利用miRNA導(dǎo)入的新型hiPSC制作法制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)明確多能干細(xì)胞誘導(dǎo)的新型的化合物；明確新型的抗惡性腫瘤物質(zhì)。本發(fā)明專利技術(shù)提供一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其含有：包含序列號41的堿基序列、或相對于該堿基序列1-3個堿基缺失、被置換或者加成后的堿基序列的單鏈或雙鏈的多核苷酸，并且將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】利用mi RNA導(dǎo)入的新型h i PSC制作法
本專利技術(shù)涉及新型的小RNA (small RNA)、多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑、惡性腫瘤治療藥或多能干細(xì)胞等。
技術(shù)介紹
iPS細(xì)胞的制作技術(shù)，是在近年來的醫(yī)療行業(yè)特別受矚目的領(lǐng)域。作為代表的iPS細(xì)胞的制作技術(shù)，可以列舉:專利文獻(xiàn)I中記載的方法。該文獻(xiàn)中記載了:通過將4個基因(0ct3/4、Klf4、Sox2、c-Myc)導(dǎo)入細(xì)胞，制作iPS細(xì)胞。從開發(fā)該技術(shù)開始，與iPS細(xì)胞相關(guān)的研究成果的報告數(shù)快速增加。例如，專利文獻(xiàn)2中記載了:通過將3個基因(0ct3/4、Klf4、Sox2)和I個miRNA (hsa-miR-372等)導(dǎo)入細(xì)胞，制作iPS細(xì)胞。非專利文獻(xiàn)I中記載了:在導(dǎo)入上述4個或3個基因的情況下，如果缺損使iPS化的細(xì)胞的p53基因，則iPS細(xì)胞的制作效率上升。非專利文獻(xiàn)2中記載了:通過導(dǎo)入pre-miRNA的團(tuán)簇(miR_302a miR-302d),由癌細(xì)胞制作iPS細(xì)胞。另一方面，制藥會社近年來特別投入資金的領(lǐng)域是癌領(lǐng)域。癌的機(jī)理復(fù)雜且不明確的方面多，與其他疾病相比，有效的治療藥少。因此，期待開發(fā)該領(lǐng)域的新型的治療藥。本申請專利技術(shù)人在非專利文獻(xiàn)3中報道了可以采用hTERTmRNA作為癌的生物標(biāo)記。另外，非專利文獻(xiàn)4中報道了:hTERT mRNA的表達(dá)與RGM249mRNA相關(guān)，通過針對RGM249mRNA的shRNA或siRNA，hTERTmRNA的表達(dá)量減少。 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I國際公開 第2007/069666號 專利文獻(xiàn)2國際公開第2009/075119號 非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I‘Suppression of induced pluripotent stem cell generationby the p53_p21pathway.’ Hong et al., Nature.2009Aug27;460(7259):1132-5.Epub2009Aug9.非專利文獻(xiàn)2‘Mir-302reprograms human skin cancer cells into a pluripotentES-cell-like state.’ Lin et al.，RNA.20080ct;14(10):2115-24.Epub2008Aug28.非專利文獻(xiàn)3‘A novel biomarker TERT mRNA is applicable for early detectionof hepatoma.’ Miura et al.，BMC Gastroenterol.2010Mayl8;10:46.非專利文獻(xiàn) 4iA noncoding RNA gene on chromosomeIOp 15.3may functionupstream of hTERT.’ Miura et al.，BMC Mol Biol.2009Feb2;10:5.
技術(shù)實現(xiàn)思路
專利技術(shù)所要解決的課題然而，上述文獻(xiàn)記載的現(xiàn)有技術(shù)在以下方面具有改善的余地。在上述文獻(xiàn)中，iPS細(xì)胞的制作方法慢慢地不斷明確，但為了更有效地開發(fā)更高品質(zhì)的iPS細(xì)胞，需要明確新的制作方法，并且不斷積累關(guān)于iPS細(xì)胞的信息。關(guān)于各文獻(xiàn)，專利文獻(xiàn)I中，使用作為癌原基因的c-Myc，因此，暗藏iPS細(xì)胞發(fā)生癌化的風(fēng)險。專利文獻(xiàn)2中，沒有使用c-Myc，但將3個基因和I個miRNA導(dǎo)入細(xì)胞的步驟復(fù)雜，不能說是高效的制作方法。非專利文獻(xiàn)I中，沒有使用c-Myc，但缺損作為癌抑制基因的p53基因，因此，擔(dān)負(fù)細(xì)胞的癌化和不穩(wěn)定化等風(fēng)險。非專利文獻(xiàn)2提到:使用miR-302的團(tuán)簇，但miR-302是以腫瘤抑制因子即PTEN (染色體10上缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物；phosphatase and tensin homo log deleted on chromosome 10)作為目標(biāo)的 miRNA(Poliseno et al., Sci Signal.2010Aprl3; 3 (117):ra29)。因此,擔(dān)負(fù)細(xì)胞的癌化的風(fēng)險。另一方面，上述文獻(xiàn)中，惡性腫瘤的機(jī)理慢慢明確，但僅僅這樣的程度還不能說充分，為了制定新型的醫(yī)藥品或治療戰(zhàn)略方案，需要明確新的抗惡性腫瘤物質(zhì)，并且不斷積累關(guān)于惡性腫瘤的信息。非專利文獻(xiàn)3以 及4中記載了:hTERT mRNA與癌形成有關(guān)；和通過針對RGM249mRNA的shRNA或siRNA，hTERT mRNA減少，但對癌具有治療效果的物質(zhì)還不明確。本專利技術(shù)是鑒于上述情況而完成的，其目的在于，提供誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的新型的化合物。或者，其目的在于，提供未分化細(xì)胞標(biāo)記表達(dá)調(diào)節(jié)劑。另外的目的在于，提供多能干細(xì)胞的P53表達(dá)促進(jìn)劑。另外，其他目的在于，提供新型的惡性腫瘤治療藥。另外，其他目的在于，提供新型的多能干細(xì)胞。 用于解決課題的方法根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其含有包含序列號41的堿基序列的單鏈或雙鏈的多核苷酸，并且將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。該多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，含有在下述實施例中證實將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)的單鏈或雙鏈的多核苷酸。因此，如果使用該多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，則能夠?qū)⒓?xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。另外，根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其含有包含序列號41的堿基序列的小RNA，并且將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。