本發明專利技術公布了大孔吸附樹脂法從蜂王漿中提取10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)的工藝。蜂王漿溶于95％乙醇，經超聲提取；提取液加去離子水稀釋后用大孔吸附樹脂X-5吸附提取液中的10-HAD；吸附后的樹脂裝入層析柱，以75％～95％的乙醇解吸，收集含10-HAD的解吸液；洗脫液蒸發濃縮、冷凍干燥獲得純度≥92.5％的10-HAD。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種從蜂王漿中提取10-羥基-2-癸烯酸的工藝，特別是一種大孔吸附樹脂吸附層析法提取癸烯酸的工藝。
技術介紹
蜂王漿又名蜂皇漿， 是由11 21日齡的青年工蜂下咽頭腺和大顎腺分泌的，主要用于飼喂蜂王和幼蟲，呈乳白色、淡黃色或淺橙色半透明為粘稠漿狀，具有特殊香味、味酸、 澀、辛、略甜，富含蛋白質、糖類、脂肪酸、維生素、游離氨基酸等生理活性物質。蜂王漿具有活化細胞、促使傷口愈合、促進內分泌、增加食欲、增強體力、防治骨質疏松、防衰老、安神、 抗菌、抗癌、抗輻射等多種生理活性作用，具有極高的醫藥和保健價值。10-羥基-2-癸烯酸(10-Hydroxy-2-Decenoic acid, 10-HDA)又稱王衆酸,是蜂王衆中主要的活性成分,是德國科學家D. J朗格于1921年首次在工蜂上顎腺中發現的。1957年，A. Butenandt首先報道從蜂王漿中分離得到10-HAD。此后，國內外學者從性質、結構、藥理及測定方法等方面對 10-HAD進行了較為深入的研究。10-HAD是一種不飽和脂肪酸，分子式為HO-CH2-(CH2)6-CH =CH-COOH(C10H18O3)，分子量186. 25，白色絮狀結晶或針狀結晶，不易吸潮，在高溫條件下易變為油狀或焦化，低溫冷凍干燥時不易升華。熔點為64°C，溶于甲醇、乙醇、乙醚和氯仿，微溶于丙酮，難溶于水。對石蕊試紙顯酸性，能使溴水和高錳酸鉀溶液迅速褪色，對三氯化鐵不顯紫色。研究表明，10-HAD對人和動物具有多方面的藥理作用。第一，抑菌殺菌作用， 10-HAD對金黃葡萄球菌、鏈球菌、變形桿菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、結核桿菌星狀癬菌、 表皮癬菌等具有抑菌殺菌作用，10-HAD對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃葡萄球菌的最低以菌濃度(MIC)分別為 O. 625mg/mL、l. 25mg/mL、2. 5mg/mL ;第二，抗癌、抗腫瘤作用，10-HAD 可通過刺激環狀-腺磷苷的合成，使蛋白質螺旋結構和氨基酸序列正常化，從而使受腫瘤破壞的結構正常化，因而對癌細胞具有抑制作用；第三，抗輻射作用，10-HAD具有保護和修復蛋白質、DNA、RNA的作用，所以它能對急性輻射損傷起到防治作用；第四，降血脂作用， 10-HAD能減少飯后脂肪堆積，防止脂類物質的合成，是改善血液中脂肪含量的一部分因素， 對高血脂癥具有良好的治療作用。10-HAD作為一種擁有顯著生理活性的物質，不僅可以直接作為藥物使用，而且還是食品、化妝品的添加劑，還可以用于合成香料和醫藥中間體，市場需求極大。迄今為止，已報道的10-HAD的提取方法主要有乙醇提取法、乙醚提取法、溶液沉淀結晶法、醇中沉淀結晶法及高效液相色譜法(HPLC)等。有機溶劑提取法不但過程復雜、工序繁瑣、回收率較低， 而且獲得的10-HAD純度不高。HPLC法雖然可獲得純度較高的10-HAD，但是該方法不適于工業化生產。大孔吸附樹脂具有選擇性好、回收率高、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、宜于構成閉路循環、節省費用等諸多優點。本專利技術利用大孔吸附樹脂提取蜂王漿中的10-HAD，獲得的10-HAD純度高，而且具有回收率高、工藝流程簡單、對生物活性無損等特點，適用于10-HDA的工業化大規模生產。
技術實現思路
