一種用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽，包含SEQ?IDNo：1或2所示的氨基酸序列，所述SEQ?ID?No：1的氨基酸序列為NH2-GDPNEPRDPKAPQWPPYTAGGC-COOH，所述SEQ?ID?No：2的氨基酸序列為NH2-CGGPRRFLPPEPKQPWSGVVD-COOH。該多肽可特異性的與乙酰膽堿酯酶抗體結(jié)合。本發(fā)明專利技術(shù)提供的用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽親和性高、效價高，利用該多肽制備得到的單克隆抗體應(yīng)用于壓電免疫傳感器，對乙酰膽堿酯酶的檢測靈敏度高、準(zhǔn)確率高。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽，還涉及該多肽在制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase, AChE, EC3.1.1.7)是生物神經(jīng)傳導(dǎo)中的一種關(guān)鍵酶，是主要的信號傳遞分子，主要存在于多細(xì)胞動物的神經(jīng)元間、神經(jīng)元與肌肉細(xì)胞間的化學(xué)突觸上，為膜結(jié)合蛋白，定位于細(xì)胞膜和突觸前后膜，能快速水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(Acetylcholine, ACh)從而終止ACh對膽堿能受體的興奮作用,保持神經(jīng)沖動傳導(dǎo)的靈敏性。乙酰膽堿酯酶是生物體內(nèi)反應(yīng)最快的酶之一，降解一個分子約80微秒。由于在周圍神經(jīng)中，運(yùn)動神經(jīng)束和感覺神經(jīng)束乙酰膽堿酯酶的含量相差數(shù)十倍，定量分析手術(shù)斷端神經(jīng)束的乙酰膽堿酯酶含量能夠在臨床上快速、準(zhǔn)確地分辨感覺神經(jīng)和運(yùn)動神經(jīng)，在臨床上有巨大的應(yīng)用潛力。現(xiàn)有乙酰膽堿酯酶的含量通常采用技術(shù)成熟穩(wěn)定的壓電免疫傳感器測定，該方法快速、準(zhǔn)確，具有在線分析的功能。壓電免疫傳感器的檢測區(qū)間主要取決于檢測乙酰膽堿酯酶的芯片，而該芯片的檢測區(qū)間主要取決于其中所用的單克隆抗體的親和性和效價。現(xiàn)有市售的抗體制備的抗體芯片，其檢測濃度值的線性區(qū)間在0.5-2 u g/ml，和夾心ELISA檢測區(qū)間相似。然而，由于手術(shù)切除標(biāo)本斷面較小，溶解于細(xì)胞裂解液中的蛋白含量較低，其中含有的乙酰膽堿酯酶在夾心ELISA檢測的線性范圍之外(小于lng/ml)。因此，將免疫壓電傳感器檢測乙酰膽堿酯酶的含量的方法應(yīng)用于臨床，迫切需要制備更高親和性和高效價的單克隆抗體。 現(xiàn)有用于壓電免疫傳感器的單克隆抗體，主要選取乙酰膽堿酯酶抗原蛋白質(zhì)內(nèi)免疫原性較高的多肽，藕聯(lián)大分子(如BSA、BTG)為抗原，免疫后用多肽氨基酸序列相同而藕聯(lián)的大分子不同的抗原篩選出單克隆抗體；然而，免疫原性較高的多肽往往處于抗原蛋白質(zhì)的疏水端，導(dǎo)致現(xiàn)有乙酰膽堿酯酶抗體的親和性和效價較低。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種親和性高、效價高的多肽即其制備方法。在本專利技術(shù)的第一方面，提供一種用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽，包含SEQ ID No:1或2所示的氨基酸序列，所述SEQ ID No:1的氨基酸序列為 NH2-GDPNEPRDPKAPQWPPYTAGGC-C00H，所述 SEQ ID No:2 的氨基酸序列為NH2-CGGPRRFLPPEPKQPWSGVVD-C00H。該多肽可特異性的與乙酰膽堿酯酶抗體結(jié)合。在本專利技術(shù)的第二方面，提供了一種多肽偶聯(lián)物，所述多肽偶聯(lián)物由多肽、交聯(lián)劑和大分子物質(zhì)構(gòu)成，其中所述多肽包含SEQ ID No:1或2所示的氨基酸序列，所述交聯(lián)劑為甲醛和乙酸鈉的混合物，所述大分子為牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(0VA)、鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白(LKH)或甲狀腺球蛋白(BTG)。