本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種雞新城疫、禽流感（H9亞型）、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗及其制備方法。該疫苗是針對國內(nèi)禽類疫病中，雞新城疫、H9亞型禽流感與大腸桿菌多混合感染的流行形勢，提出了一個有效應(yīng)對策略，并做到一次免疫同時防控兩種疾病。該疫苗利用雞新城疫病毒La?Sota株，H9亞型禽流感病毒LG1株和禽大源腸埃希氏菌QL1株（O1）、QL2株（O2）、QL78株（O78）、QL36株（O36）作為疫苗制備用菌毒株，經(jīng)過抗原液制備、滅活、濃縮、按照一定比例混合制備而成。本發(fā)明專利技術(shù)涉及到的雞新城疫病毒La?Sota株、H9亞型禽流感毒株、禽源大腸埃希氏菌菌株均為國內(nèi)流行菌毒株，能夠有效預(yù)防目前流行疾病。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及雞新城疫、禽流感(H9亞型)、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗，屬于獸用生物制品領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
新 城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一種禽類急性、高度接觸性傳染病。臨床上新城疫常呈敗血癥經(jīng)過，主要特征是呼吸困難，下痢一排出綠色或黃色稀糞，神經(jīng)機能紊亂一出現(xiàn)陣發(fā)性痙攣、頭頸扭轉(zhuǎn)、角弓反張、運動失調(diào)以及麻癥狀，粘膜和漿膜出血和壞死。該病發(fā)病急、致死率高，對養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展構(gòu)成嚴重的威脅，被國際獸醫(yī)局定為A類烈性傳染病，一直是影響世界養(yǎng)雞業(yè)的最主要疾病之一。禽大腸埃希氏菌病又稱禽大腸桿菌病(Avian Colibacillosis),指部分或全部由大腸埃希氏菌(Escherichiacoli,E.coli)所引起的局部或全身性感染的疾病,可以引起胚胎死亡、臍炎、敗血癥、肉芽腫、卵黃性腹膜炎和全眼球炎(Calnek Bff主編，高福，蘇敬良主譯).禽病學(xué).第10版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1999，158-171)等一系列病征，是2至12周齡的雞和火雞的一種常見傳染病，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。大腸桿菌血清型極多，已知大腸桿菌有菌體(O)抗原173種，表面(K)抗原103種，鞭毛抗原60種。病原性大腸桿菌的許多血清型可引起多種動物發(fā)病。世界許多國家已經(jīng)做了詳細調(diào)查，確定最常與禽病有關(guān)的血清型是01、02、036和078，很少分離到其他血清型。國內(nèi)學(xué)者紹華斌、霍龍飛和劉瑞田等也得出過相同結(jié)論(李樹博.當前禽大腸桿菌病的流行特點與防控措施.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī).2011.12，39-40)。低致病性禽流感(Mildlypathogenic avian influenzavirus, MPAIV)在實驗室條件下，受感染雞死亡率很低，但是和E.coli混合感染時，死亡率會有不同程度的提高，雞產(chǎn)蛋率銳減，肉雞增重減少(Swayne D E, Pathobiology of H5N2Mexican avian influenzavirus infections of chickens.Vet Pathel.1997，34 (6): 557-567)。其中，H9 亞型禽流感病毒是導(dǎo)致低致病性禽流感發(fā)生、流行的諸多因素中較為重要的一種。隨著養(yǎng)雞業(yè)的快速發(fā)展和養(yǎng)殖環(huán)境的污染，近年來蛋雞疾病尤其是傳染病不斷增多和復(fù)雜化。雞群混合感染嚴重，發(fā)病率和死亡率都較高，給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。其中，雞新城疫、低致病性禽流感和禽大腸埃希氏菌病三種疾病混合感染較為常見，損失也較為嚴重。這種背景下，研制一種可同時預(yù)防這三種疾病的疫苗顯得尤為重要。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是通過新城疫病毒La Sota株、自行分離的一株H9亞型禽流感病毒株、自行分離的四株禽源大腸埃希氏菌菌株(血清型分別為:01、02、078、036)，提供一種可同時預(yù)防雞新城疫、H9亞型禽流感和禽大腸埃希氏菌病三種疾病的疫苗，一次免疫即可預(yù)防三種疾病。為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)的技術(shù)方案在于:1.雞新城疫、禽流感(H9亞型)、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗含有雞新城疫病毒LaSota株病毒LaSota株、H9亞型禽流感病毒LGl株和禽源大腸埃希氏菌菌株血清型01的QLl株、血清型02的QL2株、血清型036的QL36株、血清型078的QL78株，以上菌株已與2013年01月31日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號:QL1株為CGMCC N0.7241，QL2株為 CGMCC N0.7242，QL36 株為 CGMCC N0.7243 和 QL78 株為 CGMCC N0.7244。2.