本發明專利技術公開了一種鎖陽多糖的制備方法和鎖陽多糖抗腫瘤制劑的制備方法，鎖陽多糖主要存在與細胞內或細胞壁中，本發明專利技術方法在提取過程中添加酶制劑，可在比較溫和的條件下降解細胞壁，并通過高速攪拌造成無細胞壁細胞破碎，促進多糖的釋放，達到提高提取率的效果。本發明專利技術方法相對于傳統的水提醇沉法可使鎖陽多糖提取率提高10-65％，并可使鎖陽多糖含量提高5-40％。本發明專利技術方法工藝簡單、提取成本較低，適合于工業化生產。采用本發明專利技術所述的方法制備鎖陽多糖提取物純度高，可直接制備鎖陽多糖制劑，具有提高免疫力、抗疲勞、抗腫瘤等多種功效，適用于腫瘤患者。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及中藥有效成分的提取方法，具體的涉及一種鎖陽多糖的制備方法和鎖陽多糖抗腫瘤制劑的制備。
技術介紹
鎖陽(Cynomorium songaricum Rupr.),又名鐵棒槌、銹鐵棒、地毛球、烏蘭高腰(蒙語)，是鎖陽科(Cynomoriaceae)鎖陽屬的單科單屬單種植物，多寄生于蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺屬(Nityaria L)植物根部,全寄生種子植物,主產于甘肅、新疆、青海、寧夏、內蒙古等地，其中尤其以甘肅河西走廊地區分布最廣。在中醫上，把鎖陽植物的去花序干燥莖用做傳統的中藥鎖陽，又名“不老藥”等。明代《本草綱目》記述:“鎖陽性溫，補腎，益精血，潤燥養精治痿弱”。《本草原始》鎖陽補陰血、祛虛火、興陽固精、強陽益髓”，中醫臨床用鎖陽補陽氣，治陽痿精虛，陰衰血竭，老年氣弱陰虛等。現代藥理學研究證明，鎖陽具有清除自由基、調節免疫等多種藥理活性。多糖是鎖陽重要的有效成分，具有提高免疫力，抗衰老，抗疲勞等多種活性。蘇韞等研究表明鎖陽多糖對D-半乳糖所致衰老模型大鼠脾臟病理變化、脾淋巴細胞免疫功能、自由基代謝相關指標等具有明顯改善作用(可參考文獻《鎖陽對衰老模型大鼠脾淋巴細胞轉化能力、脾病理學變化及血清SOD、MDA、NO水平的影響》，<中國老年學雜志>，2009年，第8期)。熊正英等研究結果表明鎖陽多糖可以提高運動訓練大鼠不同組織SOD (超氧化物歧化酶)和CAT(過氧化氫酶 )活性，降低MDA (丙二醛)含量，延長大鼠跑臺運動至力竭時間，具有抗疲勞作用(可參考文獻《鎖陽多糖對運動訓練大鼠抗氧化水平與運動能力的影響》，<遼東學院學報>，2011年，第4期)。本專利技術人研究表明鎖陽多糖在體外對宮頸癌HeLa腫瘤細胞、結腸癌SW620腫瘤細胞有明顯的生長抑制作用。目前關于鎖陽多糖提取工藝已有較多研究，已公開的專利技術專利，授權公告號為CN101580553 B，專利名稱為《一種鎖陽多糖的制備方法》，該專利的技術以中藥鎖陽為材料，采用以超聲波輔助、微波高效提取鎖陽多糖。已公開的專利技術專利，申請號為201210119296.X，專利名稱為《一種從鎖陽中制備鎖陽萜和鎖陽多糖的方法》，該專利的技術是將干燥的鎖陽藥材粉碎成粒狀物進行超臨界萃取提取鎖陽萜和鎖陽多糖。再如本行業的業類技術人員劉曄瑋等以浸膏得率和浸膏中多糖質量分數綜合評價，利用L9(33)正交實驗，從水提和醇沉兩方面優選鎖陽中水溶性多糖的最佳提取工藝條件；(可參考文獻《鎖陽多糖提取工藝的研究》，<天然產物研究與開發>，2006年，1007-1009)。