本發(fā)明專利技術(shù)一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法屬于鹽酸小檗堿檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域；所要解決的技術(shù)問(wèn)題為提供一種樣品損失少，檢測(cè)時(shí)重復(fù)性好的鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法；所采用的技術(shù)方案為：將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到一次定容溶液；然后將所述一次定容溶液采用離心分離，取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣的前處理液；本發(fā)明專利技術(shù)廣泛應(yīng)用于鹽酸小檗堿HPLC檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法屬于鹽酸小檗堿檢測(cè)
技術(shù)介紹
鹽酸小檗堿片為抗菌藥，對(duì)痢疾桿菌、大腸桿菌引起的腸道感染有效，用于治療腸道感染、腹瀉。鹽酸小檗堿片收載于中國(guó)藥典2010年版二部，含量測(cè)定采用高效液相色譜法。在實(shí)際檢驗(yàn)工作中時(shí)有含量測(cè)定結(jié)果偏低、重復(fù)性差的現(xiàn)象發(fā)生。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種樣品損失少，檢測(cè)時(shí)重復(fù)性好的鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案為:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到一次定容溶液； 然后將所述一次定容溶液采用離心分離，取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣的前處理液。所述細(xì)粉的粒度為150-200目。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。所述一次定容溶液的濃度為3mg/L_5mg/L。所述離心分離的條件為1500-4000r/min,離心6_15min。所述前處理液的濃度為0.3mg/L-0.5mg/L。本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比具有較好的效果為:本專利技術(shù)所采用的前處理方法使得鹽酸小檗堿的樣品損失少，HPLC檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性好。體現(xiàn)在前處理過(guò)程中不去包衣采用充分研磨的方法，降低了如果去具體包衣不當(dāng)樣品損失的問(wèn)題；在溶解樣品是采用流動(dòng)相作為溶齊U，減少了淀粉等輔料在沸水中產(chǎn)生糊化現(xiàn)象對(duì)鹽酸小檗堿的吸附作用，保證了回收率；用離心分離的方法代替濾膜過(guò)濾，減少了膜過(guò)濾對(duì)重復(fù)性的影響，提高了測(cè)量的穩(wěn)定性。影響因素的討論: 一、包衣的影響 中國(guó)藥典2010年版二部未標(biāo)明需去除包衣。經(jīng)試驗(yàn)去糖衣前后的含量并無(wú)明顯差異。分析原因應(yīng)該為研磨、稱量、溶解過(guò)程和過(guò)濾等綜合因素影響。二、研磨程度的影響 由于各生產(chǎn)廠家所用輔料和制劑工藝不同，在研磨時(shí)發(fā)現(xiàn)研磨難易程度不盡相同。如果不能研磨成極細(xì)的粉末，細(xì)粉和顆粒中鹽酸小檗堿的含量是不均勻的，尤其是包衣部分以顆粒形式存在影響更為突出。三、溶劑的影響 中國(guó)藥典2010年版二部試驗(yàn)方法是:以沸水為溶劑溶解樣品和對(duì)照品。由于鹽酸小檗堿在水中微溶，在熱水中溶解。但以沸水溶解時(shí)鹽酸小檗堿片中的淀粉等輔料會(huì)產(chǎn)生糊化現(xiàn)象，影響濾過(guò)，以及對(duì)鹽酸小檗堿可能存在吸附作用。分別以沸水、40%乙腈和流動(dòng)相為溶齊U，以濾膜(0.45um)濾過(guò)，棄去初濾液約IOmL后進(jìn)行下一步稀釋。結(jié)果表明，以流動(dòng)相為溶劑含量最高。四、濾過(guò)方式的影響 中國(guó)藥典2010年版二部試驗(yàn)方法是:樣品溶液以濾膜(0.45um)濾過(guò)，棄去初濾液約8mL后進(jìn)行下一步稀釋。按中國(guó)藥典2010年版二部試驗(yàn)方法以水為溶劑配制樣品溶液和對(duì)照品溶液。樣品溶液采用濾膜(0.45um)、濾紙、垂熔漏斗濾過(guò)和2000r/min離心10 min處理后傾取上清液，其中前三種方法分別棄去IOmL初濾液；對(duì)照品溶液采用濾膜(0.45um)、濾紙和垂熔漏斗濾過(guò)，并棄去IOmL初濾液。結(jié)果表明，溶液采用不同處理方式，結(jié)果偏差較大。其中離心的效果是最佳的；濾紙和垂熔漏斗吸附較強(qiáng)；同時(shí)對(duì)照品的處理結(jié)果表明，濾膜(0.45um)濾過(guò)也有31.5%的吸附。因此不建議采用濾膜、濾紙和垂熔漏斗濾過(guò)。五、回收率試驗(yàn) 取經(jīng)105°C干燥4h后的鹽酸小檗堿對(duì)照品，加入處方量的輔料，分別用沸水和流動(dòng)相溶解，以2000 r/min離心lOmin，傾取上清液，按含量測(cè)定的方法測(cè)定回收率。結(jié)果表明，以沸水溶解樣品回收率偏低，偏差亦較大，制劑輔料有吸附；以流動(dòng)相溶解樣品回收率良好，制劑輔料無(wú)干擾。