一種白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的檢測方法技術

一種白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的檢測方法，涉及一種白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的檢測方法。本發明專利技術是要解決現有方法不能完全分離三種物質、檢測結果不準確的問題。該方法按以下步驟進行：一、利用超聲波輔助技術提取白樺樹皮提取液，二、采用反相高效液相色譜法，對三種物質進行定性定量分析。該方法對三種三萜類物質提取工藝簡單，容易實施，提取率較高；檢測手段先進，分離效果好，靈敏度高，具有良好的重現性和穩定性。適用于白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的含量分析。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的檢測方法。
技術介紹
三職類(triterpenoids)化合物是一類基本母核由30個碳原子組成的,在生源關系上由鯊烯(squalene)衍生而來的萜類化合物，在植物中分布廣泛，具有廣泛的藥理活性，具有溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低膽固醇、殺軟體動物、抗生育等活性。白樺脂醇、白樺脂酸和齊墩果酸均是重要的三萜化合物。白樺脂醇(Betulin)，又名樺木腦，屬于羽扇豆烷型的五環三萜類化合物，分子式為C30H50O2,相對分子質量442.72，白色針晶，熔點256 257 V，溶于乙醇、氯仿和苯，微溶于冷水、石油醚等，存在于多種植物中，尤其在白樺樹皮中的含量較高。白樺脂醇具有重要的藥理作用，實驗表明，白樺脂醇及其衍生物作為生物抑制劑在HIV和癌癥治療方面表現出了巨大的潛能。同時，白樺脂醇具有消炎、抗病毒、抗氧化、抑制頭發纖維中蛋白質溶解、改善受損頭發光澤、促進頭發生長等活性，可應用于食品、化妝品及醫藥等行業。此外，白樺脂醇作為白樺脂酸的前體，可以用來人工合成其衍生物。權利要求1.，其特征在于上述方法包括以下步驟: 一、白樺樹皮提取液的制備:將白樺樹皮在超低溫條件下，以26 30Hz頻率研磨I 3min，研磨后得到的粉末在80°C烘箱中烘干，向烘干得到的白樺樹皮粉末中加入無水乙醇，超聲提取55 65min，取上清液用有機濾膜過濾，即得到白樺樹皮提取液，其中所述的烘干后的白樺樹皮粉末和無水乙醇的質量與體積比為(0.5 2.0) g =IOOmL ； 二、將白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的標準品分別用無水乙醇配制成7種標準工作液； 三、將標準工作液與步驟一中得到的白樺樹皮提取液依次注入高效液相色譜儀，以體積百分含量0.1 %磷酸水溶液為水相，乙腈為有機相進行梯度洗脫； 其中，高效液相色譜條件為: 色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18色譜柱，規格為4.6.ιΧ250πιπιΧ5μπι，柱溫為30°C，流動相中有機相為乙腈，水相為體積百分含量為0.1%磷酸水溶液，流速0.5 1.2mL/min,檢測波長195nm，進樣量IOyL; 四、以標準工作液目標峰峰面積和相應物質濃度建立標準曲線，根據相應峰的保留時間和光譜圖確定目標峰，采用外標法定量計算白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸含量，即完成檢測。2.根據權利要求1中所述的，其特征在于步驟一中所述的超低溫為在液氮條件下研磨白樺樹皮。3.根據權利要求2中所述的，其特征在于步驟一中所述的以28Hz頻率研磨2min。4.根據權利要求3中所述的，其特征在于步驟一中所述的采用超聲波提取，是以無水乙醇為提取液，在超聲波頻率40kHz，功率100W，水溫48 52°C環境中，提取55 65min。5.根據權利要求4中所述的，其特征在于步驟一中所述的采用超聲波提取，是以無水乙醇為提取液，在超聲波頻率40kHz，功率100W，水溫50°C環境中，提取60min。6.根據權利要求5中所述的，其特征在于步驟一中所述的用有機濾膜過濾是采用0.45 μ m孔徑的有機濾膜。7.根據權利要求6中所述的，其特征在于步驟一中所述的烘干后的白樺樹皮粉末和無水乙醇的質量與體積比為Ig:IOOmL08.根據權利要求7所述的，其特征在于步驟二中所述的7種標準工作液白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的濃度分另1J 為:a、2.5 μ g/mL、25 μ g/mL 和 10 μ g/mL ;b、5 μ g/mL、50 μ g/mL 和 20 μ g/mL ;c、10 μ g/mL、100ug/mL 和 40 μ g/mL ;d、20 μ g/mL、200 μ g/mL 和 80 μ g/mL ;e、50 μ g/mL、500 μ g/mL 和 200 μ g/mL ;f、100 μ g/mL、1000 μ g/mL 和 400 μ g/mL ;g、150 μ g/mL、1500 μ g/mL 和600 μ g/mLο9.根據權利要求8中所述的，其特征在于步驟三中所述的梯度洗脫過程中有機相的濃度變化為線性結合“J”型和反“J”型曲線。10.根據權利要求9所述的，其特征在于步驟三中的流動相中乙腈的體積百分含量依次為55% 80%、80% 90%，、90% 100%、100% 55%。 ·全文摘要，涉及一種白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的檢測方法。本專利技術是要解決現有方法不能完全分離三種物質、檢測結果不準確的問題。該方法按以下步驟進行一、利用超聲波輔助技術提取白樺樹皮提取液，二、采用反相高效液相色譜法，對三種物質進行定性定量分析。該方法對三種三萜類物質提取工藝簡單，容易實施，提取率較高；檢測手段先進，分離效果好，靈敏度高，具有良好的重現性和穩定性。適用于白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的含量分析。文檔編號G01N30/02GK103197005SQ20131007996公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月13日 優先權日2013年3月13日專利技術者王遂, 楊傳平, 姜靜, 劉桂豐, 趙慧 申請人:東北林業大學本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的檢測方法，其特征在于上述方法包括以下步驟：?一、白樺樹皮提取液的制備：將白樺樹皮在超低溫條件下，以26～30Hz頻率研磨1～3min，研磨后得到的粉末在80℃烘箱中烘干，向烘干得到的白樺樹皮粉末中加入無水乙醇，超聲提取55～65min，取上清液用有機濾膜過濾，即得到白樺樹皮提取液，其中所述的烘干后的白樺樹皮粉末和無水乙醇的質量與體積比為（0.5～2.0）g：100mL；?二、將白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的標準品分別用無水乙醇配制成7種標準工作液；?三、將標準工作液與步驟一中得到的白樺樹皮提取液依次注入高效液相色譜儀，以體積百分含量0.1％磷酸水溶液為水相，乙腈為有機相進行梯度洗脫；?其中，高效液相色譜條件為：?色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18色譜柱，規格為4.6mm×250mm×5μm，柱溫為30℃，流動相中有機相為乙腈，水相為體積百分含量為0.1％磷酸水溶液，流速0.5～1.2mL/min，檢測波長195nm，進樣量10μL；?四、以標準工作液目標峰峰面積和相應物質濃度建立標準曲線，根據相應峰的保留時間和光譜圖確定目標峰，采用外標法定量計算白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸含量，即完成檢測。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王遂，楊傳平，姜靜，劉桂豐，趙慧，
申請(專利權)人：東北林業大學，
類型：發明
國別省市：