一種GLP-1類似物、制備方法及其應用技術

本發明專利技術公開了一種GLP-1類似物、制備方法及其應用。所述GLP-1類似物具有下列通式A：7HAEX10TFTSX15VSSYLEX22QAAKEFIX30WLX33KGRG37n1X1Cn2X2。本發明專利技術的GLP-1類似物能夠有效增加GLP-1的血液半衰期，克服其因為半衰期短而無法在臨床上使用的現狀，在糖尿病、肥胖癥治療藥物領域較有應用前景。本發明專利技術還公開了所述GLP-1類似物的制備方法及其應用。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及糖尿病相關的藥物領域，具體而言，本專利技術涉及一種具有延長的胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)類的體內半衰期的GLP-1類似物。本專利技術還涉及該GLP-1類似物的制備方法以及其在制備糖尿病藥物中的應用。
技術介紹
本專利技術涉及的GLP-1 (glucagon-likepeptide-Ι,以下簡稱GLP_1)是主要由小腸L細胞分泌的一種37個氨基酸組成的多肽，其活性形式為GLP-1 (7-37) OH和GLP-1 (7-36)NH2 (Mojsov S，J Clin Invest. 1987 Feb; 79(2) : 616-9)。GLP-1 明顯減低人用餐后的血糖，能刺激胰島素的產生，同時還能起到一定減肥效應，并且不會引起低血糖癥(DruckerD J, Diabetes. 1998 Feb; 47(2) : 159-69)。近期研究還表明GLP-1有胰腺再生作用(Drucker D J, 2003Dec; 144 (12) : 5145-8)。此外，因為GLP-1為完全人源化多肽，作為臨床藥物在安全上具有較大優勢。然而，GLP-1 (7-37)的血清半衰期僅僅為3-5分鐘，每天多次注射給藥在臨床使用中非常不方便。目前已經有不少研究采用GLP-1類似物融合蛋白技術解決GLP-1類似物在體內的存留時間(CN9010 1167. 3、CN200710018734. 2、CN200410054397. 9、CN01820232. 2、CN200380110152. 7、CN200510039265. 3、CN200610127237.1、CN200910009642. 7)，然而，現有的技術與臨床理想的目標還有很大距離，普遍都還沒有達到臨床標準，最近NovoNorisk生產的利拉魯肽為GLP-1類似物，其對GLP-1進行了棕櫚酸的修飾，并于2009年于美國上市。但是利拉魯肽也存在半衰期短的問題，其劑型仍需每日注射。因此，目前存在對解決GLP-1體內半衰期短的方法的需求。
技術實現思路
除非另外指出，本文所述的“Fmoc策略”是指以聚合物樹脂作為固相反應基質，將氨基端Fmoc保護的氨基酸在偶聯試劑的存在下依次縮合，從而合成多肽的合成方法。其具體方法參見 Fmoc solid phase peptide synthesis: a practical approach, 2000,Oxford University Press. 本專利技術的一個目的是針對臨床上GLP-1類似物在體內存留時間較短，需要每天注射給藥的缺限，提供一種半衰期較長的GLP-1的類似物。本專利技術的另一個目的是提供一種GLP-1類似物在制備治療糖尿病的藥物中的應用，以及該GLP-1類似物在制備治療和/或預防肥胖癥的藥物中的應用。本專利技術的又一個目的是提供一種以GLP-1類似物作為有效成分的藥用組合物，其包含上述GLP-1類似物。其中，所述的藥物組合物還包含一種或多種藥學上可接受的輔料，并且所述藥物組合物優選為注射劑，進一步優選為凍干粉針或溶液注射劑。用于實現上述目的的技術方案如下 一方面，本專利技術提供一種GLP-1類似物，所述GLP-1類似物具有下列通式A 7HAEX10T FTSDVS X18YLEX22QA X25K EFIX30W LX33KGR G37H1X1 n2X2通式A， 其中，X10為甘氨酸或半胱氨酸，X18為絲氨酸或半胱氨酸，X22為甘氨酸或者半胱氨酸，X25為丙氨酸或半胱氨酸，X30為丙氨酸或半胱氨酸，X33為纈氨酸或半胱氨酸，并且Χ1(ι、Χ 8>X25> X30和X33中有且只有兩個為半胱氨酸W1X1表示有II1個X1, H1=O^O,且X1為絲氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺；η2χ2表示有η2個Χ2，η2=(Γ30，且X2為絲氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺；nl、η2不同時為0，以及通式A中含有的兩個半胱氨酸均形成二硫鍵。優選地，所述的GLP-1類似物所述GLP-1類似物具有下列通式1:7HAEX10T FTSDVS X18YLEGQA X25K EFIX30W LX33KGR G37H1X1 η2Χ2 通式I, 其中 Ii1=I 30, η2=1 30。所述具有通式I的GLP-1類似物如SEQ ID NO1: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAff LVKGR GSS ；SEQ ID NO 2: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSSSS ；SEQ ID NO 3: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSSSSSSS ;或SEQ ID NO 4:HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSS。優選地，所述GLP-1類似物具有下列通式II 7HAEGT FTSDVS X18YLEGQA X25K EFIAff LVKGR G37H1X1 n2X2通式II， Ii1=I 20，n2=l 20，并且其中X1為絲氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺，X2為絲氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺； 優選地，Ii1=I 20, n2=l 20 ； 進一步優選地，所述Ii1=I 10, n2=l 10 ；nl=n2; 進一步優選地，所述GLP-1類似物為SEQ ID NO 5: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSS ；SEQ ID NO 6: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSSSS ；SEQ ID NO 