本發明專利技術提供由選自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物的1種以上的化合物構成的由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑以及由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑或促進劑的篩選方法，該篩選方法包含：在待測物質的存在下及非存在下將HMGB蛋白與標記核酸進行混合的混合步驟；對與標記核酸結合的HMGB蛋白進行定量的定量步驟；當在待測物質的存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量少于在待測物質的非存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量時，判定該待測物質為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑、當在待測物質的存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量多于在待測物質的非存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量時、判定該待測物質為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的促進劑的判定步驟。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑及由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑或促進劑的篩選方法。
技術介紹
在免疫應答及其控制中，識別自己和非己是其根本。固有免疫體系及獲得性免疫(適應性免疫)體系在根據其各自特有的機制而承擔該識別的同時，確立并維持不會對自己進行應答的結構、即所謂的免疫耐受。已知固有免疫應答的激活與獲得性免疫應答的誘導也有關系，因此可以認為固有免疫應答的抑制對獲得性免疫應答的抑制也有效。已知在獲得性免疫體系中，在構建表達隨機的抗原受體的淋巴細胞庫后，絕大多數的自身反應性淋巴細胞被中樞性耐受機制排除，還殘留在末梢的自身反應性淋巴細胞被外周性耐受機制抑制。利用獲得性免疫體系進行的抗原識別以利用淋巴細胞的抗原受體識別特異性分子結構為特征，但在固有免疫體系中，是對病原體等所持有的分子模式進行識別，以Toll樣受體(Toll-like receptor, TLR)為代表，已知有很多的固有免疫激活受體。特別是，由核酸引起的固有免疫激活對于病毒等病原體的排除是很重要的，同時與各種免疫病癥的發病或惡化也有關 ，因此備受關注。但是，固有免疫體系中的核酸的識別機制中還有很多不清楚的地方，作為承擔由核酸所激活的免疫應答的分子群，鑒定了 Toll樣受體(Toll-likereceptor, TLR) 3、TLR7、TLR9、RIG-1 樣受體(RIG-1-like receptor), DAI, AIM2 等受體分子群，但其全貌仍不清楚(例如參照非專利文獻I 3)。已知HMGB (high-mobility group box,高遷移率族)蛋白中存在 HMGBl、HMGB2 及HMGB3。這些HMGB蛋白多存在于核內，認為其與染色質結構或轉錄的控制有關。另外，已知其還存在于細胞質或細胞外。專利文獻I中記載了阻礙分泌至細胞外的HMGBl蛋白與細胞表面的糖化終末產物受體(RAGE )結合的合成雙鏈核酸或核酸類似物分子。專利文獻2中記載了阻礙分泌至細胞外的HMGBl蛋白與RAGE的相互作用的HMGBl拮抗劑。非專利文獻4中記載了無堿基硫代磷酸酯脫氧核糖均聚體對TLR9及TLR7具有很高的親和性，它們作為TLR的拮抗劑發揮作用。非專利文獻5中記載了具有5’ -TCCATGACGTTCCTGATGCT-3’(序列號37)的堿基序列的硫代磷酸寡核苷酸對小鼠的投予誘導了 IFN (干擾素)-Y應答，而具有5’ -TCCATGAGCTTCCTGATGCT-3’(序列號38)的堿基序列的硫代磷酸寡核苷酸不會引起這種應答。現有技術文獻專利文獻專利文獻1:日本特表2008-504335號公報專利文獻2:日本特表2009-517404號公報非專利文獻非專利文獻1:Kawai T.et al, Nat.Rev.Tmmunol 7:131-137,2006.非專利文獻2:Yoneyama et al, J.Biol.Chem 282:15315-15318，2007.非專利文獻3:Burckstummer T.et al, Nat.Tmmunol.10:266-272, 2009.非專利文獻4:Haas T.et al, Immunity, 28:315-323, 2008.非專利文獻5 =Cowdery JS.et al, J.1mmunol.156:4570-4575,1996.
