一種高效疏水介質的制備方法及其在純化蛇毒降纖酶中的應用技術

一種高效疏水介質的制備方法及其在純化蛇毒降纖酶中的應用。其制備方法包括如下步驟：1）利用分散聚合法制備聚甲基丙烯酸環氧丙酯(PGMA)微球；2）以聚甲基丙烯酸環氧丙酯(PGMA)微球為基質制備高效疏水介質；高效疏水介質以20MPa壓力裝填于不銹鋼色譜柱中，然后將柱子連接液相色譜系統，用來純化蛇毒降纖酶。本發明專利技術的優點在于產品純度高、收率高、操作簡便、達到產業化要求，利于推廣。

【技術實現步驟摘要】
一種高效疏水介質的制備方法及其在純化蛇毒降纖酶中的應用
本專利技術屬于生化領域，具體涉及一種高效疏水介質的制備方法及其在純化蛇毒降纖酶中的應用。技術背景傳統疏水介質的基質通常為瓊脂糖、纖維素等軟基質，這些基質具有生物相容性好、化學穩定性好、通透性好、非特異性吸附少等優點。但較差的機械性使它們無法運用于現代聞效制備液相系統。近年發展起來的娃I父基質屬于硬基質，以其為基礎合成的疏水介質配合現代高效制備液相色譜儀使用，使疏水層析柱效獲得了空前的提升，純化效能大幅的提高。但由于硅膠自身較差的化學穩定性使其只能在低于PH8的條件下使用，當溶液pH值大于8時，硅膠容易發生溶解。當pH值大于10.7時，硅膠則完全溶解。此外硅膠表面未封閉的硅醇基容易產生非特異性吸附，這些都限制了硅膠成為一個合適的高效疏水層析基質。目前以硅膠為基質的疏水介質主要運用于化學合成小分子多肽的純化。一個優秀的基質它必須具備以下性能: 1、不溶性:基質在操作條件下不溶解于流動相。2、通透性:具有優良的水力學性能，流動相可以在適當的流速下通過。3、機械穩定性好:有合適的顆粒形狀，不會發生壓力形變，并有較長的使用壽命O4、無非特異吸附性:基質本身在層析操作條件下不會吸附蛋白質。5、化學穩定性好:在吸附、洗脫、再生的操作的條件下，分離介質的大分子鏈具有穩定的結構。聚甲基丙烯酸環氧丙酯(PGMA)微球是一種富含環氧基的功能高分子材料，既具備特定的物理結構。又有良好的化學反應性能，所以聚甲基丙烯酸環氧丙酯(PGMA)微球的應用與研究已越來越受到人們的關注。中國科學院化學研究所的趙瑩歆等以聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球(PGMA)為基質，利用還原氨化方法將肝素鍵合在其表面上，得到一種以肝素為配基的高效親和色 譜填料，填料耐壓可達20MPa以上。該填料對抗凝血酶III的親和容量為1.2 mg/g,對抗凝血酶III和人血清白蛋白的回收率分別為96.9%和94.4%。余曉等人以聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球(PGMA)為基質，以胰蛋白酶抑制劑為配基合成了高效親和色譜填料，該填料于20MPa下裝填于制備色譜柱中，用于人血清白蛋白的純化收率大于99%。楊春霞等聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球為基質，合成一種新型弱酸性陽離子色譜填料。選用甲烷磺酸作淋洗液，在流速為1.0mL/min時，對6種無機陽離子(Li+)、(Na+)、(ΝΗ；)、(K+) > (Mg2+)、(Ca2+)和有機胺進行了良好分離，此色譜柱的分離效果與Dionex1nPac CS12A商品柱接近，但分析時間縮短了 44min。因此聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球(PGMA)作為高效色譜填料基質應用前景廣闊，效果良好。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種高效疏水介質的制備方法，該方法制得的產品純度高、收率高、操作簡便。本專利技術的另一目的在于提供該高效疏水介質在純化蛇毒降纖酶中的應用，使其能夠快速、高效的純化高純度蛇毒降纖酶。本專利技術的目的是這樣來實現的，其制備方法的步驟為: O 制備聚甲基丙烯酸環氧丙酯(PGMA)微球 制備聚甲基丙烯酸環氧丙酯(PGMA)微球采用的是分散聚合方法，其單體為甲基丙烯酸環氧丙酯(GMA)，引發劑為偶氮二異丁腈(AIBN)或過氧化苯甲酰(ΒΡ0)，穩定劑為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，反應介質為一元醇或這類醇與甲苯等其它溶劑組成的混合物。