本發(fā)明專利技術(shù)是一種螺旋藻多糖的提取方法。取螺旋藻經(jīng)提取工藝得到提取液，將該提取液經(jīng)微孔濾膜過濾、超濾、濃縮液，干燥，得到1種以上的水提螺旋藻粗多糖，總糖含量≥10%，分子量為0.5萬以上；或?qū)⑻崛∫簼饪s，除雜處理，處理后的溶液于≤15000r/min轉(zhuǎn)速下離心，微孔濾膜過濾，超濾，選擇0.5萬至20萬分子量間的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機流出液和超濾機內(nèi)的濃縮液，干燥，得到1種以上的水提螺旋藻多糖，總糖含量≥40%，分子量為0.5萬~20萬。本發(fā)明專利技術(shù)根據(jù)對產(chǎn)品純度不同的需求，在工藝路線不同的階段選擇合理的處理措施，不需要檢測即可獲得預(yù)定分子量規(guī)格的高純度多糖，而且可以同時獲得多種規(guī)格的螺旋藻多糖。這是其他傳統(tǒng)方法所不可能達到的優(yōu)勢。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及同時獲得多種分子量范圍的螺旋藻多糖的提取方法。所制的不同規(guī)格的多糖可用于藥品、食品、保健品及化妝品等。
技術(shù)介紹
螺旋藻是海洋中古老的單細胞藻類，含有大量的氨基酸、藍藻素、類胡蘿卜素、Y亞麻酸、肌醇等營養(yǎng)物質(zhì)。螺旋藻多糖是從螺旋藻藻體、螺旋藻培養(yǎng)液中提取分離出來的一類具有促進細胞生長、提高免疫力、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老等功能的重要天然生物活性物質(zhì)，有防治多種疾病同時還能顯著增強機體免疫力的雙重作用。螺旋藻中存在大量的蛋白質(zhì)，和多糖一樣均屬于高分子物質(zhì)，部分水溶性蛋白質(zhì)和多糖一起被溶劑提取出來。去掉蛋白質(zhì)是螺旋藻多糖提純的關(guān)鍵步驟，常利用氯仿正丁醇的二元溶劑體系或三氯乙酸使蛋白質(zhì)變性析出。前者使用的溶劑有一定毒性且具強揮發(fā)性，給環(huán)境和操作人員一定的危害；后者使用的三氯乙酸有一定毒性，脫蛋白后生產(chǎn)的鹽與多糖類似的溶解性，去除困難，也有一定的毒性，因此該方法得到的粗品運用受到限制。常利用多糖不溶于乙醇的特性對螺旋藻多糖粗提物進行精制，但該法所得到的多糖純度不高，無法除盡蛋白質(zhì)，還會摻雜色素、膠質(zhì)等其他雜質(zhì)，而且所得物分子量范圍較寬。還有利用DEAE纖維素柱離子交換層析法、葡聚糖凝膠和瓊脂糖凝膠的凝膠柱層析等分離得純度高的、不同分子量范圍的多糖。但由于柱填料價格昂貴，大批量生產(chǎn)需要較多根柱子，生產(chǎn)成本超高，分離操作無法自動化 ，生產(chǎn)周期較長。而且柱層析需耗費大量的酸堿再生樹脂，造成二次污染，能耗大、成本高。該法不太適合大規(guī)模的多糖原料制備，僅適合實驗室和中小試運用。大多數(shù)提取方法為了提高多糖的收率，會采取偏堿性條件下進行提取，之后再通過調(diào)酸中和，如1994年公開的專利“螺旋藻多糖的提取方法”(授權(quán)公告號為CN1056852C)中采用氫氧化鈉、氫氧化鉀等強堿進行提取；2012年公開的專利“螺旋藻多糖的應(yīng)用”(申請?zhí)?01210134354.6)中S180小鼠移植模型的藥效學試驗中研究過螺旋藻水提多糖的相對腫瘤增值率T/C (%)高于螺旋藻堿提多糖，也就是說中性條件下提取得到的多糖對腫瘤的抑制作用優(yōu)于堿性條件下。雖然堿性溶劑的提取方法可以提高提取的收率，PH值較高時破壞多糖的結(jié)構(gòu)，最終得不到活性最強的多糖，不能全完發(fā)揮螺旋藻多糖的優(yōu)勢。1994年公開的專利“從螺旋藻中提取蛋白質(zhì)和多糖的方法”(授權(quán)公告號為CN1036067C)中使用低溫浸泡提取同時得到藍藻蛋白和螺旋藻多糖，該方法雖然簡單，但是低溫浸泡提取提取效率低，所得的螺旋藻含量較低。2008年公開的專利“一種水溶性螺旋藻多糖的提取方法”(公開號為CN101575626A)中使用冷凍離心法，調(diào)酸和酶解的方法獲得螺旋藻多糖，該方法通過酶水解蛋白質(zhì)，提高多糖的收率。但是酶價格昂貴，生產(chǎn)成本增高。酶解會造成蛋白質(zhì)水解為水溶性的多肽或是水溶性氨基酸。由于分子量接近，而且與多糖同樣溶于水，無法有效分離，導致多糖純度降低。而且酶提取法要求的條件苛刻，容易失活，對實驗設(shè)備要求高，不適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。