本發明專利技術涉及一種本可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞，其保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?No：C201318。上述雜交瘤細胞的分泌產量高，其分泌得到的抗CA125蛋白單克隆抗體具有高親和力、高特異性等優點，可廣泛應用在制備CA125蛋白的檢測領域，如檢測試劑或檢測設備的制備領域等，在特異性、靈敏度和檢測率等方面較之傳統的檢測方法或檢測試劑具有顯著的優勢。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及腫瘤免疫檢測領域，尤其是涉及一種可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞及應用。
技術介紹
CA125蛋白是1983年由Bast等人從上皮性卵巢癌抗原檢測出的一種糖蛋白。CA125蛋白是一種高分子糖蛋白，主要含半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖和N-乙酰氨基半乳糖鏈，蛋白部分富含絲氨酸，夕卜形呈環形結構，核心是2 。血漿和體液中的CA125蛋白分別與分子量約為500kD和300kD的糖蛋白結合，而具有CA125蛋白免疫活性的最小亞基為50kD。CA125蛋白存于胚胎發育中的體腔上皮細胞中，于出生后消失，但在卵巢癌細胞中又重新出現。免疫組化研究發現CA125蛋白存在于胎兒消化道上皮細胞、羊膜、成人胸膜、腹腔間皮細胞、輸卵管內皮、子宮及宮頸內膜中，但成人及胎兒的卵巢上皮細胞并未發現CA125蛋白的存在。因此，CA125蛋白主要用于輔助診斷惡性漿液性卵巢癌、卵巢上皮癌，同時也是療效考核、判斷有無復發的良好指標，開發具有分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞及特異性的抗CA125蛋白單克隆抗體具有重要的研究價值。
技術實現思路
基于此，有必要提供一種特異性強的可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞、其分泌的單克隆抗體及相關應用。一種可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞，保藏號為CCTCC No:C201318。`上述雜交瘤細胞可應用在制備CA125蛋白檢測試劑或設備領域中。一種由上述雜交瘤細胞分泌的抗CA125蛋白的單克隆抗體。上述單克隆抗體可應用在制備CA125蛋白檢測試劑或設備領域中。一種CA125蛋白酶聯免疫檢測試劑盒，所用的抗體為上述單克隆抗體。在其中一個實施例中，所述CA125蛋白酶聯免疫檢測試劑盒包括由所述單克隆抗體包被的酶標板、所述單克隆抗體與辣根過氧化物酶結合物溶液、CA125蛋白標準品溶液、顯色液、終止液、洗滌液及稀釋液。在其中一個實施例中，所述顯色液為3，3’，5，5’ -四甲基聯苯胺(TMB)顯色液；所述終止液為IM的硫酸溶液；所述洗滌液為含0.5wt%吐溫20的0.1M pH7.4的PBS溶液；所述稀釋液為含10wt%牛血清白蛋白的0.1M pH7.4的PBS溶液。一種CA125蛋白化學發光磁酶免疫測定試劑盒，所用的抗體為上述抗CA125蛋白單克隆抗體。在其中一個實施例中，所述CA125蛋白化學發光磁酶免疫測定試劑盒包括如下各組分:工作液1:辣根過氧化物酶標記的所述抗CA125蛋白單克隆抗體溶液，濃度為0.5 μ g/mL ；工作液2:生物素標記的抗CA125蛋白單克隆抗體溶液，濃度為I μ g/mL ；工作液3:偶聯鏈霉親和素的磁珠；Luminol化學發光底物；CA125 蛋白標準品溶液:濃度依次為 0U/mL、10U/mL、40U/mL、160U/mL、640U/mL、1280U/mL 及 5125U/mL ；洗滌液:含0.05%Tween20的濃度為0.0lM pH7.4的PBS溶液。上述可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞命名為CA125蛋白-A6，于2013年I月24日保藏在湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心(即中國典型培養物保藏中心)，保藏號是CCTCC No:C201318o上述雜交瘤細胞的分泌產量高，其分泌得到的抗CA125蛋白單克隆抗體具有高親和力、高特異性等優點，可廣泛應用在制備CA125蛋白的檢測領域，如檢測試劑或檢測設備的制備領域等，在特異性、靈敏度和檢測率等方面較之傳統的檢測方法或檢測試劑具有顯著的優勢。