本發(fā)明專利技術確定了1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物具有抑制人體免疫缺陷病毒HIV-1耐藥病毒復制的新作用。1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物在低濃度下能有效抑制HIV-1融合抑制劑及蛋白酶抑制劑所產(chǎn)生的HIV-1耐藥病毒的復制，而對宿主細胞不顯示細胞毒性。因此1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物對治療產(chǎn)生耐藥性的艾滋病患者具有潛在的應用前景。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及新的藥物應用領域。涉及一種抑制Hiv-1耐藥病毒復制的新方法。
技術介紹
目前艾滋病治療主要使用的藥物可分為核苷類逆轉錄酶抑制劑，非核苷類逆轉錄酶抑制劑，蛋白酶抑制劑，融合抑制劑。這些藥物的作用機理分別是作用于HIV-1復制的不同階段，其長期使用可使艾滋病病毒產(chǎn)生耐藥性。例如HIV-1融合抑制劑T20，已有報道體外可誘導T20耐藥變株，突變株對T20敏感性下降5 684倍，臨床也分離到T20耐藥變株，對T20敏感性下降4 422倍。對臨床常用的蛋白酶抑制藥如奈非那韋，沙奎那韋，洛匹那韋等，若長期使用也會產(chǎn)生耐藥性而使藥物的敏感性下降。為了減少耐藥突變所占的比率，使藥物更有效地抑制HIV-1的復制，阻止新突變的產(chǎn)生，按照艾滋病病毒的復制階段，研制新靶點的藥物是克服艾滋病藥物耐藥性的一種方法。Rev蛋白質是HIV-1病毒復制所必需的蛋白質，該蛋白質需要從細胞核輸出到細胞質而發(fā)揮其蛋白質的作用。這一輸出依賴Rev蛋白質的核外輸出信號和受體蛋白質即染色體區(qū)域維持物(CRMl)相結合，因此阻止Rev蛋白質的核外輸出信號和受體蛋白質CRMl相結合是一種新的戰(zhàn)略被用于抑制HIV-1復制。因為抑制Rev蛋白質的功能和目前艾滋病治療使用的藥物的作用機理不同，因此Rev蛋白質的功能抑制劑預期可以有抗HIV-1耐藥病毒感染的新作用。I’-乙酰氧基胡椒酚乙 酸酯被發(fā)現(xiàn)能阻止Rev蛋白質的核外輸出信號和受體蛋白質CRMl相結合而抑制了 HIV-1病毒的復制。因為抑制Rev蛋白質的作用和目前臨床艾滋病治療使用的藥物的作用靶點不同，本專利技術證明了 I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物能有效抑制HIV-1耐藥病毒的復制。
技術實現(xiàn)思路
目前使用的抗艾滋病藥物分為核苷類逆轉錄酶抑制劑，非核苷類逆轉錄酶抑制齊U，蛋白酶抑制劑，融合抑制劑，因為不能徹底根除體內(nèi)的HIV-1病毒，需要長時間服用這些藥物，因此HIV-1病毒易引起高的突變率而對各種艾滋病藥物產(chǎn)生耐藥性。因為I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物抑制HIV-1病毒復制的靶點是抑制HIV-1的Rev蛋白質在病毒復制時應起的作用，和目前艾滋病藥物的靶點不同，因此選用該類化合物對HIV-1耐藥病毒株如HIV-1融合抑制劑及蛋白酶抑制劑的耐藥病毒株進行了抗耐藥病毒活性的篩選實驗。I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物實驗樣品的制備I’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，其立體結構可以是I’S型，即I’(S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，也可以是I’ R型，即I’(R)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，也可以是二者混和物。本實驗所用樣品為I’ (S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯。I’ (S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯實驗樣品的制備，可以從天然植物中提取分離精制而制備，也可以通過化學合成法制備。本實驗所用樣品是從天然植物大高良姜的根莖中提取分離精制而制備。其制備方法為取大高良姜干燥的根莖，切碎，用甲醇提取，合并提取液，減壓濃縮，甲醇提取物通過硅膠層析柱用正己烷與乙酸乙酯混合液作為溶媒進行梯度洗脫分離，收集正己烷與乙酸乙酯混合液(10 I)洗脫物，減壓濃縮。濃縮的洗脫物用制備型碳18反相高效液相色譜柱進一步進行樣品精制，流動相用甲醇水(4 I)。精制所得化合物根據(jù)比旋光度，核磁共振及質譜的分析數(shù)據(jù)確定其化學結構為I’(S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯化合物。測定該化合物的數(shù)據(jù)為[a ]d20-40. 5° (c1. O,乙醇)。1H NMR(⑶Cl3)δ 7. 35 (2H, d, J = 8. 5Hz) ,7. 01 (2H, d, J = 8. 5Hz)，6. 35 (1H, d, J = 6. 4Hz)，5. 96 (1H,ddd, J= 17. 1,11. 0,6. 4Hz)，5· 32 (2H, m)，2· 30 (3H, S)，2· 15 (3Η, S)。MSm/z :235 (M+H)+。