本專利技術(shù)所述的雞新城疫、禽流感(H9亞型)、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗的制備方法:(I)分別按常規(guī)方法用雞胚繁殖雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒制備成滅活并經(jīng)濃縮的病毒液；用含0.1%微量鹽溶液的馬丁肉湯分別培養(yǎng)四型禽源大腸埃希氏菌菌株制備成滅活并經(jīng)濃縮的菌液，再按3:3:2:2的體積比例混合；(3)將以上制備的滅活并經(jīng)濃縮的雞新城疫病毒液、H9亞型禽流感病毒液與四型禽源大腸埃希氏菌滅活濃縮混合菌液按1:1:1體積比混合后制備成水相，再按常規(guī)方法制備滅活佐劑疫苗。3.給雞接種有效劑量的雞新城疫、禽流感(H9亞型)、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗能使接種雞獲得對 雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒和禽源大腸埃希氏菌國內(nèi)流行菌毒株產(chǎn)生有效預(yù)防的免疫力。具體實施方式 1.疫苗生產(chǎn)用菌毒株(1)菌毒株來源本專利技術(shù)疫苗制備用毒株為新城疫病毒La Sota株，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所鑒定、保管和供應(yīng)。本專利技術(shù)生產(chǎn)用毒株為一株H9亞型禽流感病毒株LGl株，為我單位自行分離、保存，并已經(jīng)商品化，產(chǎn)品名稱:雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)滅活疫苗，產(chǎn)品批準文號:獸藥生字(2010) 150252152。本專利技術(shù)生產(chǎn)用菌株為四株禽源大腸桿菌菌株QLl株、QL2株、QL78株、QL36，分別為四個血清型:01、02、036、078，是由本專利技術(shù)人由野外分離得到。以上菌株已與2013年01月31日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號=QLl株為CGMCC N0.7241，QL2株為CGMCCN0.7242，QL36 株為 CGMCC N0.7243 和 QL78 株為 CGMCC N0.7244。(2)菌毒株特性I)免疫原性新城疫病毒La Sota株對I月齡雛雞滴鼻免疫，最小免疫量應(yīng)< 5000EID5(I，免疫原性良好。H9亞型禽流感病毒株LGl株免疫雞HI抗體幾何平均滴度應(yīng)> 6.51og2,免疫原性良好。禽源大腸埃希氏菌菌株用I月齡SPF雞10只，每只頸部皮下注射疫苗0.3ml，21日后連同條件相同的對照雞10只，各肌肉或腹腔注射強毒菌株QLl株(01)、QL2株(02)、QL78株(078)、QL36株(036)的混合菌液0.5ml (按照菌數(shù)1:1:1:1混合，共含活菌2 5億)。觀察10日，對照雞應(yīng)全部發(fā)病或死亡，剖檢后全部具有典型病變(反應(yīng)在++以上)；免疫雞至少保護8只。判定標準:土有輕微臨床反應(yīng)，減食、排白色糞便I 3日，內(nèi)臟無肉眼可見病變。+臨床減食4日以上或停食I日以上，排黃白色糞便4日以上，剖檢見心臟或肝臟有輕度纖維素滲出性炎癥。++臨床同(+)，可見明顯心包積液及纖維素滲出性炎癥。+ + +臨床同(+)，有嚴重心包膜炎，并與肝或胸膜發(fā)生粘連。`+ + + +試驗雞死亡，其他同(+ ++ )。2)毒力雞新城疫病毒La Sota株將毒種用滅菌生理鹽水作50 150倍稀釋，尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚10個，每胚0.1 0.3ml，置36 37°C繼續(xù)孵育，雞胚于接種后24 120小時死亡70%以上，胎兒有明顯充血、出血病痕。H9亞型禽流感病毒株LGl株將毒種用滅菌生理鹽水作5 15倍稀釋，尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚20個，每胚0.1 0.3ml，置37°C孵育，在接種后48 96小時內(nèi)，至少有15個雞胚死亡。禽源大腸埃希氏菌QLl株(01)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種雞新城疫、禽流感（H9亞型）、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗，其特征是該疫苗含有滅活的雞新城疫病毒，滅活的H9亞型禽流感病毒，滅活的O1、O2、O78和O36四型禽源大腸埃希氏菌。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種雞新城疫、禽流感(H9亞型)、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗，其特征是該疫苗含有滅活的雞新城疫病毒，滅活的H9亞型禽流感病毒，滅活的01、02、078和036四型禽源大腸埃希氏菌。2.—種權(quán)利要求1所述的雞新城疫、禽流感(H9亞型)、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗的制備方法，其特征在于: (O分別按常規(guī)方法用雞胚繁殖雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒制備成滅活并經(jīng)濃縮的病毒液；用含0.1%微量鹽溶液的馬丁肉湯分別培養(yǎng)的四型禽源大腸埃希氏菌菌液，經(jīng)滅活和濃縮，再按3:3:2:2的體積比例...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：鮑海忠，鞠洪濤，宋曉飛，王蕾，徐龍濤，吳昊，
申請(專利權(quán))人：齊魯動物保健品有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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