所報道的螺旋藻多糖的方法雖然很多，各有利弊。但目前沒有一種可以保證產(chǎn)品雜質(zhì)少、純度高、高生物活性、低成本的，且可以實際運用于大生產(chǎn)的工藝路線。對于食品和藥品安全性意識益增的今天，質(zhì)量和成本都是企業(yè)的生命線。一種可以運用于工業(yè)化生產(chǎn)中，能有效保證螺旋藻多糖的活性、生產(chǎn)操作簡單、對環(huán)境和產(chǎn)品無污染的、產(chǎn)品收率和純度高的提取方法，是保證產(chǎn)品品質(zhì)和成本所必須的，也是企業(yè)迫切需要的。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種經(jīng)濟、節(jié)約能源、無環(huán)境污染、安全無毒、提取率高、純度高、保留生物活性成分的高效價的，可進行工業(yè)化生產(chǎn)的螺旋藻多糖提取方法。本專利技術(shù)的技術(shù)方案為: 同時獲得多種純度規(guī)格的螺旋藻多糖的提取方法按以下步驟進行: (一)螺旋藻粗多糖的制備 (1)取螺旋藻，加4-10倍量的95%乙醇，回流提取f3次，每次f 3小時，傾去乙醇，固體物晾干，加入水4-20倍量，提取I飛次，每次2 10小時，提取溫度為6(TlO(rC，合并提取液，于彡15000 r/min轉(zhuǎn)速下離心,上清液合并,備用； (2)取上述(I)得到上清液合并液，過<1.5μπι的微孔濾膜過濾，將濾液加入超濾機中，選擇0.5萬以上分子量的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機流出液和超濾機內(nèi)的濃縮液，干燥，得到I種以上的水提螺旋藻粗多糖，總糖含量> 10%，分子量為0.5萬以上； (二)高純度螺旋藻多糖的制備 (1)取螺旋藻，加4-10倍量的95%乙醇，回流提取f3次，每次f 3小時，傾去乙醇，固體物晾干，加入水4-20倍量，提取I飛次，每次2 10小時，提取溫度為6(TlO(rC，合并提取液，于彡15000 r/min轉(zhuǎn)速下離心,上清液合并,備用； (2)取上述(I)得到上清液合并液，濃縮，除雜處理，處理后的溶液于彡15000r/min轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，過<1.5 μ m的微孔濾膜過濾，將濾液加入超濾機中，選擇0.5萬至20萬分子量間的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機流出液和超濾機內(nèi)的濃縮液，干燥，得到I種以上的水提螺旋藻多糖，總糖含量> 40%，分子量為0.5萬 20萬。(3)上述的濃縮，可以是利用加熱使上清液合并液體積減少至螺旋藻投料量的5倍以下。或?qū)⑸锨逡汉喜⒁和ㄟ^<1.5μπι的微孔濾膜過濾，將濾液加入超濾機中，選擇0.5萬分子量以上的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機內(nèi)的濃縮液。(4)上述的除雜處理，可以是在濃縮物中加入50 95%的乙醇至醇度達到40_90%，攪勻，靜置12 72小時，于彡15000 r/min轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀，加水溶解。也可以在濃縮物中加入蛋白沉淀劑，加熱0.5^3小時，于彡5°C下冷藏12 72小時，于彡15000 r/min轉(zhuǎn)速下離心分離沉淀，上清液中再加入蛋白沉淀劑，加熱，冷藏，此除雜操作重復多次至無明顯沉淀析出。上清液加入20%的氫氧化鈉水溶液或10%鹽酸溶液調(diào)pH值至中性。所述的蛋白沉淀劑，可使用1-50%三氯乙酸水溶液或0.1-50%的硫酸銨溶液或是0.1-10%的氫氧化鈉水溶液其中的一種或幾種。 上述的超濾，可根據(jù)產(chǎn)品所需不同分子量范圍，將超濾得到的濃縮液再反復進行超濾。2次以上連續(xù)超濾操作時，超濾機流出液即為前后兩種分子量間的濃縮成分。超濾機內(nèi)的濃縮液即為選用分子量以上的多糖成分。本專利技術(shù)步驟(I)為提取工藝:利用乙醇回流提取去除脂溶性成分，提高多糖的提取率。利用水直接提取，不改變?nèi)軇┑乃釅A度，不影響多糖的結(jié)構(gòu)，獲得活性最強的多糖。步驟(2)利用離心和微孔濾膜過濾去除溶液中的固體物質(zhì)，有效提高超濾的效率。