一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法技術

本發明專利技術涉及到一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，包括：(1)孢子培養；(2)搖瓶菌絲；(3)種子培養；(4)深層液體通氣發酵。本發明專利技術著重研制一種新的接種工藝(搖瓶菌絲發酵)，用冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種，減少孢子的使用量，提高發酵種子種齡和種子質量的一致性，穩定微生物代謝，降低種子制備工作量和勞動強度，提高金色鏈霉菌的產抗能力及工作效率。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于微生物
，是。在金霉素發酵工藝中，現行的金霉素發酵種子接種過程，是由3-6個生長良好的孢子瓶制備成孢子液，然后采用壓差法把孢子液接入種子罐進行培養。孢子液制備過程中，需要制備大量的孢子瓶來滿足生產的需要，并且對大量的孢子瓶的保藏需要多臺冷藏設備。本專利著重研制一種新的接種工藝(搖瓶菌絲進罐)，減少孢子的使用量。提高金色鏈霉菌的產抗能力及工作效率。具體為:用I個生長良好的孢子瓶，采用挖塊法取Icrn2左右孢子，接入滅菌后的搖瓶中進行培養。培養好后，混合均勻分裝到接種瓶中，采用壓差法把菌絲液接入種子罐進行培養。種子罐培養好后移入發酵罐進行發酵。
技術介紹
金霉素(Chlortetracycline),又稱氯四環素,屬四環素類中衍生物的一種。化學名:6~ 甲基 ~4~ _■甲氣基 _3,6,10,12,12a-五輕基-1，11- _-氧代 ~7~ 氣-1,4,4a, 5, 5a, 6，11，12a-八氫-2-并四苯甲酰胺。分子量:478.8 ;分子式=C22H23ClN2O8。金霉素抗菌譜廣，對陽性菌、陰性菌、螺旋體、立克次氏體、支原體、衣原體、某些原蟲等均可產生抑制作用。金霉素的抗菌作用主要在于抑制細菌的生長，在其較高濃度時具有殺菌作用，其作用機制是干擾蛋白質的合成。適用于雞白痢、傷寒、豬細菌性腸炎以及禽類副傷寒、霍亂等疾病。同時，作為理想的飼料添加劑它還具有預防潛在感染、改善消化代謝、抑制腸道內有害微生物，促進有益微生物生長、提高飼料效能等。在全球范圍內，金霉素是所有飼料藥物添加劑中使用量最大的品種，是國際上重要的獸用抗生素之一。在金霉素發酵工藝中，大型發酵罐現行的金霉素發酵種子接種過程，是由3-6個生長良好的孢子瓶制備成孢子液，每瓶加無菌水約30ml，用刮孢鏟將孢子磨下，將磨好的孢子液倒入已滅菌的空孢瓶內，裝上微孔接種針備用。然后采用壓差法把孢子液接入種子罐進行培養。種子罐控制一定的生長時間，培養好后，再利用壓力差移入發酵罐進行發酵。但是這種接種方式容易產生一些問題。首先，孢子培養基主要原料為麩皮，麩皮為小麥最外層的表皮，小麥被磨面機加工后，變成面粉和麩皮兩部分，麩皮就是小麥的外皮，它價格低廉，富含纖維素和半纖維素，是微生物生長的優良碳源，尤其是在鏈霉素的培養基中使用廣泛，對于促進產孢效果顯著。但麩皮的質量受產地、品種、氣候、耕種條件、儲藏期限、制備工藝等諸多因素影響，無量化指標對其質量進行有效控制。麩皮的波動直接影響培養的孢子，進而影響進罐種子質量，對于后續的發酵產抗都會產生關聯，這種影響對于生產過程的控制增加了難度，很多時候更會給結果帶來不利的影響。其次，同一種子罐使用多只孢子瓶的孢子液，孢子的菌落差異導致種子生長階段存在一定的內在差異，統一的種齡控制不能完美地滿足所有的種子。這會造成發酵過程起步狀態的不統一，同樣會給生產過程控制增加困難，并在一定程度上造成結果的差異化。再次，采用此種制種方式，在工廠生產的孢子液制備環節中，需要制備大量的孢子瓶來滿足生產的需要，并且對大量的孢子瓶的保藏需要多臺冷藏設備。這無疑都增加了人員、設備的投入要求，不利于企業的生產成本控制，也給菌種的保藏管理帶來壓力。因此，我們尋求開發一種新的接種工藝，以搖瓶菌絲的接種形式代替孢子懸液進罐。搖瓶菌絲制備使用的孢子瓶孢子量較少，通過搖瓶培養，將孢子萌發為菌絲體，其生長階段和質量趨一致性，對種子罐種齡和質量控制更便捷、有效，能夠有效提高工業水平大容量發酵罐金霉素發酵的產抗能力及大規模發酵工業的工作效率