該多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，含有在下述實施例中證實將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)的小RNA。因此，如果使用該多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，則能夠?qū)⒓?xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。另外，根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其含有:包含相對于將包含序列號43的堿基序列的多核苷酸，并且將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。該多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，含有在下述實施例中證實將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)的多核苷酸。因此，如果使用該多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，則能夠?qū)⒓?xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。另外，根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種未分化細(xì)胞標(biāo)記表達(dá)調(diào)節(jié)劑，其含有包含序列號41的堿基序列的單鏈或雙鏈的多核苷酸，并且調(diào)節(jié)未分化細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)。該未分化細(xì)胞標(biāo)記表達(dá)調(diào)節(jié)劑，含有在下述實施例中證實促進(jìn)或抑制細(xì)胞內(nèi)的未分化細(xì)胞標(biāo)記的單鏈或雙鏈的多核苷酸。因此，如果使用該未分化細(xì)胞標(biāo)記表達(dá)調(diào)節(jié)劑，則能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的未分化細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)量。另外，根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種多能干細(xì)胞的p53表達(dá)促進(jìn)劑，其含有包含序列號41的堿基序列的單鏈或雙鏈的多核苷酸，并且促進(jìn)多能干細(xì)胞中的P53的表達(dá)量。該P53表達(dá)促進(jìn)劑，含有在下述實施例中證實促進(jìn)多能干細(xì)胞中的p53的表達(dá)量的單鏈或雙鏈的多核苷酸。因此，如果使用該P53表達(dá)促進(jìn)劑，則能夠促進(jìn)多能干細(xì)胞中的P53的表達(dá)量。另外，根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種多能干細(xì)胞的生產(chǎn)方法，其中，包括:將包含序列號41的堿基序列的單鏈或雙鏈的多核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞的步驟。該生產(chǎn)方法，在下述實施例中證實能夠利用于制作多能干細(xì)胞。因此，如果使用該生產(chǎn)方法，則能夠生產(chǎn)多能干細(xì)胞。另外，根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種惡性腫瘤的治療藥，其含有包含序列號41的堿基序列的單鏈或雙鏈的多核苷酸。該惡性腫瘤的治療藥，含有在下述實施例中證實抑制惡性腫瘤的單鏈或雙鏈的多核苷酸。因此，如果使用該惡性腫瘤的治療藥，則能夠進(jìn)行惡性腫瘤的治療。另外，根據(jù)本專利技術(shù)，提供一種載體，其含有包含與序列號41的堿基序列的多核苷酸。如果利用本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2010.07.12 JP 2010-158192;2010.07.12 JP 2010-158191.一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于，含有: 包含序列號41的堿基序列、或相對于該堿基序列I 3個堿基缺失、被置換或者加成后的堿基序列的單鏈或雙鏈的多核苷酸， 并且將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈或雙鏈的多核苷酸具有miRNA作用。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈或雙鏈的多核苷酸為小RNA。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈或雙鏈的多核苷酸為單鏈或雙鏈的RNA鏈。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈或雙鏈的多核苷酸由15以上的核苷酸構(gòu)成。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈或雙鏈的多核苷酸由100以下的核苷酸構(gòu)成。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈的多核苷酸為shRNA或pre-miRNA，所述雙鏈的多核苷酸為siRNA或miRNA。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑,其特征在于:所述shRNA或pre-miRNA由35 100核苷酸構(gòu)成，所述siRNA或miRNA的引導(dǎo)鏈由15 40核苷酸構(gòu)成。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述shRNA、所述pre-miRNA、所述siRNA以及所述miRNA包含由I 5核苷酸構(gòu)成的突出端。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于: 所述單鏈或雙鏈的多核苷酸還包含:序列號42的堿基序列、或相對于該堿基序列I 5個堿基缺失、被置換或者加成后的堿基序列。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于: 所述單鏈或雙鏈的多核苷酸還包含:由序列號41的堿基序列構(gòu)成的多核苷酸的互補鏈。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈或雙鏈的多核苷酸為單鏈的多核苷酸，并且為pre-miRNA。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于:所述單鏈的多核苷酸包含:序列號43的堿基序列、或相對于該堿基序列I 4個堿基缺失、被置換或者加成后的堿基序列。14.一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其含有: 包含序列號41的堿基序列、或相對于該堿基序列I 3個堿基缺失、被置換或者加成后的喊基序列的小RNA, 并且將細(xì)胞向多能干細(xì)胞誘導(dǎo)。15.一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)劑，其特征在于，含有選自由如下堿基序列組成的組中的一種以上的堿基序列的多核苷酸: a)序列號43的堿基序列； b)相對于序列號43的堿基序列，具有80%以上相同性的堿基序列；c)序列號43的堿基序列中，一個或多個堿基缺失、被置換或者加成后的堿基序列； d)針對與序列號43的堿基序列互補的堿基序列構(gòu)成的核...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：三浦典正，
申請(專利權(quán))人：國立大學(xué)法人鳥取大學(xué)，
類型：
國別省市：