從Γ-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯抑制HIV-1的Rev蛋白質的作用機理考慮，在Γ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯的2或/和3位有吸電子基如二氧化氮(NO2)，氰基(CN)，氟(F)，氯(Cl)，溴(Br)等取代，這類I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯衍生化合物可以加強它們和Rev蛋白質的核外輸出信號的受體蛋白質CRMl相結合，更有效地競爭Rev蛋白質的核外輸出信號和受體蛋白質CRMl的結合，從而能加強抑制HIV-1的Rev蛋白質的作用而抑制HIV-1耐藥病毒的復制。本專利技術用化學合成制備的2，3-二氟-Γ-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯進行了抑制HIV-1耐藥病毒復制活性的測定。2，3_ 二氟-1’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯的制備取2，3_ 二氟-4-羥基苯甲醛500mg,加30ml四氫呋喃，在冰浴下向此溶液加入1. OM乙烯鎂溴化物8mL，反應4小時，加氯化氨飽和水溶液中止反應。反應物用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液減壓濃縮，濃縮物用硅膠柱分離，用正己烷與乙酸乙酯混合液作為溶媒進行洗脫，收集正己烷乙酸乙酯(3 I)洗脫物，減壓濃縮。得到的濃縮物經(jīng)干燥后，在冰浴下加20mL吡啶和2mL乙酰氯，室溫下反應5小時，加飽和食鹽水溶液中止反應。用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液減壓濃縮，濃縮物用硅膠柱分離，用正己烷與乙酸乙酯混合液作為溶媒進行洗脫，收集正己烷乙酸乙酯(5 I)洗脫物，減壓濃縮。濃縮物經(jīng)核磁共振及質譜數(shù)據(jù)確定其化學結構為2，3-二氟-1’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯。測定該化合物的數(shù)據(jù)為 NMR(⑶Cl3) δ 7. 10(lH，d，J=8. 5Hz)，6· 96(lH ，d，J = 8. 5Ηζ)，6· 35(lH，d，J = 6. 4Hz)，5· 96 (1Η, ddd, J = 17. 1，11. O,6. 4Ηζ)，5. 29 (2Η, m)，2. 33 (3Η, s)，2. 22 (3Η, s)。MS m/z :271 (Μ+Η)+。Γ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物對抑制HIV-1耐藥病毒復制活性的測定HIV-1耐藥病毒株本專利技術用于實驗的HIV-1耐藥病毒株為融合抑制劑Τ20耐藥株 pNL4_3gp41 (36G)V38A, n42d ;pNL4_3gp41 (36G)V38F, n42S ;pNL4_3gp41(36G)V38A, N42T 及蛋白酶抑制劑耐藥株HIV-1RF/V82F/184V。抑制HIV-1耐藥病毒復制活性的測定藥物對抗HIV-1耐藥性活性的作用，一般可以根據(jù)HIV-1抗原(p24)表達水平，HIV-1誘導合胞體形成，逆轉錄酶活性等指標來評價。本專利技術用HIV-lp24抗原ELISA方法檢測了不同濃度的I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物對Ri蟲合抑制劑 T20 耐藥株 pNL4_3gp41(36G)V38A, N42D ；pNL4_3gp41(36G)v38E, N42s ;pNL4_3gp41(36G)V38AjΜ2τ及蛋白酶抑制劑耐藥株HIV-1RF/V82F/184V在急性感染C8166細胞中復制的抑制作用。為評價I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物抗HIV-1耐藥性活性的細胞毒性作用，本專利技術米用 MTT (3_[4，5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetr本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
1′?乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物用于治療HIV?1耐藥病毒的感染。
【技術特征摘要】
1.1'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酷及其衍生物用于治療HIV-1耐藥病毒的感染。2.根據(jù)權利要求1所述的HIV-1耐藥病毒感染包括任何HIV-1耐藥病毒。3.根據(jù)權利要求1所述的I'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酯其立體結構可以是I'-S型，即 I' -(S)-こ酰氧基胡椒酌 こ酸酯[I' - (S) -Acetoxychavicol acetate]。4.根據(jù)權利要求1所述的I'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酯其立體結構可以是I'-R型，即 I' -(R)-こ酰氧基胡椒酌■こ酸酯[I' - (R) -Acetoxychavicol acetate]。5.根據(jù)權利要求1所述的I'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酯其立體結構可以是I'-RS型。即 I' - (RS)-こ酸氧基胡椒酌 こ酸酯[I' - (...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：葉英，
申請(專利權)人：葉英，
類型：發(fā)明
國別省市：
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