技術實現思路
專利技術要解決的技術問題本專利技術的目的在于提供由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑及由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑或促進劑的篩選方法。用于解決技術問題的手段本專利技術提供一種由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑，其由選自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I種以上的化合物構成，且通過與HMGB蛋白結合來抑制由HMGB蛋白介導的免疫應答激活。本專利技術還提供一種由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制方法，其包含對生物體投予選自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I種以上的化合物的工序。本專利技術還提供一種選自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I種以上的化合物的用于作為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑的用途。本專利技術還提供一種選自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I種以上的化合物在由HMGB蛋白介導的免疫應 答激活的抑制劑中的應用。專利技術人等明確了對于由核酸介導的免疫應答的激活，HMGB蛋白是必需的。即，專利技術人等明確了由核酸介導的免疫應答的激活由HMGB蛋白介導。專利技術人等還明確了上述化合物通過與HMGB蛋白牢固地結合，強有力地抑制了由HMGB蛋白介導的免疫應答的激活。因此，上述化合物可以作為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑來利用。上述抑制劑不限于抑制由核酸介導的免疫應答的激活，還抑制由HMGB蛋白介導的免疫應答的激活。上述化合物優選為不含非甲基化CG序列且長度為5 40個堿基的硫代磷酸寡核苷酸，更優選為下述的硫代磷酸寡核苷酸:(I)由序列號40所記載的堿基序列構成，或者(2)由下述堿基序列構成:其是在序列號40所記載的堿基序列中缺失、取代或添加有I個或多個喊基的喊基序列，且是具有針對HMGB蛋白的結合能力的喊基序列。這些硫代磷酸寡核苷酸可作為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑來利用。上述化合物還可以為硫代磷酸寡核苷酸的衍生物，該衍生物可以為無堿基硫代磷酸酯脫氧核糖均聚體(以下有時也稱作“PS”)。PS是具有從硫代磷酸寡核苷酸除去了堿基部分的結構的化合物。如實施例所示，PS可作為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑來利用。本專利技術的抑制劑通過在細胞內阻礙激活免疫應答的核酸與HMGB蛋白的結合來強有力地抑制由HMGB蛋白介導的免疫應答的激活。即，本專利技術的抑制劑基于專利技術人等此次首次明確的機制而抑制細胞內的由HMGB蛋白所介導的免疫應答的激活。作為由HMGB蛋白介導的免疫應答的激活，可例示出抗原特異性的獲得性免疫體系、多發性硬化癥、由死細胞導致的過剩的免疫應答、器官移植排斥反應、自身免疫疾病、炎癥性腸病、過敏、敗血癥、由炎癥導致的腫瘤增殖、由含核酸的病原體所引起的炎癥性疾病等。通過投予本專利技術的抑制劑，可以在人類或動物的生物體內預防或治療(改善)這些癥狀。本專利技術還提供一種由HMGB蛋白介導的免疫應答的激活的抑制用組合物，其含有上述抑制劑及藥學上可容許的載體。本專利技術還提供一種由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑或促進劑的篩選方法，其包含:混合步驟，其中，在待測物質的存在下及非存在下將HMGB蛋白和標記核酸進行混合； 定量步驟,其中,對與標記核酸結合的HMGB蛋白進行定量；以及判定步驟，其中，當在待測物質的存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量少于在待測物質的非存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量時，判定該待測物質為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑，當在待測物質的存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量多于在待測物質的非存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量時，判定該待測物質為由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的促進劑。本專利技術還提供一種由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑或促進劑的篩選方法，其包含:放置(孵育)步驟，其中，在待測物質的存在下及非存在下將經固相化的HMGB蛋白進行放置；標記核酸接觸步驟，其中，使標記核酸與本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.09.17 JP 2010-209587;2011.06.22 JP 2011-138821.一種由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑，其由選自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I種以上的化合物構成。2.根據權利要求1所述的抑制劑，其中，所述化合物是不含非甲基化CG序列且長度為5 100個堿基的硫代磷酸寡核苷酸。3.根據權利要求2所述的抑制劑，其中，所述化合物由序列號40所記載的堿基序列構成，或者由下述堿基序列構成:其是在序列號40所記載的堿基序列中缺失、取代或添加有I個或多個堿基的堿基序列，且是具有針對HMGB蛋白的結合能力的堿基序列。4.根據權利要求1所述的抑制劑，其中，所述化合物是硫代磷酸寡核苷酸的衍生物，該衍生物為無堿基硫代磷酸酯脫氧核糖均聚體。5.根據權利要求1 4中任一項所述的抑制劑，其在細胞內阻礙激活免疫應答的核酸與HMGB蛋白的結合。6.根據權利要求1 5中任一項所述的抑制劑，其中，由HMGB蛋白介導的免疫應答的激活選自:抗原特異性的獲得性免疫體系、多發性硬化癥、由死細胞導致的過剩的免疫應答、器官移植排斥反應、自身免疫疾病、炎癥性腸病、過敏、敗血癥、由炎癥導致的腫瘤增殖以及由含核酸的病原體所引起的炎癥性疾病。7.一種由HMGB蛋白介導的免疫應答的激活的抑制用組合物，其含有權利要求1 6中任一項所述的抑制劑及藥學上可容許的載體。8.一種由HMGB蛋白介導的免疫應答激活的抑制劑或促進劑的篩選方法，其包含: 混合步驟，其中，在待測物質的存在下及非存在下將HMGB蛋白與標記核酸進行混合； 定量步驟，其中， 對與標記核酸結合的HMGB蛋白進行定量；以及 判定步驟，其中，當在待測物質的存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量少于在待測物質的非存在下與標記核酸結合的HMGB蛋白的量時，判定...
【專利技術屬性】
技術研發人員：谷口維紹，柳井秀元，
申請(專利權)人：獨立行政法人科學技術振興機構，
類型：
國別省市：
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