本發明專利技術提出了一種甾體激素類物質重要中間體的11α羥化制備方法，用于解決現有的微生物轉化甾體C11α羥化的轉化率低且環境不友好的問題，包括如下步驟：菌種繁殖：將赭曲霉菌或黑根酶菌菌種接入對應的種子培養基中培養；底物乳化：將底物17α-羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16,17-α環氧黃體酮中的一種在表面活性劑的作用下進行乳化處理；發酵培養：將第一步得到的赭曲霉菌或黑根酶菌接入對應的發酵培養基中培養一段時間后，再添加滅菌后的17α-羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16,17-α環氧黃體酮中的一種的乳化液繼續進行發酵培養；成品提取。本發明專利技術具有轉化率高、污染少、環保壓力小等優勢。
【技術實現步驟摘要】
一種留體激素類物質重要中間體的11 α羥化制備方法
[0001 ] 本專利技術涉及留體藥物的微生物轉化
，特別是指一種留體激素類物質重要中間體的Ila羥化制備方法。
技術介紹
皮質激素是腎上腺皮質合成和分泌的一類留體化合物，主要功能是調節動物體內的水鹽代謝和糖代謝。留體的Clla羥化是各種皮質激素合成不可缺少的一步，留體上羥基對于化學合成來說非常困難，除留體的C17位上易引入一個羥基，其他位置都很難以化學方法導入。留體Clla羥化是微生物特有的轉化反應，這不僅解決藥物合成合成困難的問題，更重要的意義是增加了皮質激素類化合物活力，使其具有高度抑制炎癥效應，通過微生物的Cll α羥化還為尋找更有效新藥開創了一個新途徑。微生物轉化留體Cll α羥化通常分兩個階段，第一階段為菌體生長階段；第二階段為投入底物階段。目前常用的處理底物方式為以溶媒溶解底物后投入一定菌濃的發酵液中進行進一步轉化培養。其中常用的溶媒有丙二醇、乙醇、丙酮、甲醇等。但是這些溶媒對轉化酶系具有毒性，從而影響底物轉化率，限制了其在工業中的應用推廣。
技術實現思路
本專利技術提出了一種甾體激素類物質重要中間體的11 α羥化制備方法，用于解決現有的微生物轉化留體Cll α羥化的轉化率低且環境不友好的問題。本專利技術的技術方案是這樣實現的:一種留體激素類物質重要中間體的11 α羥化制備方法，包括如下步驟:第一步，菌種繁殖:將赭曲霉菌或黑根酶菌菌種接入對應的種子培養基中培養；第二步，底物乳化:將底物17 α -羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16，17-α環氧黃體酮中的一種在表面活性劑的作用下進行乳化處理；第三步，發酵培養:將第一步得到的赭曲霉菌或黑根酶菌接入對應的發酵培養基中培養一段時間后，再添加滅菌后的17 α-羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16，17-α環氧黃體酮中的一種的乳化液繼續進行發酵培養；第四步，成品提取。 優選的，第二步中底物17 α-羥基黃體酮對應的表面活性劑為吐溫80、對應的轉化菌為赭曲霉菌，第三步中發酵培養基中底物17 α -羥基黃體酮或4-雄烯二酮的質量分數為1.5-3.0%、吐溫80的質量分數為0.01-0.2% ο優選的，第二步中底物16，17-α環氧黃體酮對應的表面活性劑為苯磺酸鈉、對應的轉化菌為黑根酶菌，第三步中發酵培養基中底物16，17-α環氧黃體酮的質量分數為2-3.5%、苯磺酸鈉的質量分數為0.01-0.2%。優選的，第二步底物17 α -羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16，17-α環氧黃體酮的乳化的溫度均為50-70°C。優選的，第一步菌種繁殖的具體操作為:將7-10支IL的赭曲霉菌或黑根酶菌茄子瓶斜面制備為孢子懸液接于種子罐中進行培養，其中每支茄子瓶斜面孢子量為IOic1-1O12個。