一種正品半夏的檢測方法技術

本發明專利技術公開了一種正品半夏的檢測方法，包括如下步驟：（1）取待檢樣品，加1~3倍重量的水，水溫0℃~5℃，勻漿，離心，得上清液；（2）用SDS-PAGE電泳方法檢測步驟（1）的上清液，在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和/或0.897有譜帶，所述電泳的濃縮膠濃度為5%，分離膠為濃度12%。本發明專利技術正品半夏的檢測方法準確度高，操作方便，成本低廉，市場應用前景良好。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及正品半夏的檢測方法，屬于中藥領域。
技術介紹
半夏來源于天南星科植物半夏Pinellia ternata (Thunb. ) breit.的干燥塊莖， 呈類球形，有的稍偏斜少數為長遠球形，直徑f1. 5cm;表面白色或淺黃色，頂端有凹陷的莖痕，周圍密布麻點狀根痕；下面鈍圓，較光滑；質堅實，斷面潔白，富粉性，粉末嗅之嗆鼻； 氣微，味辛辣、麻舌而刺喉。近幾年半夏的市場需求量持續增加，野生資源逐年減少，人工栽培發展緩慢，使得半夏資源蘊藏量和產量都在大幅下降。導致市場上出現了很多偽品，給半夏藥材的質量、用藥的安全性及有效性帶來了很大的沖擊。通過對中藥材市場的調研發現，半夏的偽品主要為水半夏、虎掌南星和禹白附。水半夏，為天南星科植物鞭檐的干燥塊莖。呈近圓形、橢圓形、圓錐形或倒卵形，直徑O. 5^1. 5cm，高O. 8 3cm。表面類白色或淡黃色，不平滑，遍體隱約可見狀根痕；上端類圓形，常用有偏斜而凸起的葉痕或芽痕，黃棕色，下端有點兒略尖。質堅實，斷面白色，粉性。氣微，味辛辣，麻舌而刺喉。虎掌南星，為天南星科植物掌葉半夏的干燥塊莖。呈近球形，直徑3 4cm，外皮粗糙，褐色，剝去外皮為類白色或淡棕黃色，頂端有深陷的莖痕，有的周邊生有數個扁球狀塊莖，形如虎掌，氣微，味辛辣。禹白附，為天南星科植物獨角蓮的干燥塊莖。呈橢圓形或卵圓形，直徑f2cm，高 2 5cm。表面白色或黃白色，略粗糙，有環紋及根痕，頂端具凹陷莖痕，下端鈍圓。質堅硬，難折斷，斷面類白色，粉性。氣微，味淡，嚼之麻辣刺舌。目前，正品半夏的有效檢測方法是傳統形態特征和理化特性的鑒別方法，其非常復雜并具有一定的局限性。
技術實現思路
為了解決上述問題，本專利技術提供了。本專利技術正品半夏的檢測方法，包括如下步驟(I)取待檢樣品，加f 3倍重量的水，水溫為0°C飛。C，勻漿，離心，得上清液；(2)用SDS-PAGE電泳方法檢測步驟(I)的上清液，其在Rm值O. 208、0.232、 O. 312,0. 335,0. 383,0. 405,0. 429,0. 491,0. 615,0. 85 和 / 或 O. 897 有譜帶，所述電泳濃縮膠濃度為5%，分離膠濃度12%。其中，步驟(I)中，所述冰水重量為待檢樣品重量的2倍，所述離心為2000r/min離心 2min。其中，步驟(2)中，所述上清液在Rm 值 O. 208,0. 232,0. 312,0. 335,0. 383,0. 405、 O. 429,0. 491,0. 615,0. 85 和 O. 897 有譜帶。SDS-PAGE電泳十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳。Rm值相對遷移率或者相對泳動率=蛋白絕對遷移距離/溴酚藍遷移距離。其中，所述步驟(2)包括如下步驟I)取上清液，加入O. Γ1倍體積樣品緩沖液，混勻，離心，得上樣液，所述樣品緩沖液是lmol/1 Tris-鹽酸緩沖液，并添加有O. 15mol/l SDS和O. 03mol/l溴酚藍；2)取步驟I)的上樣液上樣，電泳，固定，染色，洗脫即可，所述電泳緩沖液為 Tris-甘氨酸緩沖液。其中，步驟I)中，所述樣品緩沖液為上清液的O.1倍；混勻后在沸水中加熱3min ； 所述離心的條件是4000r/min離心離心30s。其中，步驟I)中，所述樣品緩沖液還添加有20% (v/v)甘油和10% (ν/ν) β -巰基乙醇。其中，步驟2)中，所述固定采用的固定液為10%的三氯醋酸溶液；所述染色采用的染色液為考馬氏亮藍染色液；所述洗脫采用的洗脫液為考馬氏亮藍洗脫液。優選地，所述染色是用考馬氏亮藍染色液浸泡凝膠，50°C 60°C水浴加熱15min， 并不斷振蕩，放冷后傾去染色液。本專利技術方法可以準確檢測正品半夏，準確度高，檢測方法簡單、快速，可以替代傳統檢測方法，具有良好的應用前景。顯然，根據本專利技術的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本專利技術上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實施例形 式的具體實施方式，對本專利技術的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本專利技術上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本專利技術上述內容所實現的技術均屬于本專利技術的范圍。