本專利技術提供一種利用大孔吸附樹脂快速、無損的從蜂王漿中提取高純度10-HAD 的方法。為了達到上述目的，本專利技術采用的技術方案為，用95%乙醇將蜂王漿稀釋適當倍數后，超聲振蕩提取，去離子水稀釋；提取液經大孔吸附樹脂靜態吸附；吸附樹脂裝柱，乙醇動態洗脫，收集洗脫液中含10-HDA的組份；經蒸發濃縮、冷凍干燥獲得純度> 92. 5%的 10-HDA。其具體過程如下a、將蜂王漿與一定比例的95 %乙醇混合、振蕩混勻，置于超聲波中超聲提取 15min, 3000r/min 離心 5min,取上清。b、將a步驟中獲得的上清液用4 5倍體積的去離子水稀釋后與大孔吸附樹脂 X-5按一定比例混合，150r/min振蕩吸附3h 4h。C、將吸附后的大孔吸附樹脂X-5裝入層析柱，先用3倍柱體積20%乙醇洗脫，去除部分雜質，然后用濃度為75 % 95 %的乙醇解吸10-HDA，流速為lmL/min，核酸蛋白檢測器檢測波長為245nm，根據解吸曲線收集含10-HAD組份的解吸液。d、將收集到的解吸液蒸發濃縮、然后冷凍干燥，所得到的干物即為10-HAD。其中步驟a中所述的蜂王漿與95%乙醇的比例為1: 3 (m/v)。步驟b中上清液與大孔吸附樹脂X-5的比例為I 10 (m/v)。本專利技術具有如下優點(I)利用95%的乙醇超聲提取10-HAD條件溫和、回收率高。(2)本專利技術采用的大孔吸附樹脂X-5對10-HAD選擇性良好，吸附、解吸速度快，吸附容量大，所用試劑可回收利用，且工藝流程簡單，適于工業生產。(3)本專利技術所提取的10-HAD純度高，并且自然狀態下可保持原有的生理活性。具體實施方式 實施例1 :(I) 95%乙醇超聲提取10-HAD :將蜂王漿與95%乙醇按1: 3(m/v)的比例混合、 振蕩混勻，置于超聲波中超聲提取15min, 3000r/min離心5min,取上清。(2)大孔吸附樹脂吸附10-HAD :將上清液用4 5倍體積的去離子水稀釋后與大孔吸附樹脂X-5按1: 10 (m/v)比例混合，150r/min振蕩混勻4h，棄去吸附后的殘液，收集樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂3次。(3)解吸劑解吸10-HAD :吸附后的大孔吸附樹脂X-5裝入層析柱，先用3倍柱體積 20%乙醇洗脫，去除部分雜質，然后用濃度為75%的乙醇解吸10-HDA，流速為lmL/min根據解吸曲線收集含10-HAD的解吸液。(4) 10-HAD的獲得及純度測定將收集的解吸液蒸發濃縮、冷凍干燥后獲得的白色物質即10-HAD。經HPLC外標法測定其回收率為81%，純度為95%。實施例2 (I) 95%乙醇超聲提取10-HAD :將蜂王漿與95%乙醇按1: 3(m/v)的比例混合、震蕩混勻，置于超聲波中超聲提取15min，3000r/min離心5min，取上清。(2)大孔吸附樹脂吸附10-HAD :將上清液4 5倍體積的蒸餾水稀釋后與大孔吸附樹脂X-5按1: 10 (m/v)比例混合，150r/min振蕩混勻4h，棄去吸附后的殘液，收集樹脂， 用蒸餾水洗滌樹脂3次。(3)解吸劑解吸10-HAD :吸附后的大孔吸附樹脂X-5裝入層析柱，先用3倍柱體積 20%乙醇洗脫，去除部分雜質，然后用濃度為95%的乙醇解吸10-HDA，流速為lmL/min根據解吸曲線收集含10-HAD的解吸液。(4) 10-HAD的獲得及回收率、純度測定將收集的解吸液蒸發濃縮、冷凍干燥后獲得的白色物質即10-HAD。經HPLC內標法測定其回收率為8 7%，純度為92. 5%。本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種大孔吸附樹脂法從蜂王漿中提取10?羥基?2?癸烯酸(10?HDA)的方法，該方法包括以下工藝步驟：(1)蜂王漿經95％乙醇溶解后，超聲提取；(2)提取液用去離子水稀釋后與大孔吸附樹脂按一定比例混合，150r/min振蕩吸附3h～4h；(3)吸附后樹脂裝柱；先以20％的乙醇洗脫雜質，然后以75％～95％的乙醇洗脫10?HAD；(4)將收集到的洗脫液蒸發濃縮、冷凍干燥所得白色物質即為10?HAD。
【技術特征摘要】
1.一種大孔吸附樹脂法從蜂王漿中提取10-羥基-2-癸烯酸(IO-HDA)的方法，該方法包括以下工藝步驟 (1)蜂王漿經95%乙醇溶解后，超聲提取； (2)提取液用去離子水稀釋后與大孔吸附樹脂按一定比例混合，150r/min振蕩吸附3h 4h ; (3)吸附后樹脂裝柱；先以20%的乙醇洗脫雜質，然后以75 % 95 %的乙醇洗脫10-HAD ； (4)將收集到的洗脫液蒸發濃縮、冷凍干燥所得白色物質即為10-HAD。2.根據權利要I所述的10-HDA提取工藝，其特征在于...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張其安，楊少波，
申請(專利權)人：山東華康蜂業有限公司，
類型：發明
國別省市：
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