優選的，第三步發酵培養的具體操作為:24_30h后，將第一步得到的種子培養液以5-20%的接種量移入發酵培養基中進行培養；12-24h后，將滅菌后的17α-羥基黃體酮乳化液、4-雄烯二酮乳化液或16，17-α環氧黃體酮乳化液中的一種移入發酵培養基中進行轉化培養。優選的，種子培養基中包括如下濃度的組分:葡萄糖25_30g/L，玉米漿20_30g/L，蛋白胨10-15g/L，酵母膏5-10g/L，泡敵0.03% -0.04% ;發酵培養基中包括如下濃度的組分:葡萄糖15-30g/L，蛋白胨10-15g/L，玉米漿20-35g/L，酵母膏5-10g/L，泡敵0.03% -0.2%，硫酸銨0.2-lg/L，磷酸二氫鉀0.2-lg/L ;種子培養基與發酵培養基的pH均為 3-6。優選的，種子培養基中包括如下濃度的組分:葡萄糖30_50g/L，玉米漿5_20g/L，硫酸銨l_3g/L，棉 籽餅粉10-20g/L ;發酵培養基中包括如下濃度的組分:葡萄糖30-50g/L，玉米漿30-50g/L，硫酸銨l_3g/L，磷酸氫二鉀0.3-0.7g/L，棉籽餅粉10_20g/L，蠶蛹粉2-5g/L ;種子培養基與發酵培養基的pH均為3-6。優選的，第三步發酵培養的條件為:溫度25_30°C，壓力0.03-0.1Mpa，攪拌速度150-250rpm，溶氧量 15-50%。優選的，第四步成品提取的具體操作為:首先，將第三步得到的發酵液進行過濾，得到濾餅；其次，用至少3倍量的丙酮或乙醇將濾餅溶解、過濾并對所得的濾液進行多次萃取脫色后加熱蒸餾，得粗品；最后，用至少6倍量的正己烷、氯仿、苯或甲苯中的一種或多種將上述粗品溶解、脫色、蒸餾，最終得到純度達到98.5%以上的精品。本專利技術提出的一種留體激素類物質重要中間體的11 α羥化制備方法，具有以下有益效果:1、提高了底物的利用率，使得底物17 α -羥基黃體酮或4-雄烯二酮的轉化率高達98%,16, 17-α環氧黃體酮的轉化率高達70% ；2、與傳統化學合成方法相比，大大縮短了生產周期，轉化效率高；3、成品提取的操作簡單、高效、環保，所得產品的純度均在98.5%以上。【附圖說明】為了更清楚地說明本專利技術實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本專利技術的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動性的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本專利技術一種留體激素類物質重要中間體的11 α羥化制備方法的流程示意圖。【具體實施方式】下面將結合本專利技術實施例中的附圖，對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。如圖1所示:一種留體激素類物質重要中間體的11 α羥化制備方法，包括如下步驟:第一步，菌種繁殖:將赭曲霉菌或黑根酶菌菌種接入對應的種子培養基中培養；第二步，底物乳化:將底物1 7 α -羥基黃體酮、4_雄烯二酮或16，17-α環氧黃體酮中的一種在表面活性劑的作用下進行乳化處理；第三步，發酵培養:將第一步得到的赭曲霉菌或黑根酶菌接入對應的發酵培養基中培養一段時間后，再添加滅菌后的17α-羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16，17-α環氧黃體酮中的一種的乳化液繼續進行發酵培養；第四步，成品提取。作為一種優選的技術方案，本專利技術的再一實施例，第二步中底物17 α-羥基黃體酮或4-雄烯二酮對應的表面活性劑為吐溫80、對應的轉化菌為赭曲霉菌，第三步中發酵培養基中底物17 α -羥基黃體酮或4-雄烯二酮的質量分數為1.5-3.0 %、吐溫80的質量分數為 0.01-0.2%。