王晉等以鎖陽多糖提取率為考察指標對水提醇沉提取鎖陽多糖的工藝條件進行優化，鎖陽多糖的提取最佳工藝:提取溫度為90°C，料液比為1: 10，提取時間為2h;(可參考文獻《不同條件對鎖陽多糖提取率的影響》，<內蒙古醫學院學報>，2008年，第6期，540-542)。李貴文等以多糖得率為指標，采用正交試驗考察超聲提取時間、提取溫度、料液質量比、超聲波功率4個因素對超聲提取鎖陽多糖的影響，篩選超聲輔助提取鎖陽多糖的最佳工藝；(可參考文獻《超聲輔助提取鎖陽多糖的工藝優化》，<甘肅農業大學學報>，2011年，第5期，157-160)。羅光宏等采用水提醇沉法，利用L9(33)正交試驗優選鎖陽多糖的提取工藝，用硫酸苯酚比色法對甘肅河西沙區不同地區鎖陽中多糖含量進行測定。提取最佳工藝條件為料液比1:15 (g/mL)、提取時間90min、提取次數為2次，甘肅河西沙區不同地區鎖陽多糖含量差別顯著；(可參考文獻《甘肅河西沙區鎖陽多糖提取工藝優化及含量測定》，<食品科學>，2011年，第10期，79-83)。上述方法均對鎖陽多糖提取工藝進行研究，為鎖陽活性多糖的開發提供科學依據和實驗基礎，但是在工藝推廣至工業化生產上仍存在以下不足:①傳統水提法產率較低，提取時間較長，耗能較大，提取成本較高；②微波和超聲波輔助提取鎖陽多糖有提取時間短，提取率高的特點，但相對成本較高，并且目前適合于工業生產的設備尚未成熟；③超臨界萃取鎖陽多糖具有原料利用率高，產品收率高等優點，但設備復雜，運行成本高。多糖等植物活性成分通常被包含在植物材料(如細胞壁、果膠等)中，在多糖的提取過程中，使用酶可在比較溫和的條件中分解植物組織，加速多糖的釋放或提取，達到提高提取率的效果。已授權的專利技術專利CN 101580553 B，專利名稱為《酶法輔助提取蒺藜多糖的方法》，該專利采用酶法(纖維素酶、木聚糖酶及果膠酶)輔助提取蒺藜多糖，可使多糖的提取率比不加酶處理的提高18-40.67%，純度提高15-42%。已授權的專利技術專利CN02158188.6，專利名稱為《酶處理提取黃芪多糖》，該專利的技術使用纖維素酶、半纖維素酶及蛋白酶提取黃芪多糖，相對于水提醇沉法和微波法，提取速度和提取效率均有明顯的提高。但尚未見到酶處理法提取鎖陽多糖和鎖陽多糖抗腫瘤制劑的報道。
技術實現思路
基于上述現有 技術存在的缺陷，本專利技術經試驗設計提供一種利用生物酶提取鎖陽多糖的方法，該方法工藝簡單，可提高鎖陽多糖的提取率及其多糖含量，具有條件溫和、雜質易除和得率高等優點，可實現鎖陽多糖低成本的工業化生產。采用本專利技術所述的方法制備鎖陽多糖提取物純度聞，可直接制備鎖陽多糖制劑，具有提聞免疫力，抗疲勞、抗腫瘤等多種功效，適用于腫瘤患者。本專利技術的目的是通過以下技術方案實現的:一種酶處理提取鎖陽多糖的方法及鎖陽多糖抗腫瘤制劑的制備，其特征在于包含以下步驟:I)粉碎過篩:將干燥的鎖陽粉碎后過60目篩；2)浸泡:按質量份數取I份過篩后的鎖陽粉末放入帶攪拌的提取罐內，添加10-25份的蒸餾水，然后升溫至75-90°C，并在75-90°C保溫靜置15-60分鐘；3)酶解:浸泡結束后降溫至25_55°C后添加酶制劑，并打開攪拌裝置，轉速調至20-40轉/分，25-55°C保溫攪拌1_6小時，進行酶解反應；4)滅酶和高速攪拌:將浸泡液加熱至80_95°C，轉速調至120-2000轉/分，并保溫10-20分鐘，使加入的酶制劑變性失活，并通過高速攪拌破碎細胞；5)濃縮、醇沉、過濾及干燥:將步驟4)結束后攪拌轉速調至10-40轉/分，80_95°C保溫20-60分鐘，隨后冷卻至室溫，過濾，收集濾液；得到的濾液減壓濃縮至原質量的40-60%，加入95%乙醇，使溶液中乙醇終濃度為75-85%，靜置2_4小時過濾后得到鎖陽濕多糖，真空干燥或低溫冷凍干燥，然后粉碎，即獲得鎖陽多糖成品。