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種培養周期短，穩定性好，生長成本低的新接種工藝。與傳統工藝比較，新的接種工藝以搖瓶菌絲的接種形式代替孢子懸液接種。搖瓶菌絲制備使用的孢子量較少，通過搖瓶培養，將孢子萌發為菌絲體，其生長階段和質量趨于一致性，對微生物種子質量控制更便捷、有效，能夠提高工業水平大容量金霉素產生菌的產抗能力及大規模發酵工業的工作效率。本專利技術的優點和有益效果為:1:本項研究通過接種形式的改變，提高了發酵種子質量的一致性，穩定了發酵過程代謝，使發酵過程更易于控制；同時降低了種子制備的勞動強度，給工作帶來了顯著的改盡口 O2:與傳統工藝比較，新的接種工藝以搖瓶菌絲的接種形式代替孢子懸液接種。搖瓶菌絲制備使用的孢子量較少，通過搖瓶培養，將孢子萌發為菌絲體，其生長階段和質量趨于一致性，對發酵種子培養和質量控制更便捷、有效，能夠提高工業水平大容量金霉素產生菌的產抗能力及大規模發酵工業的工作效率。具體實施例方式為了更好地理解本專利技術，下面結合實施例進一步闡明本專利技術的內容，但本專利技術的內容不僅僅局限于下面的實施。實施例1在金霉素發酵工藝中，現行的金霉素發酵種子接種過程，是由3-6個生長良好的孢子瓶制備成孢子液，然后采用壓差法把孢子液接入種子罐進行培養。種子罐培養好后移入發酵罐進行發酵。孢子液制備過程中，需要大量的孢子瓶來滿足生產的需要，并且，大量孢子瓶的保藏需要多臺冷藏設備。本項目著重研制一種新的接種工藝(搖瓶菌絲接種)，減少孢子的使用量，提高金色鏈霉菌的產抗能力及工作效率。具體為:用I個生長良好的孢子瓶，采用挖塊法取Icrn2左右孢子，接入滅菌后的搖瓶中進行培養。培養成熟后，混合均勻分裝到接種瓶中，采用壓差法把菌絲液接入種子罐進行 培養。種子罐培養成熟后移入發酵罐進行發酵。實踐表明，兩種接種方式比較，效價、產量均無明顯差異，金霉素產品質量指標均能滿足國內外產品質量標準。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，包括：(1)孢子培養；(2)搖瓶菌絲；(3)種子培養；(4)深層液體通氣發酵，其中深層液體通氣發酵的條件如下：①發酵培養基組成：花生餅粉或黃豆餅粉：3.0％?5.0％；玉米淀粉：8.0％?12.0％；氯化鈉：0.2％?0.3％；硫酸銨：0.4％?0.6％；碳酸鈣：0.5％?0.8％；酵母粉：0.1％?1.6％；硫酸鎂：0.02％?0.03％；磷酸二氫鉀：0％?0.03％；淀粉酶：0.003％?0.02％；②培養溫度：接種后培養溫度控制在28?34℃，菌絲成熟后降溫至29±3℃培養；③發酵周期為90?124小時；④發酵培養基消后pH控制在5.6?6.5；⑤發酵培養過程中為固定轉速，控制在120?140rpm；⑥溶氧大于30％。

【技術特征摘要】
1.一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，包括:(1)孢子培養；(2)搖瓶菌絲；(3)種子培養；(4)深層液體通氣發酵，其中深層液體通氣發酵的條件如下:①發酵培養基組成:花生餅粉或黃豆餅粉:3.0% -5.0% ;玉米淀粉:8.0% -12.0% ;氯化鈉:0.2% -0.3%;硫酸銨:0.4% -0.6%;碳酸鈣:0.5% -0.8%;酵母粉:0.1% -1.6%;硫酸鎂:0.02% -0.03%;磷酸二氫鉀:0% -0.03%;淀粉酶:0.003% -0.02%;②培養溫度:接種后培養溫度控制在28-34°C，菌絲成熟后降溫至29±3°C培養；③發酵周期為90-124小時；④發酵培養基消后PH控制在5.6-6.5 發酵培養過程中為固定轉速，控制在120-140rpm ；⑥溶氧大于30%。2.根據權利要求1所述的一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，其特征在于:從母瓶上挑取孢子豐滿、無白點的單菌落4-10只于約1-1...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李亞峰，王友琦，張雪崢，
申請(專利權)人：駐馬店華中正大有限公司，
類型：發明
國別省市：