作為一種優選的技術方案，本專利技術的再一實施例，第二步中底物16，17-α環氧黃體酮對應的表面活性劑為苯磺酸鈉、對應的轉化菌為黑根酶菌，第三步中發酵培養基中底物16，17-α環氧黃體酮的質量分數為2-3.5%、苯磺酸鈉的質量分數為0.01-0.2%。底物17 α -羥基黃體酮或4-雄烯二酮優選的轉化菌為赭曲霉菌，其在適量赭曲霉菌的作用下轉化率可以高達98%，同等條件下若選擇黑根酶菌，底物17 α -羥基黃體酮或4-雄烯二酮的轉化率非常低；而對于底物16，17-α環氧黃體酮而言，其優選的轉本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種甾體激素類物質重要中間體的11α羥化制備方法，其特征在于：包括如下步驟：第一步，菌種繁殖：將赭曲霉菌或黑根酶菌菌種接入對應的種子培養基中培養；第二步，底物乳化：將底物17α?羥基黃體酮、4?雄烯二酮或16,17?α環氧黃體酮中的一種在表面活性劑的作用下進行乳化處理；第三步，發酵培養：將第一步得到的赭曲霉菌或黑根酶菌接入對應的發酵培養基中培養一段時間后，再添加滅菌后的17α?羥基黃體酮、4?雄烯二酮或16,17?α環氧黃體酮中的一種的乳化液繼續進行發酵培養；第四步，成品提取。
【技術特征摘要】
1.一種留體激素類物質重要中間體的Ila羥化制備方法，其特征在于:包括如下步驟: 第一步，菌種繁殖: 將赭曲霉菌或黑根酶菌菌種接入對應的種子培養基中培養； 第二步，底物乳化: 將底物17 α-羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16，17-α環氧黃體酮中的一種在表面活性劑的作用下進行乳化處理； 第三步，發酵培養: 將第一步得到的赭曲霉菌或黑根酶菌接入對應的發酵培養基中培養一段時間后，再添加滅菌后的17 α-羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16，17-α環氧黃體酮中的一種的乳化液繼續進行發酵培養； 第四步，成品提取。2.根據權利要求1所述的一種留體激素類物質重要中間體的11α羥化制備方法，其特征在于:所述第二步中底物17 α -羥基黃體酮或4-雄烯二酮對應的表面活性劑為吐溫80、對應的轉化菌為赭曲霉菌，所述第三步中發酵培養基中底物17 α -羥基黃體酮或4-雄烯二酮的質量分數為1.5-3.0%、吐溫80的質量分數為0.01-0.2%。3.根據權利要求1所述的一種留體激素類物質重要中間體的11α羥化制備方法，其特征在于:所述第二步中底物16，17-α環氧黃體酮對應的表面活性劑為苯磺酸鈉、對應的轉化菌為黑根酶菌，所述第三步中發酵培養基中底物16，17-α環氧黃體酮的質量分數為2.0-3.5%、苯磺酸鈉的質量分數為0.01-0.2%。4.根據權利要求1所述的一種留體激素類物質重要中間體的Ila羥化制備方法，其特征在于:所述第二步底物17 a -羥基黃體酮、4-雄烯二酮或16，17- α環氧黃體酮的乳化的溫度均為50_70°C。5.根據權利要求1所述的一種留體激素類物質重要中間體的11α羥化制備方法，其特征在于:所述第一步菌種繁殖的具體操作為:將7-10支IL的赭曲霉菌或黑根酶菌茄子瓶斜面制備為孢子懸液接于種子罐中進行培養，其中每支茄子瓶斜面孢子量為IOic1-1O12個。6.根據權利要求1所述的一種留體激素類物質重要中間體的11α羥化制備方法，其特征在于:所述第三步發酵培養的具體操作為:24-30h后，將所述第一步得到的種子培養液以5-20%的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：宋浩雷，張耀勛，張敏然，楊科，
申請(專利權)人：河北眾盛生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：河北;13
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