附圖說明圖1樣品處理方法檢測結果，其中，泳道I 9 :方法I 9，M :標準蛋白；圖2染色方法檢測結果；圖3待見樣品檢測結果；圖4待見樣品檢測結果；圖5待見樣品檢測結果。具體實施方式試劑A液1. 5MTris-HCL溶液(分離膠儲存液)精密稱取Tris堿(分析純)18. 15g，加適量的超純水溶解，用濃鹽酸(分析純)調 PH值至8.8，加超純水定容至10011^。貼上標貼，4°C保存。此溶液有效使用期限為三個月。B液IMTris-HCL溶液(濃縮膠儲存液)精密稱取Tris堿(分析純)12.1g,加適量的超純水溶解，用濃鹽酸(分析純)調 pH值至6. 8，加超純水定容至100mL。貼上標貼，4°C保存。此溶液有效使用期限為三個月。C液30%丙烯酰胺儲存液精密稱取丙烯酰胺(Acr，分析純)29. 2g、N，N’ -甲叉雙丙烯酰胺(分析純)O. Sg, 加適量的超純水溶解，再定容至IOOmL,用濾紙過濾，貼上標貼，避光4°C保存。此溶液有效使用期限為三個月。D 液10%SDS 溶液精密稱取SDS (分析純)10g，用超純水溶解至IOOmL,貼上標貼，室溫儲存。此溶液有效使用期限為三個月。 E液10%過硫酸胺(AP)溶液精密稱取過硫酸胺(分析純)10g，用超純水溶解至IOOmL,貼上標貼，_20°C保存。 此溶液最好于臨用前配置。F 液1%TEMED 溶液精密吸取T液lmL，加超純水定容至IOOmL,置于棕色瓶中于4°C保存。取上述原料，配制濃度為5%濃縮膠和濃度為12%的分離膠。電泳緩沖液精密稱取稱取Tris堿(分析純)6g、甘氨酸(分析純)28. 8g、SDS (分析純)10g，加超純水定容至IOOOmL,臨用前加超純水稀釋10倍，貼上標貼，室溫儲存。樣品緩沖液精密稱取SDS(分析純)4g，溴酚藍(分析純)0. 2g,加20mL甘油 (分析純)，IOmLlMTris-HCl (ρΗ6· 8)溶液，IOmL β -巰基乙醇(分析純)，加超純水溶解至 IOOmL,貼上標貼，室溫儲存。考馬氏亮藍染色液精密稱取考馬氏亮藍R — 250 (分析純)lg，加甲醇(分析純)200mL,冰醋酸(分析純)50mL,以超純水定容至500mL，貼上標貼，室溫儲存。考馬氏亮藍洗脫液量取乙醇(分析純)250mL,冰醋酸(分析純)80mL,加超純水定容至IOOOmL,貼上標貼，室溫儲存。染色固定液10%的三氯醋酸溶液。實施例1本專利技術檢測方法1、檢測方法(I)供試品的制備稱取半夏藥材2g，加冰水4mL，在研缽中快速研磨，立即轉移至離心管中，于 2000r/min條件下離心2min ；取上清液50 μ 1，加樣品 緩沖液5 μ 1，混勻后于沸水中加熱3min，于4000r/min條件下離心30s，冷凍儲存備用。(2)電泳制備濃縮膠和分尚膠，待分尚膠與濃縮膠充分凝固后，在電泳槽中加入稀釋10倍的電泳緩沖液，加入量以沒過玻璃板為準。然后用移液槍吸取20μ I樣品，注入加樣孔中。 接通電源本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種正品半夏的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）取待檢樣品，加1~3倍重量的水，水溫0℃~5℃，勻漿，離心，得上清液；（2）用SDS?PAGE電泳方法檢測步驟（1）的上清液，其在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和/或0.897有譜帶，所述電泳的濃縮膠濃度為5%，分離膠濃度為12%。

【技術特征摘要】
1.一種正品半夏的檢測方法，其特征在于包括如下步驟(1)取待檢樣品，加廣3倍重量的水，水溫(TC飛。C，勻漿，離心，得上清液；(2)用SDS-PAGE電泳方法檢測步驟(I)的上清液，其在Rm值O.208,0. 232、0· 312、O.335、O. 383、O. 405、O. 429、0. 491、0. 615、0. 85 和 / 或 O. 897 有譜帶，所述電泳的濃縮膠濃度為5%，分離膠濃度為12%。2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟(I)中，所述水為待檢樣品重量的2倍；所述離心為2000r/min離心2min。3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟(2)中，所述上清液在Rm值O.208,0. 232,0. 312,0. 335,0. 383,0. 405,0. 429,0. 491,0. 615,0. 85 和 O. 897 有譜帶。4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述步驟(2)包含如下步驟1)將上清液加入O.Γ1倍體積樣品緩沖液，混勻，離心，得上...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李敏，盧道會，楊小艷，
申請(專利權)人：成都中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：