一種Barnase基因定量PCR檢測方法及其應用技術

本發明專利技術公開了一種Barnase基因定量PCR檢測方法及其應用，涉及分子生物學及轉基因檢測技術領域。本檢測方法是：①檢索分析Barnase基因序列；②利用該序列特征設計Barnase基因特異性定量PCR檢測的引物和探針；③建立標準曲線；④定量體系的精確性驗證。本檢測方法應用于轉基因植物及其產品中Barnase基因的檢測。本發明專利技術利用發現的序列特征，首次建立Barnase基因特異性定量PCR檢測方法；適用于對轉基因作物及其衍生品、加工品中Barnase基因的檢測、監測和安全管理。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種Barnase基因定量PCR檢測方法，其特征在于：①檢索分析Barnase基因序列將NCBI數據庫（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中檢索的Barnase基因序列(Genbank?Accession?No.?M14442.1)與轉基因油菜MS1、MS8中的進行比對，確定了Barnase基因的檢測靶標，其序列特征是：SEQ?NO.1；②利用該序列特征設計Barnase基因特異性定量PCR檢測的引物和探針合成引物序列如下：qBarnaseF：5’AATCAGAAGCACAAGCCCTCG?3’和qBarnaseR：5’AGTTTGCCTTCCCTGTTTGAGAA?3’；合成TaqMan探針序列如下：qBarnaseP：5’FAM－TGTCTCCGCCGATGCTTTTCCCCG－TAMRA?3’；③建立標準曲線提取樣品總DNA，分別利用上述引物qBarnaseF/qBarnaseR和探針qBarnaseP組合進行實時熒光定量PCR擴增；轉基因油菜MS1基因組DNA被相同濃度非轉基因油菜基因組DNA稀釋至不同含量，分別以100、20、4、0.8、0.016ng?MS1基因組DNA的混和DNA樣品，進行熒光定量PCR反應并建立標準曲線；④定量體系的精確性驗證以標準曲線為參照測定含有MS1基因組DNA的混和油菜基因組DNA樣品中Barnase基因的量。...

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：李俊，吳剛，武玉花，
申請(專利權)人：中國農業科學院油料作物研究所，
類型：發明
國別省市：