參見Zheng Z, Schmidt-OttKM, Chua S,等人.A Mendelian locus on chromosome 16determines susceptibility todoxorubicin nephropathy in the mouse.Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America2005; 102:2502-7。利用該動物模型模擬FSGS的發病過程，觀察腎臟從正常、輕微病變到嚴重患病的整體變化，對臨床上診斷不同時期FSGS病變有指導意義。
技術實現思路
因此，本專利技術的技術目的在于利用阿霉素大鼠腎病模型和質譜分析獲得的人局灶性節段性腎小球硬化病情相關的尿蛋白標志物，以利用其檢測受試者健康狀態、監測局灶性節段性腎小球硬化疾病嚴重程度以及治療進程和/或評估腎臟疾病預后。換言之，本研究結合蛋白質組學技術和動物模型，研究局灶性節段性腎小球硬化病情相關的生物標志物，用于局灶性節段性腎小球硬化的早期發現，治療過程中的監測，和預后評價。本專利技術發現了一系列用于局灶性節段性腎小球硬化早期診斷、治療過程中檢測和預后評估的蛋白生物標志物。本專利技術為了尋找到人局灶性節段性腎小球硬化病情嚴重程度相關的蛋白標志物，利用阿霉素動物模型，ConA富集排除掉高豐度蛋白的影響。在疾病進展過程中獲得實驗動物尿液，利用質譜技術對疾病發生過程中的尿蛋白組進行鑒定，獲得局灶性節段性腎小球硬化病情嚴重程度相關蛋白。對所獲得的蛋白質組數據經過嚴格的生物信息學分析，獲得能夠反映局灶性節段性腎小球硬化的不同病變階段、用于該疾病早期診斷、治療過程中檢測和預后評估的蛋白生物標志物。本專利技術發現與人局灶性節段性腎小球硬化病情嚴重程度相關的尿蛋白標志物，其中未被報道的以蛋白Uniprot號顯示為43個。本專利技術提供了選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分，在制備人局灶性節段性腎小球硬化疾病發展過程中的診斷試劑中的用途，所述一種或多種蛋白選自α I抗蛋白酶、α白蛋白、血清白蛋白、β_2-微球蛋白、銅藍蛋白、胎球蛋白-B、激肽原、血清轉鐵蛋白、羧酸酯酶、免疫球蛋白Y -2Α鏈C區、纖維蛋白溶解酶原、溶酶體酸性磷酸酶、蛋白HPF3、鋅α 2糖蛋白、a-2-HS-糖蛋白、蛋白AMBP、T細胞免疫球蛋白。各蛋白相對應uniprot 號為 P01009、P43652、P02768、P61769、P00450、Q9UGM5、P01042、P02787、P23141、P01859、P00747、P11117、Q9GZM5、P25311、P02765、P02760、Q96D42。“結合部分”意思是能夠結合至上述蛋白或編碼所述蛋白質的mRNA的分子或實體。另一方面，本專利技術提供了選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分，在制備人局灶性節段性腎小球硬化疾病發展過程中的診斷試劑中的用途，其中所述一種或多種蛋白選自α I抗蛋白酶、α白蛋白、血清白蛋白、β-2-微球蛋白、銅藍蛋白、胎球蛋白-B、激肽原、血清轉鐵蛋白、羧酸酯酶、免疫球蛋白Y-2Α鏈C區、纖維蛋白溶解酶原、溶酶體酸性磷酸酶、蛋白YIPF3、鋅α 2糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、蛋白ΑΜΒΡ、Τ細胞免疫球蛋白。進一步地，所述結合部分包含多肽或由多肽組成。進一步地，所述結合部分包含抗體或其抗原結合片段或變體，或由抗體或其抗原結合片段或變體組成。我們定義“選擇性結合”包括相對于另外的多肽更強地結合至所述蛋白的結合部分；優選所述結合為強至少10倍，優選強至少50倍和甚至更優選強至少100倍。優選結合部分只結合至所述蛋白。本文使用的術語“多肽”意思是多種氨基酸通過肽鍵連接在一起。術語“肽”可以與術語“多肽”交換使用，但是肽可以由兩種或兩種以上的多肽組成。進一步地，所述診斷試劑用于檢測受試者健康狀態、本文檔來自技高網...
【技術保護點】
選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分在制備人局灶性節段性腎小球硬化疾病發展過程中的診斷試劑中的用途，其中，所述一種或多種蛋白選自α1抗蛋白酶、α白蛋白、血清白蛋白、β?2?微球蛋白、銅藍蛋白、胎球蛋白?B、激肽原、血清轉鐵蛋白、羧酸酯酶、免疫球蛋白γ?2A鏈C區、纖維蛋白溶解酶原、溶酶體酸性磷酸酶、蛋白YIPF3、鋅α2糖蛋白、α?2?HS?糖蛋白、蛋白AMBP、或T細胞免疫球蛋白。
【技術特征摘要】
1.選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分在制備人局灶性節段性腎小球硬化疾病發展過程中的診斷試劑中的用途，其中，所述一種或多種蛋白選自α I抗蛋白酶、α白蛋白、血清白蛋白、β_2-微球蛋白、銅藍蛋白、胎球蛋白-B、激肽原、血清轉鐵蛋白、羧酸酯酶、免疫球蛋白Υ-2Α鏈C區、纖維蛋白溶解酶原、溶酶體酸性磷酸酶、蛋白HPF3、鋅α2糖蛋白、a -2-HS-糖蛋白、蛋白ΑΜΒΡ、或T細胞免疫球蛋白。2.根據權利要求1所述的用途，其中所述一種或多種蛋白相對應的unipiOt號為P01009、P43652、P02768、P61769、P00450、Q9UGM5、P01042、P02787、P23141、P01859、P00747、P11117、Q9GZM5、P25311、P02765、P02760、Q96D42。3.根據權利要求1或2所述的用途，其中所述結合部分包含多肽或由多肽組成。4.根據權利要求3所述的用途，其中所述結合部分包含抗體或其抗原結合片段或變體，或由抗體或其抗原結合片段 或變體組成。5.根據權利要求1至4任一項所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：高友鶴，趙敏迪，
申請(專利權)人：中國醫學科學院基礎醫學研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11
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