本發明專利技術公開了一種從野生葉點霉菌發酵液中高效提取蒽醌類物質的方法，屬于生物大分子純化技術。首先利用相似相容原理，用正丁醇萃取葉點霉發酵液，進行粗提取。然后檢測特征吸收波長為291nm。粗提液減壓濃縮后，以Sephadex?LH-20為固定相，水為流動相進行柱層析分離，得到的層析液進一步使用250μm薄層硅膠板進行TLC純化，展開劑為苯、乙酸乙酯、醋酸的混合液，混合比例為苯：乙酸乙酯：醋酸為75∶24∶1(V/V/V)。方法包括紫外-可見光分光光度計檢測技術、層析分離純化技術。優點是原料成本低，可用于高效提取功能因子蒽醌類物質，操作簡便、提取效率高。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬生物
，是生物技術在大分子分離純化方面的探索性應用研究。
技術介紹
蒽醌類物質主要以兩種形式存在，一是游離型蒽醌衍生物，多數為羥基蒽醌衍生物，二是游離型蒽醌衍生物與葡萄糖結合而成的苷類，可在酸性條件下加熱水解，生成游離型蒽醌衍生物與葡萄糖。在蒽醌類物質中，具有生物活性的是帶有羥基的蒽醌衍生物，如大黃、虎杖中的主要成分為大黃素、大黃酚和大黃酸，茜草中的主要成分為茜草素，番瀉葉的主要成分為番瀉苷。此類蒽醌物質廣泛存在天然藥材中，并且具有重要的功效。有研究表明，羥基蒽醌類物質具有抗氧化、抗菌和抗腫瘤的作用，可應用于保健食品中，起到抗疲勞、抗衰老以及強身健體的作用。另外，此類物質在老年癡呆、艾滋病、心腦血管疾病和癌癥的預防和治療方面，也得到了更進一步的研究和廣泛的應用。為尋求適用于工業生產蒽醌類功能因子的方法，有必要從原料上降低成本，簡化操作方法。本實驗利用從自然環境中分離的野生葉點霉菌發酵，并從其發酵液中提取出具有生物活性的蒽醌類物質，作為一種功能因子。由于分離技術和檢測手段的快速發展，在進行純化時，本實驗將分離和檢測兩者結合應用，首先根據相似相容原理，用多種溶劑進行粗提取，同時結合相應的檢測手段，將其中主要組分分離出來，然后定向的將含量較低的組分通過層析等分析方法分離出來，并加以鑒定。
技術實現思路
本專利技術目的是提供一種從野生葉點霉菌發酵液中高效提取蒽醌類物質的快捷方法。該方法簡單，可操作性強，提取效率高，原料成低廉。具體實施例方式實施例I目標組分的粗提取用滅菌后的紗布過濾葉點霉發酵液，除去固體培養基物質，得棕色澄清過濾液。取濾液500mL，加入15%的硫酸溶液(V/V) IOOmL進行酸化，搖勻，靜止30min，得棕色酸化液。利用相似相容原理，以正丁醇為萃取劑萃取酸化液，按照少量多次的原則，分三次進行萃取，正丁醇用量依次為200mL、200mL、100mL，得500mL棕黃色正丁醇萃取液。 2檢測波長的確定設置檢測波長范圍200nm 900nm,利用紫外-可見光分光光度計檢測萃取液的最佳吸收波長。3 濃縮采用旋轉蒸發儀進行減壓濃縮，設置參數壓力為0. 085MPa，轉速為60rpm，溫度為81 °C，濃縮至30mL。取5mL濃縮液加入5mL水稀釋備用。4凝膠分離利用凝膠柱層析分離目標物質，固定相為Sephadex LH-20，流動相為水，柱溫18. 6°C，pH值為8. 2，設置流速為1. OmL/min,檢測波長為291nm,在3. 6min時開始進樣，進樣量為2. OmL稀釋液。5TLC 純化層析后對分離出的組分用250 u m薄層硅膠板純化，展開劑為苯、乙酸乙酯、醋酸的混合液，混合比例為苯乙酸乙酯醋酸為75 24 1(V/V/V)。切下含有目標物質的硅膠，溶于乙酸乙酯，充分攪拌，過濾回收硅膠，調濾液至中性，真空冷凍干燥濾液，即得純品。·權利要求1.本專利技術涉及葉點霉發酵液中蒽醌類物質的提取方法，其特征在于所述方法包括下述步驟a.選用從野生環境下分離的葉點霉菌，在PDA培養基中發酵。b.利用相似相容原理對發酵液進行粗提取，并利用紫外-可見光分光光度計進行吸收波長的檢測。c.利用分子篩原理，進行凝膠柱層析進一步分離。d.對于分子量相近而結構不同的目標物，利用TLC進行進一步的純化。2.根據權利要求1a所述的原料的選擇，其特征在于首先選取了野生葉點霉菌作為實驗原料，該原料容易獲得，培養基簡單，培養條件溫和，成本低，并且是一種新型的提取蒽醌類物質的資源。3.根據權利要求1b所述的特征波長的檢測，其特征在于測得特征吸收波長為291nm。4.根據權利要求1c所述的凝膠層析,其特征在于固定相為SephadexLH-20,流動相為水，柱溫18. 6°C，pH值為8. 2，設置流速為1. OmL/min，檢測波長為291nm，在3. 6min時開始進樣，進樣量為2. OmL稀釋液。5.根據權利要求1d所述的TLC純化部分，其特征在于主要對蒽醌類物質進行了分類提取，區別于史料均是對原料中總蒽醌類物質進行粗提取，本專利技術中的TLC純化可將分子量相似，而結構不同的蒽醌類物質分離開來。采用250 μ m薄層硅膠板純化，展開劑為苯、乙酸乙酯、醋酸的混合液，混合比例為苯乙酸乙酯醋酸為75 24 I (V/V/V) 0全文摘要本專利技術公開了一種從野生葉點霉菌發酵液中高效提取蒽醌類物質的方法，屬于生物大分子純化技術。首先利用相似相容原理，用正丁醇萃取葉點霉發酵液，進行粗提取。然后檢測特征吸收波長為291nm。粗提液減壓濃縮后，以Sephadex LH-20為固定相，水為流動相進行柱層析分離，得到的層析液進一步使用250μm薄層硅膠板進行TLC純化，展開劑為苯、乙酸乙酯、醋酸的混合液，混合比例為苯乙酸乙酯醋酸為75∶24∶1(V/V/V)。方法包括紫外-可見光分光光度計檢測技術、層析分離純化技術。優點是原料成本低，可用于高效提取功能因子蒽醌類物質，操作簡便、提取效率高。文檔編號C12R1/645GK102994581SQ20121054918公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月6日 優先權日2012年12月6日專利技術者潘風光, 王楠, 任林柱, 宮新統 申請人:吉林大學本文檔來自技高網...
【技術保護點】
本專利技術涉及葉點霉發酵液中蒽醌類物質的提取方法，其特征在于所述方法包括下述步驟：a.選用從野生環境下分離的葉點霉菌，在PDA培養基中發酵。b.利用相似相容原理對發酵液進行粗提取，并利用紫外?可見光分光光度計進行吸收波長的檢測。c.利用分子篩原理，進行凝膠柱層析進一步分離。d.對于分子量相近而結構不同的目標物，利用TLC進行進一步的純化。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：潘風光，王楠，任林柱，宮新統，
申請(專利權)人：吉林大學，
類型：發明
國別省市：
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