在本專利技術(shù)的第三方面，提供了一種用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的抗體，所述抗體特異性地與權(quán)利要求1所述的多肽結(jié)合。作為優(yōu)選，本專利技術(shù)的第三方面所述抗體為單克隆抗體。在本專利技術(shù)的第四方面，提供了上述多肽在制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體中的應(yīng)用。所述應(yīng)用，包括以下步驟:(I)將包含SEQ ID No:1或2所示的氨基酸序列的多肽偶聯(lián)大分子獲得全抗原；(2)將所述全抗原通過免疫制得用于檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體；(3)將所述單克隆抗體應(yīng)用于壓電免疫傳感器檢測乙酰膽堿酯酶。有益效果:本專利技術(shù)提供的用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽親和性高、效價高，利用該多肽制備得到的單克隆抗體應(yīng)用于壓電免疫傳感器，對乙酰膽堿酯酶的檢測靈敏度高、準(zhǔn)確率高。本專利技術(shù)通過對乙酰膽堿酯酶的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中每個氨基酸的親水性、抗原性分析，找尋和設(shè)計了 2個親水性和抗原性較高氨基酸序列；再將這兩個親水性和抗原性較高的氨基酸序列偶聯(lián)大分子獲得全抗原，通過免疫制得用于檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體，制得的單克隆抗體親和性高、效價高。并將該單克隆抗體應(yīng)用于檢測乙酰膽堿酯酶的壓電免疫傳感器，可顯著提高檢測靈敏度與準(zhǔn)確率。附圖說明 圖1為實施例3制得的鼠單抗在人白血病細(xì)胞中AChE的免疫共沉淀圖。圖2為實施例3制得的鼠單抗在鼠腦組織中AChE的免疫共沉淀圖。圖3為鼠腦組織AChE單抗免疫組化圖。圖4為人脊髓前根AChE單抗免疫組化圖。圖5為實施例3制得的鼠單抗應(yīng)用于壓電免疫傳感器檢測結(jié)果圖。具體實施例方式根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本專利技術(shù)。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本專利技術(shù)，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本專利技術(shù)。實施例1多肽合成按表I所示的多肽的氨基酸序列，利用MultiPep RS多肽合成儀，采用固相合成法，合成多肽。表I用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽的氨基酸序列本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽，包含SEQ?ID?No：1或2所示的氨基酸序列，所述SEQ?ID?No：1的氨基酸序列為NH2?GDPNEPRDPKAPQWPPYTAGGC?COOH，所述SEQ?ID?No：2的氨基酸序列為NH2?CGGPRRFLPPEPKQPWSGVVD?COOH。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于制備檢測乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體的多肽，包含SEQ ID No:1或2所示的氨基酸序列，所述SEQ ID No:1的氨基酸序列為 NH2-GDPNEPRDPKAPQWPPYTAGGC-C00H,所述 SEQ ID No:2 的氨基酸序列為NH2-CGGPRRFLPPEPKQPWSGVVD-C00H。2.一種多肽偶聯(lián)物，其特征在于:所述多肽偶聯(lián)物由多肽、交聯(lián)劑和大分子物質(zhì)構(gòu)成，其中所述多肽包...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：戈應(yīng)濱，滕文臣，曹曉健，董虎，
申請(專利權(quán))人：江蘇澳格姆生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：