發明專利技術涉及一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法。本發明專利技術的提取生物抗菌肽工藝，是以除脂除卵的林蛙干體為原料，經過前期清洗處理，酸化處理后，采用超聲波提取，經離心沉淀、過濾、濃縮、收集等步驟，最后制得林蛙抗菌肽濃縮液。本發明專利技術從林蛙體中直接提取抗菌肽的新工藝，操作簡單，生產效率高，產率高，廣普抗菌殺菌效率明顯等優點，可廣泛的應用于藥品、食品、水果及蔬菜保鮮、日用化妝品及飼料添加劑等領域。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種林蛙抗菌肽提取方法，尤其是利用超聲波從林蛙體中提取抗菌肽的生產制備方法。其產品可廣泛的應用于藥品、食品、水果及蔬菜保鮮、日用化妝品及飼料添加劑等領域。
技術介紹
在現有技術中，抗菌肽具有廣譜抗菌活性，對細菌有很強的殺傷作用，尤其是對一些耐藥性病原菌的殺滅作用更引起了人們的重視。鑒于抗菌肽天然廣譜抗菌、耐熱、無毒無藥殘、不易產生耐藥菌株等眾多的特點，抗菌肽有可能成為繼青霉素等傳統抗生素之后又一類重要的新型抗菌藥物。因此，抗菌肽的開發應用將是醫藥行業、食品行業、日化行業、飼料養殖行業等領域的一次革命，具有廣闊的應用前景。 抗生素應用的最佳時機是感染的前期，抗菌肽對感染的前、中、后期都有顯著的效果，不存在時機問題。抗生素應用有配伍禁忌，抗菌肽可以和任何藥物配伍應用。抗生素在不同給藥方式會產生不同的治療效果，抗菌肽口服和注射的效果相同，不存在用藥注意事項，可以按照最方便的方法給藥。抗生素存在不同程度的副作用、藥殘等問題，使用中有停藥期的規定，抗菌肽無藥殘、無毒副作用，無停藥期規定。抗菌肽還有起效時間快，10分鐘內被吸收完畢而且100%被吸收。抗生素存在吸收利用不完全，以及代謝造成的蓄積中毒危險，對肝腎損傷最大，抗菌肽無積累性中毒現象，并有協助排毒功能，抗菌肽來自于動植物自身免疫系統，是純正的綠色產品，其抗菌肽在各行業的應用前景也很廣泛。根據相關資料對東北林蛙皮抗菌肽的初步研究表明，林蛙皮分泌物由多種組分組成，一只東北林娃個體可以同時在表面分泌多達12種的成熟抗菌肽。林娃皮抗菌肽是具有廣譜抗菌作用的多肽。林蛙皮抗菌肽在畜牧業中的應用:作為飼料添加劑，使轉化率、成活率有了較大的提聞。林蛙皮抗菌肽在日化用品中的應用:化妝品:溫和殺菌，消炎祛紅腫。衛生用品:有洗手液，沐浴露，濕紙巾等。抗菌肽無毒、無不良反應、無殘留且無致細菌耐藥性的一類環保型制劑，與酒精或抗生素等傳統抗菌成分比有巨大的優勢。林蛙皮抗菌肽在剃須膏和須后水等男士用品:劃傷皮膚防感染，促進傷口愈合。林蛙皮抗菌肽在口腔保健品:漱口水、口腔噴劑、牙膏、含片、口香糖等。適當添加抗菌肽達到殺菌，消炎的效果。抗菌肽水溶性好，用于水果蔬菜保鮮可形成無色保護摸，殺死表面細菌，從而達到保鮮目的。抗菌肽是具有生物活性的多肽類物質，對綠膿桿菌、金黃葡萄桿菌等多種病菌和病毒都有明顯的殺滅效果。在醫藥中，林 蛙皮抗菌肽可起到消炎，抗感染，抗真菌、促進傷口愈合的作用，如果將此液應用于燒燙傷產品中，在防止皮膚感染、止痛鎮痛方面都有明顯的效果。應用于日化產品中，對于皮膚無刺激性傷害，消炎殺菌消毒效果明顯。應用于果蔬保鮮能明顯延長保鮮期，應用于養殖業可提高家畜免疫力，提高攔存活率。已有從林娃表皮中提取抗菌肽的方法。如《吉林工學院學報》自然科學版2002年第2期發表了邱芳萍、周杰文章“從吉林林蛙皮中提取抗菌肽”，其方法是原料蛙皮、溶脹、抽提、離心制得。再如《食品科學》2008年第10期發表了金莉莉；丁忠福；王秋雨文章“中國林蛙皮抗菌肽提取條件的優化研究”，其方法是原料蛙皮、浸提、冷凍干燥制得。中國專利技術專利申請說明書于2009年06月17日公開了一種名稱為“林蛙抗菌肽及制備工藝和在抗病毒藥物中的應用”，專利申請號:200810051423.0 申請日:2008.11.14。該專利技術公開了一種林蛙抗菌肽及其制備工藝，包括以下步驟:(I)將林蛙干蛙皮，用pH4.00.2mol / L的醋酸-醋酸鹽緩沖溶液以料液比為1:8-12 (m / v)的比例室溫浸泡20— 30小時；(2)將所得浸提液5000r.p.m離心30min，棄沉淀，留上清；將上清液再煮沸5min，冷卻，5000r.p.m離心30min，取上清過30KDa膜即得抗菌肽濾液。其缺點是原料直接采用林蛙皮，林蛙皮剝皮困難，并且費工費時，損失浪費嚴重。按此工藝得到的抗菌肽濾液其抗菌效果不夠理想。
技術實現思路