附圖說明圖1為CA125單克隆抗體(CCTCC No:C201318)的G3000分子篩層析圖譜；圖2為CA125單克隆抗體(CCTCC No:C201318)電泳圖，右側為CA125單克隆抗體(CCTCC No:C201318)； 圖3為CA125蛋白酶聯免疫檢測標準曲線；圖4為CA125蛋白化學發光磁酶免疫測定標準曲線。具體實施例方式本實施方式通過采用天然CA125蛋白作為抗原，制備得到的可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC No:C201318。該雜交瘤細胞可分泌出抗CA125蛋白的單克隆抗體。該雜交瘤細胞及其分泌的單克隆抗體可用于制備CA125蛋白的檢測試劑或設備領域中。下面結合附圖及具體實施例對可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞、其分泌的單克隆抗體及應用作進一步詳細的說明。實施例1雜交瘤細胞的建立與抗CA125蛋白單克隆抗體的制備1.抗原免疫將純化的天然CA125抗原(BioProcessing公司，產品編號83752000)作為抗原與弗氏完全佐劑(SIGMA公司，產品編號F5881)等體積混合，得到油狀乳液。將該乳液以0.2mL的劑量皮下施給BALB/c小鼠(廣州省實驗動物中心，6周齡雌性，5只)背腹部位點，第一次免疫14天后腹腔增強免疫，抗原與弗氏不完全佐劑(SIGMA公司，產品編號F5506)等體積混合，增強免疫到四針后，采尾血進行效價檢測，效價在3X IO3的時候大于0.5。融合前3天，用相同劑量抗原脾臟加強追加免疫，免疫方法同上。2.雜交瘤細胞的制備(I)飼養細胞的制備以BALB/c鼠腹腔巨噬細胞作飼養細胞，在融合前I天，BALB/c鼠拉頸處死，75%酒精全身浸泡5分鐘，在超凈臺內、無菌操作下用剪刀剪開腹部皮膚，暴露腹膜，用注射器腹腔注入RPMI1640基礎培養液5mL，反復沖洗，回收沖洗液，lOOOrpm，離心5分鐘，留沉淀，用RPMI1640篩選培養液(含HAT的RPMI1640完全培養液中)重懸，調整細胞濃度I X IO5個/mL，加入96孔板，180 u L/孔，在37°C、5%C02環境中培養過夜。(2)免疫脾細胞的制備小鼠末次免疫后第三天，在無菌條件下取出脾臟，置于平皿中，RPMI1640基礎培養液沖洗一次，放于小燒杯的尼龍網上磨碎過濾，制成細胞懸液。離心，棄上清RPMI1640基礎培養液重懸，如此重復三次,計數。(3)小鼠瘤細胞的制備小鼠瘤細胞經篩選后，培養至對數生長期，取兩大瓶制成細胞懸液，離心，棄上清，用RPMI1640基礎培養液重懸，如些重復三次，計數。(4)細胞融合及HAT選擇雜交瘤將小鼠瘤細胞與免疫脾細胞混合，在50mL塑膠離心管內用RPMI1640基礎培養液洗I次，1200rpm,離心8分鐘。棄上清，將細胞混勻，緩慢加入lmL50%的PEG1500融合，融合I分鐘后加入15mL的RPMI1640基礎培養液終止細胞融合。lOOOrpm，離心5分鐘。棄上清，用50mL的RPMI1640篩選培養液輕輕混懸，分至96孔細胞培養板中，在37°C、5%C02環境中培養。培養至第六天，換HT 培養液(含HT的RPMI1640完全培養液)兩次。(5)抗體的檢測用0.05M pH9.5碳酸緩沖溶液稀釋CA125抗原，使其終濃度為60u/mL。每孔0.1mL加入96孔聚苯乙烯板，37°C孵育2小時或4°C過夜。后用含10%小牛血清或1%脫脂奶粉的0.01M pH7.4PBS溶液，0.12mL/孔，37°C孵育2小時，用于檢測。重組融合后第七天，取細胞上清0.1mL于上述96孔檢測板中，37°C孵育30分鐘，水本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種可分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞，保藏號為CCTCCNo：C201318。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：范凌云，彭亮，張翼，劉莉莉，
申請(專利權)人：深圳市菲鵬生物股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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