綜上影響因素和試驗(yàn)結(jié)果，鹽酸小檗堿片含量測(cè)定的改進(jìn)方法為:不去包衣，充分研磨至細(xì)粉狀，粒度均勻，尤其是包衣部分不能有明顯顆粒感；選擇流動(dòng)相作為溶劑溶解對(duì)照品和樣品；樣品溶液米用尚心后，取上清液備用。糖衣片和薄膜衣片若去包衣不當(dāng)，測(cè)定結(jié)果反倒會(huì)偏低，所以只要研磨足夠細(xì)，混合均勻，糖衣片和薄膜衣片是不必去包衣的。用流動(dòng)相作為溶劑溶解樣品，雖然檢驗(yàn)成本增加了，但不存在諸如淀粉等輔料在沸水中產(chǎn)生的糊化現(xiàn)象和對(duì)鹽酸小檗堿的吸附作用，且回收率較好。用濾紙和垂熔漏斗濾過(guò)吸附較強(qiáng),僅僅棄去IOmL初濾液是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，如果采用這兩種方法處理，即使棄去足夠多的初濾液，也很難保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，重復(fù)性也很差。按照中國(guó)藥典2010年版要求棄去初濾液IOmL,濾膜仍有3.5%的吸附。樣品溶液中存在較多的輔料，隨過(guò)濾量的加大，會(huì)影響濾膜的過(guò)濾效果，過(guò)濾會(huì)變得更加困難；并且還要保留足夠的續(xù)濾液供下一步稀釋，因此很難棄去較多的初濾液，吸附作用在所難免。離心的方法不但可以解決吸附的問(wèn)題，還可以降低檢驗(yàn)成本。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1 一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至180目，粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到濃度在3mg/L-5mg/L之間的一次定容溶液； 然后將所述一次定容溶液采用2000r/min,離心IOmin進(jìn)行離心分離,取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣，濃度在0.3mg/L-0.5mg/L的前處理液。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。實(shí)施例2 一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至200目，粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到濃度在3mg/L-5mg/L之間的一次定容溶液； 然后將所述一次定容溶液采用4000r/min,離心6min進(jìn)行離心分離,取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣，濃度在0.3mg/L-0.5mg/L的前處理液。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。實(shí)施例3 一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至150目，粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到濃度在3mg/L-5mg/L之間的一次定容溶液； 然后將所述一次定容溶液采用1500r/min,離心15min進(jìn)行離心分離,取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣，濃度在0.3mg/L-0.5mg/L的前處理液。所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述磷酸鹽溶液為0.05mol/L的磷酸二氫鉀和0.05mol/L的庚烷磺酸鈉以體積比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。實(shí)施例4 一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于：將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到一次定容溶液；然后將所述一次定容溶液采用離心分離，取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣的前處理液。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于:將待檢測(cè)的鹽酸小檗堿片進(jìn)行研磨至粒度均勻的細(xì)粉，稱取樣品，放入容量瓶中，用流動(dòng)相作為溶劑對(duì)所述樣品溶解定容，得到一次定容溶液； 然后將所述一次定容溶液采用離心分離，取上清液放入另一容量瓶中進(jìn)行二次定容，即得到用于進(jìn)樣的前處理液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于所述細(xì)粉的粒度為150-200目。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽酸小檗堿片進(jìn)行HPLC檢測(cè)的前處理方法，其特征在于所述流動(dòng)相為磷酸鹽溶液與乙腈按照體積比60:40配制而成，所述...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張俊萍，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：山西云鵬制藥有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：山西;14
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