7: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSSSSSS ； SEQ ID NO 8: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSS ；SEQ ID NO 9: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSSSS ；SEQ ID NO 10: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSSSSSS ；SEQ ID NO 11: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSSSSSSSS ；SEQ ID NO 12: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GSSSSSSSSSSSSSSSSSSSS ；SEQ ID NO 13: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GEE ；SEQ ID NO 14: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GEEEE ；SEQ ID NO 15: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GEEEEEE ；SEQ ID NO 16: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAff LVKGR GEEEEEEEE ；SEQ本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種GLP?1類似物，所述GLP?1類似物具有下列通式A：7HAEX10T?FTSDVS?X18YLEX22QA?X25K?EFIX30W?LX33KGR?G37n1X1?n2X2????通式A，???其中，X10為甘氨酸或半胱氨酸，X15為天冬氨酸或半胱氨酸，X22為甘氨酸或半胱氨酸，X30為丙氨酸或半胱氨酸，X33為纈氨酸或半胱氨酸，并且X10、X15、X22、X30和X33中至少有一個為半胱氨酸；n1X1表示有n1個X1，n1=1~30，且X1為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸；n2X2表示有n2個X2，n2=0~30，且X2為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸；以及通式A中含有的兩個半胱氨酸均形成二硫鍵。

【技術特征摘要】
1.一種GLP-1類似物，所述GLP-1類似物具有下列通式A 7HAEX10T FTSDVS X18YLEX22QA X25K EFIX30W LX33KGR G37H1X1 n2X2 通式A， 其中，X10為甘氨酸或半胱氨酸，X15為天冬氨酸或半胱氨酸，X22為甘氨酸或半胱氨酸，X30為丙氨酸或半胱氨酸，X33為纈氨酸或半胱氨酸，并且Χ1(Ι、Χ15、Χ22、Χ3(Ι和X33中至少有一個為半胱氨酸； Ii1X1表示有Ii1個X1, ηι=Γ30,且X1為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸； Ii2X2表示有H2個Χ2，η2=(Γ30，且X2為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸；以及通式A中含有的兩個半胱氨酸均形成二硫鍵。2.如權利要求1所述的GLP-1類似物，其特征在于，所述GLP-1類似物具有下列通式I7HAEX10T FTSX15V SSYLE X22QAAK EFIX30W LX33KGR G37H1X1C η2Χ2通式I, 其中ηι=3 30，η2=3 30 ;優選地，所述GLP-1類似物為SEQ ID NO 82: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37 GGGGG GGGGG C GGGGGGGGGG ；SEQ ID NO 83: 7HAEGT FTSDV SSYLE CQMK EFIAff LVKGR G37 GGGGG C GGGGG GGGGG ；或 SEQ ID NO 84: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37 GGG C GGGGGGGGGGGGGGGGGGGG。3.如權利要求1所述的GLP-1類似物，其特征在于，所述GLP-1類似物具有下列通式II7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G3S1X1C η2Χ2通式II， Ii1=I 20，η2=0 25，并且其中X1為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸，X2為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸； 優選地，1^=3 20, η2=3 25 ;進一步優選地,所述1^=5 15, η2=3 9。4.如權利要求3所述的GLP-1類似物，其特征在于，所述GLP-1類似物為SEQ ID NO1: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG C GGG ；SEQ ID NO 2: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG GGGGGC GGG ；SEQ ID NO 3: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG GGGGGGGGGGC GGG ；SEQ ID NO 4: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG C GGGGG G ；SEQ ID NO 5: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG C GGGGG GGGG ；SEQ ID NO 6: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG GGGGGC GGGGG G ；SEQ ID NO 7: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG GGGGGC GGGGGGGGG ；SEQ ID NO 8: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG GGGGGGGGGGC GGGGGG ；SEQ ID NO 9: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37GGGGG GGGGGGGGGGC GGGGGGGGG ；SEQ ID NO 10: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAAAA C AAA ；SEQ ID NO 11: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAAAA AAAAAC AAA ；SEQ ID NO 12: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AMM MAMMAMC AM ；SEQ ID NO 13: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAAAA C AAAAA A ；SEQ ID NO 14: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAAAA C AAAAA AAAA ；SEQ ID NO 15: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAMA MAAAC AMAA A ；SEQ ID NO 16: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAAAA AAAAAC AAAAAAAAA ；SEQ ID NO 17: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAAAA AAAAAAAAAACAAAAA A ；SEQ ID NO 18: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37AAAAA AAAAAAAAAACAAAAA AAAA ；SEQ ID NO 19: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV C VVV ；SEQ ID NO 20: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV VVVVVC VVV ；SEQ ID NO 21: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV VVVVVVVVVVC VVV ；SEQ ID NO 22: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV C VVVVV V ；SEQ ID NO 23: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV C VVVVV VVVV ；SEQ ID NO 24: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV VVVVVC VVVVV V ；SEQ ID NO 25: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV VVVVVC VVVVVVVVV ；SEQ ID NO 26: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV VVVVVVVVVVCVVVVV V ;或SEQ ID NO 27: 7HAEGT FTSCV SSYLE GQAAK EFIAff LVKGR G37VVVVV VVVVVVVVVVCVVVVV VVVV05.如權利要求1所述的GLP-1類似物，其特征在于，所述GLP-1類似物具有下列通式III7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37 Ii1X1 C n2X2通式III, 其中，Ii1=I 10，n2=0 25，X1為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸，X2為甘氨酸、丙氨酸或纈氨酸；優選地，1^=3 10, n2=3 25 ;或者，Ii1=I 5, n2=10 20 ;進一步優選地，Ii1=S 5,n2=10 20。6.如權利要求5所述的GLP-1類似物，其特征在于，所述GLP-1類似物為SEQ ID NO 28: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37G C GGGGG GGGGG ；SEQ ID NO 29: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQMK EFICff LVKGR G37G C GGGGG GGGGGGGGGG ；SEQ ID NO 30: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37G C GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG ；SEQ ID NO 31: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37GG C GGGGG GGGGG ；SEQ ID NO 32: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQMK EFICff LVKGR G37GG C GGGGG GGGGGGGGGG ；SEQ ID NO 33: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37GG C GGGGGGGGGGGGGGGGGGGG ；SEQ ID NO 34: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37GGGGG C GGGGG GGGGG ；SEQ ID NO 35: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37GGGGG C GGGGGGGGGGGGGGG ； SEQ ID NO 36: 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFICff LVKGR G37GGGGG C GGGGGGGGGGGGGGGGGGGG ；S...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李瑛，
申請(專利權)人：天津嘉宏科技有限公司，
類型：發明
國別省市：