一種牡丹基因組DNA分子標(biāo)記方法技術(shù)

一種牡丹基因組DNA分子標(biāo)記方法，提取牡丹基因組DNA進(jìn)行酶切，將酶切產(chǎn)物和接頭DNA連接；將連接產(chǎn)物與預(yù)擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物；取所得到預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物與用內(nèi)切酶接頭選擇性擴(kuò)增引物iPBS引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得PCR選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物；然后取PCR選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物，加入染色液并點(diǎn)樣進(jìn)行電泳，電泳完成后，銀染，觀察、拍照，分析結(jié)果。本發(fā)明專利技術(shù)是建立在PCR與酶切基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記技術(shù)，操作簡(jiǎn)單；成本低，適用性強(qiáng)；針對(duì)牡丹基因組研究技術(shù)而設(shè)計(jì)，開發(fā)了一種新的基于反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的分子標(biāo)記體系，為牡丹的種質(zhì)資源遺傳變異和進(jìn)化研究提供新的技術(shù)手段。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種牡丹基因組DNA分子標(biāo)記方法，其特征在于：其具體操作步驟為：步驟一、提取牡丹基因組DNA；步驟二、牡丹基因組DNA的酶切：用限制性內(nèi)切酶Mse?I和限制性內(nèi)切酶EcoR?I對(duì)上述步驟一所提取的基因組DNA進(jìn)行酶切，得到基因組DNA酶切產(chǎn)物；步驟三、酶切產(chǎn)物和接頭DNA連接：將所得基因組DNA酶切產(chǎn)物、Mse?I接頭引物、EcoR?I接頭引物、T4?DNA連接酶和稀釋10倍后的連接緩沖液混合均勻后在溫度為16℃的條件下保溫30min，得到連接產(chǎn)物；所述的Mse?I接頭引物序列包括Mse?I?5“端接頭引物和Mse?I?3“端接頭引物，其堿基序列如序列表序列1和序列2；所述的EcoR?I接頭引物序列包括EcoR?I?5“端接頭引物和EcoR?I?3“端接頭引物，其堿基序列如序列表序列3和序列4；步驟四、連接產(chǎn)物的預(yù)擴(kuò)增：（1）、取上述步驟三所得部分連接產(chǎn)物，將其與用雙蒸水稀釋10倍后的Buffer、含Mg2+的溶液、dNTPs、用雙蒸水稀釋至20μmol/L的Mse?I預(yù)擴(kuò)增引物、Taq酶和雙蒸水混合后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到Mse?I預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物；（2）、取上述步驟三所得剩余連接產(chǎn)物，將其與用雙蒸水稀釋10倍后的Buffer、含Mg2+的溶液、dNTPs、用雙蒸水稀釋至20μmol/L的EcoR?I預(yù)擴(kuò)增引物、Taq酶和雙蒸水混合后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到EcoR?I預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物；所述的Mse?I預(yù)擴(kuò)增引物，其堿基序列如序列表序列5；所述EcoR?I預(yù)擴(kuò)增引物，其堿基序列如序列表序列6；步驟五、選擇性擴(kuò)增：取上述步驟四得到的Mse?I預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物和EcoR?I預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物，分別用雙蒸水稀釋20?40倍后，將其與用雙蒸水稀釋至20μmol/L的內(nèi)切酶接頭選擇性擴(kuò)增引物、用雙蒸水稀釋至20μmol/L的iPBS引物、Taq酶、dNTPs、稀釋10倍后的緩沖液和雙蒸水混合均勻后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得PCR選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物；所述內(nèi)切酶接頭選擇性擴(kuò)增引物為堿基序列如序列表序列7、序列8和序列9的Mse?I選擇性擴(kuò)增引物中的任意一條，或者堿基序列如序列表序列10和序列11的EcoR?I選擇性擴(kuò)增引物中的任意一條；所述的iPBS引物為堿基序列如基因序列表序列12至序列52中引物的任意一條；步驟六、將所得PCR選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳觀察結(jié)果。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郭大龍，侯小改，段亞賓，魏冬峰，呂靜霞，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：河南科技大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：