所述步驟3)中酶制劑為纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或幾種，酶的加入量為鎖陽粉末質量5%。-10% ;蛋白酶可使糖蛋白和蛋白聚糖中游離的蛋白質水解，降低它們對原料的結合力，有利于多糖的浸出；纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶水解纖維素、半纖維素和果膠，使植物組織細胞的細胞壁破裂，多糖易從胞內或細胞壁釋放。一種酶處理提取鎖陽多糖的方法及鎖陽多糖抗腫瘤制劑的制備，其特征是采用本專利技術所述的方法制備鎖陽多糖提取物純度高，可加入賦型劑或矯味劑和防腐劑制成抗腫瘤膠囊制劑或抗腫瘤口服液。本專利技術的有益效果是:I)鎖陽多糖主要存在與細胞內或細胞壁中，本專利技術方法本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種酶處理提取鎖陽多糖的方法，其特征在于，所述酶處理提取鎖陽多糖的方法包含以下步驟：1)粉碎過篩：將干燥的鎖陽粉碎后過60目篩；2)浸泡：按質量份數取1份過篩后的鎖陽粉末放入帶攪拌的提取罐內，添加10?25份的蒸餾水，然后升溫至75?90℃，并在75?90℃保溫靜置15?60分鐘；3)酶解：浸泡結束后降溫至25?55℃后添加酶制劑，并打開攪拌裝置，轉速調至20?40轉/分，25?55℃保溫攪拌1?6小時，進行酶解反應；4)滅酶和高速攪拌：將浸泡液加熱至80?95℃，轉速調至120?2000轉/分，并保溫10?20分鐘，使加入的酶制劑變性失活，并通過高速攪拌破碎細胞；5)濃縮、醇沉、過濾及干燥：將步驟4)結束后攪拌轉速調至10?40轉/分，80?95℃保溫20?60分鐘，隨后冷卻至室溫，過濾，收集濾液；得到的濾液減壓濃縮至原質量的40?60%，加入95%乙醇，使溶液中乙醇終濃度為75?85%，靜置2?4小時過濾后得到鎖陽濕多糖，真空干燥或低溫冷凍干燥，然后粉碎，即獲得鎖陽多糖成品。
【技術特征摘要】
1.一種酶處理提取鎖陽多糖的方法，其特征在于，所述酶處理提取鎖陽多糖的方法包含以下步驟: 1)粉碎過篩:將干燥的鎖陽粉碎后過60目篩； 2)浸泡:按質量份數取I份過篩后的鎖陽粉末放入帶攪拌的提取罐內，添加10-25份的蒸餾水，然后升溫至75-90°C，并在75-90°C保溫靜置15-60分鐘； 3)酶解:浸泡結束后降溫至25-55°C后添加酶制劑，并打開攪拌裝置，轉速調至20-40轉/分，25-55°C保溫攪拌1-6小時，進行酶解反應； 4)滅酶和高速攪拌:將浸泡液加熱至80-95°C，轉速調至120-2000轉/分，并保溫10-20分鐘，使加入的酶制劑變性失活，并通過高速攪拌破碎細...
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅光宏，
申請(專利權)人：甘肅凱源生物技術開發中心，
類型：發明
國別省市：
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