通過第一道的離心、微孔過濾和超濾的聯(lián)用，獲得總糖含量> 10%，分子量為0.5萬以上的多糖和水溶性蛋白質(zhì)混合物，該部分中的蛋白質(zhì)也有一定的生理活性，因此該混合物可作為要求成分營養(yǎng)豐富的食品、保健品、化妝品等產(chǎn)品的原料。相比其他傳統(tǒng)的粗提方法，該方法操作簡單，不需要加熱也不需要加入試劑，盡可能的保持了多糖和水溶性蛋白質(zhì)的活性。另外提取過程中還可獲得低分子量的如水溶性維生素等其他水溶性附加產(chǎn)物。如果需要進一步對多糖純度分級，將含有粗品的溶液，通過除雜處理，去除蛋白質(zhì)，提高本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種螺旋藻多糖的提取方法，其特征在于按以下步驟進行：（1）取螺旋藻，加4?10倍量的95%乙醇，回流提取1~3次，每次1~3小時，傾去乙醇，固體物晾干，加入水4?20倍量，提取1~5次，每次2~10小時，提取溫度為60~100℃，合并提取液，于≤15000?r/min轉(zhuǎn)速下離心，上清液合并，備用；（2）取上述（1）得到上清液合并液，過≤1.5μm的微孔濾膜過濾，將濾液加入超濾機中，選擇0.5萬以上分子量的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機流出液和超濾機內(nèi)的濃縮液，干燥，得到1種以上的水提螺旋藻粗多糖，總糖含量≥10%，分子量為0.5萬以上；一種螺旋藻多糖的提取方法，其特征在于按以下步驟進行：（1）取螺旋藻，加4?10倍量的95%乙醇，回流提取1~3次，每次1~3小時，傾去乙醇，固體物晾干，加入水4?20倍量，提取1~5次，每次2~10小時，提取溫度為60~100℃，合并提取液，于≤15000?r/min轉(zhuǎn)速下離心，上清液合并，備用；（2）取上述（1）得到上清液合并液，濃縮，除雜處理，處理后的溶液于≤15000?r/min轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，過≤1.5μm的微孔濾膜過濾，將濾液加入超濾機中，選擇0.5萬至20萬分子量間的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機流出液和超濾機內(nèi)的濃縮液，干燥，得到1種以上的水提螺旋藻多糖，總糖含量≥40%，分子量為0.5萬~20萬。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種螺旋藻多糖的提取方法，其特征在于按以下步驟進行: (1)取螺旋藻，加4-10倍量的95%乙醇，回流提取f3次，每次f 3小時，傾去乙醇，固體物晾干，加入水4-20倍量，提取I飛次，每次2 10小時，提取溫度為6(TlO(rC，合并提取液，于彡15000 r/min轉(zhuǎn)速下離心,上清液合并,備用； (2)取上述(I)得到上清液合并液，過<1.5μπι的微孔濾膜過濾，將濾液加入超濾機中，選擇0.5萬以上分子量的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機流出液和超濾機內(nèi)的濃縮液，干燥，得到I種以上的水提螺旋藻粗多糖，總糖含量> 10%，分子量為0.5萬以上； 一種螺旋藻多糖的提取方法，其特征在于按以下步驟進行: (1)取螺旋藻，加4-10倍量的95%乙醇，回流提取f3次，每次f 3小時，傾去乙醇，固體物晾干，加入水4-20倍量，提取I飛次，每次2 10小時，提取溫度為6(TlO(rC，合并提取液，于彡15000 r/min轉(zhuǎn)速下離心,上清液合并,備用； (2)取上述(I)得到上清液合并液，濃縮，除雜處理，處理后的溶液于彡15000r/min轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，過<1.5 μ m的微孔濾膜過濾，將濾液加入超濾機中，選擇0.5萬至20萬分子量間的濾材進行超濾，至超濾機出口無液出時，收集超濾機流出液和超濾機內(nèi)的濃縮液，干燥，得到I種以上的水提螺旋藻多糖，總糖含量> 40%，分子量為0.5萬 20萬。2.根據(jù)權(quán)利要求2所...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梅艷，李俊，
申請(專利權(quán))人：昆明振華制藥廠有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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