本專利技術目的是提供一種工藝優化、生產效率高、抗菌活力顯著的生物抗菌肽生產工藝及其制備方法。本專利技術的技術解決方案是:一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，采用除塵除雜除脂除卵的林蛙干體為原料制備。一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，其步驟如下: (I)原料:林蛙干體；之前進行常規除脂除卵去塵除雜處理。(2)加10-20倍于蛙體的4-8%醋酸于10_30°C溶脹0.5-1.5小時。(3)將溶脹后的蛙體及醋酸液，在功率為100-250W，頻率為20_60kHz超聲波發生器內進行超聲提取至少一次，提取時間10 - 40分鐘(常溫)；過濾，得提取液。(4)提取液在3000-10000ρ.r.m/10-20min條件下離心,棄去沉淀,收集上清液。(5)在35°C _65°C溫度下加熱5_15min，然后降至5_10°C過濾。(6)按步驟(3)、(4)重復操作1-3次；合并上清液，再按步驟(5)進行，得抗菌肽濾清液。或在步驟(5)后，將抗菌肽濾清液在30-60°C和-0.5個大氣壓條件下濃縮至1/3-1/10體積，抗菌肽濃縮液于0-4°C條件下保存。一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，其步驟如下: (I)取林蛙干體50g，進行去塵除雜處理。(2)加15倍于蛙體的6%醋酸750mL于15°C溶脹0.3小時。(3)溶脹后的蛙體，放入功率為150W，頻率為30kHz的超聲波中提取10分鐘；在步驟(2)、(3)同樣條件下，再提取I次。(4)合并提取液,在5000p.r.m, 15min離心，棄去沉淀，收集上清，重復操作步驟(3)、(4)兩次。(5)合并上清液，在55°C環境下加熱IOmin后降至10°C過濾。(6)在45°C環境下，在-0.5個大氣壓條件下濃縮至1/5體積。(7)收集濃縮液于4°C條件下保存。上述方法獲得的抗菌肽具有如下特征； (I)熱穩性:抗菌肽60°C 6小時不失活，95°C IOmin還有活力。(2) pH值穩定性:在口112-6范圍內活力穩定，最適合？!1值3.5。(3)等電點:用pH值調節采用吸光度法測定林蛙抗菌肽pi值，pi值為8.0-10.5的堿性多肽。(4)分子量:采用凝膠過濾層析法、聚丙稀酰氨垂直板電泳法及激光解吸電離飛行時間質譜法，測得分子量為4KD a。超聲提取法是利用超聲波的空化作用、機械作用等加速胞內有效物質的釋放、擴散和溶解的方法，當大能量的超聲波作用于介質時，介質被撕裂成許多小空穴，這些小空穴瞬時閉合，并產生高達幾千個大氣壓的瞬間壓力，使整個生物體細胞壁的破裂在瞬間完成，縮短了破碎時間，同時超聲波產生的振動作用加強了胞內物質的釋放、擴散和溶解，從而顯著提高提取效率，提高有效成分析出，最終提高了林蛙抗菌肽抑菌活性。本專利技術優點:1、以林蛙干體為原料，直接提取，省掉人工扒皮的繁瑣工序，降低了勞動強度、節省原材料，降低生產成本，提高了生產效率，符合工業化生產。2、增加超聲波提取步驟，代替了以前傳統的藥物浸提、離心處理蛙皮提取抗菌肽的工藝制備方法，加強了胞內物質的釋放、擴散和溶解，從而顯著提高提取效率，優化了提取工藝，最終提高了林蛙抗菌肽抑菌活性。經試驗，以相同質量的林蛙干(皮)進行提取，在提取液體積相同的條件下，超聲提取林蛙干抗菌肽，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，其特征在于采用除塵除雜除脂除卵的林蛙干體為原料制備。
【技術特征摘要】
1.一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，其特征在于采用除塵除雜除脂除卵的林蛙干體為原料制備。2.如權利要求書I所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，其特征在于其步驟如下: (O原料:林蛙干體； (2)加10-20倍于蛙體的4-8%醋酸于10-30°C溶脹0.5-1.5小時； (3)將溶脹后的蛙體及醋酸液，在功率為100-250W，頻率為20-60kHz超聲波發生器內進行超聲提取至少一次；提取時間10 - 40分鐘，過濾，得提取液； (4)提取液,在3000-10000p.r.m/10-20min條件下離心,棄去沉淀,收集上清液； (5)在35°C_65°C溫度下加熱5-15min，然后降至5_10°C過濾，得抗菌肽濾清液。3.如權利要求書2所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，其特征在于按步驟(3)、(4)重復操作I 一 3次；合并上清液，再按步驟(5)進行。4.如權利要求書3所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產制備方法，其特征在于在步驟(5)后，將抗菌肽濾清液在30-6(TC和-0.5個大氣壓條件下濃縮至1/3-1/10體積，抗菌肽濃縮液于0-4°C條件下保存。5.如權利要求書4所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：林萬君，陸軍，滕利榮，孟慶繁，逯家輝，王娟，
申請(專利權)人：通化康元生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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