各原料組分為:甲基丙烯酸環氧丙酯50-100 g、偶氮二異丁腈或過氧化苯甲酰1-2 g、聚乙烯吡咯烷酮 5-20 g、乙醇 600-800 ml、甲苯 70-200 ml。制備過程如下:將稱量好的原料加入到適當的玻璃反應瓶中，使其充分溶解并通氮氣除氧。然后置反應瓶于帶有旋轉和加熱裝置的設備上，于65-75攝氏度下聚合24-36h。反應結束后，用沉降方法除去溶劑，并用乙醇充分洗滌，即可得到顆粒分布基本呈現單分散的PGMA微球。2) 以聚甲基丙烯酸環氧丙酯(PGMA)微球為基質制備高效疏水介質 聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球富含環氧基基團，因此具有良好的化學反應性能，在催化齊U(三氟化硼乙醚)作用下可以迅速的與醇、酚反應。得到高效疏水介質。根據配基的種類不同催化劑的加入量為0.01-0.03ml/g.PGMA,反應時間為30_50min，反應溫度控制在45-50°C。以下是反應通式:本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種高效疏水介質的制備方法，其特征在于方法步驟為：1）利用分散聚合法制備聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球：各原料組分為：甲基丙烯酸環氧丙酯50?100?g、偶氮二異丁腈或過氧化苯甲酰1?2?g、聚乙烯吡咯烷酮5?20?g、乙醇600?800?ml、甲苯70?200?ml；制備過程如下：將稱量好的原料加入到適當的玻璃反應瓶中,使其充分溶解并通氮氣除氧，然后置反應瓶于帶有旋轉和加熱裝置的設備上,于65?75攝氏度下聚合24?36h，反應結束后,用沉降方法除去溶劑,并用乙醇充分洗滌,即可得到顆粒分布基本呈現單分散的聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球；2）以聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球為基質，通過化學反應接入疏水配基制備高效疏水介質：在催化劑三氟化硼乙醚的作用下，聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球與醇、酚反應，得到高效疏水介質，催化劑的加入量為0.01?0.03ml/g﹒PGMA，反應時間為30?50min，反應溫度控制在45?50℃。

【技術特征摘要】
1.一種高效疏水介質的制備方法，其特征在于方法步驟為: 1)利用分散聚合法制備聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球: 各原料組分為:甲基丙烯酸環氧丙酯50-100 g、偶氮二異丁腈或過氧化苯甲酰1-2 g、聚乙烯吡咯烷酮5-20 g、乙醇600-800 ml、甲苯70-200 ml ； 制備過程如下:將稱量好的原料加入到適當的玻璃反應瓶中，使其充分溶解并通氮氣除氧，然后置反應瓶于帶有旋轉和加熱裝置的設備上，于65-75攝氏度下聚合24-36h，反應結束后，用沉降方法除去溶劑，并用乙醇充分洗滌，即可得到顆粒分布基本呈現單分散的聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球； 2)以聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球為基質，通過化學反應接入疏水配基制備高效疏水介質: 在催化劑三氟化硼乙醚的作用下，聚甲基丙烯酸環氧丙酯微球與醇、酚反應，得到高效疏水介質，催化劑的加...

【專利技術屬性】
技術研發人員：胡小光，劉慶華，張素芳，
申請(專利權)人：南昌佰泰生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：