本發明專利技術公開了一種用于降解臍橙囊衣微生物的培養基及酶制劑的制備方法。其中，該制備方法包括：采用保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO:M?2012160的黑曲霉C-2（Aspergillus?sp.C-2）作為發酵菌株，經過液體深層發酵或固態發酵培養制備得到降解臍橙囊衣酶制劑。采用本發明專利技術的技術方案，以臍橙囊衣粉或臍橙皮果渣為碳源的培養基對本發明專利技術中的微生物進行培養制備酶制劑，制得的酶制劑不僅降解臍橙囊衣效果明顯，還利用臍橙果渣發酵產酶，變廢為寶，既提高了臍橙產業的附加值，有保護了環境，具有經濟和社會雙重意義。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物工程
，具體而言，涉及一種。
技術介紹
我國柑橘加工長期沿襲著人工剝皮和酸堿脫囊衣等傳統工藝生產。現有酸堿法脫囊衣的酸堿處理法主要有經典酸堿二步法、改良重酸二步法、磷酸鹽NaOH —步法，以及EDTA或Na2-EDTA (乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二鈉)為助劑的低堿去囊衣法。人工去皮和酸堿脫囊衣工藝存在勞動密集、生產效率低、產品質量不穩定等問題。目前工業化罐頭生產脫囊衣耗水量大，每噸產品耗水量達60 80噸，不僅增加產品成本，而且加劇了飲用水 資源的短缺。同時，因大量使用堿，產生大量的工業堿液廢水，增加了產品的生產成本，也污染環境，影響了產品的安全性，容易遭遇技術壁壘和綠色壁壘，削弱了我國柑橘罐頭工業在國際市場的競爭優勢。同時，在柑橘加工生產中產生了約占柑橘加工量30%左右的皮渣，通常都被丟棄掉，不僅造成資源浪費，也給環境帶來了污染。臍橙加工中脫囊衣工藝是其主要技術難點之一。目前橙汁胞的生產技術主要采用傳統柑橘罐頭酸堿處理的工藝，存在人工剝皮、分瓣，生產效率低；酸堿囊衣用水量大，環境污染嚴重，產品安全性低；由于柑橘皮與臍橙皮結構的差異，導致現有的柑橘酶法去囊衣技術不適合于臍橙橙汁胞的加工。
技術實現思路
本專利技術旨在提供一種，以高效地制備降解臍橙囊衣微生物的酶制劑。根據本專利技術的一個專利技術，提供一種降解臍橙囊衣酶制劑的制備方法。該制備方法包括采用保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC N0:M 2012160的黑曲霉C-2 (Aspergillus sp. C_2)作為發酵菌株，經過液體深層發酵或固態發酵培養制備得到降解臍橙囊衣酶制劑。進一步地，液體深層發酵或固態發酵培養之前進一步包括活化、制備孢子懸浮液、種子培養的步驟。進一步地，活化包括將黑曲霉C-2接種于活化培養基中進行活化，活化培養基的pH值為7. 0 7. 2，活化溫度控制在28°C 30°C，活化時間為I 2天；其中，活化培養基為以臍橙囊衣粉為碳源的固體斜面培養基，包括如下含量的組分(NH4)2SO4 2g/L 2. 5g/UMgSO4 0. 6g/L Ig/L,K2HPO4 lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、臍橙囊衣粉 6g/L IOg/L和瓊脂15g/L 20g/L，并且在121°C溫度下滅菌30min制得活化培養基。進一步地，制備孢子懸浮液的步驟包括采用無菌水洗下黑曲霉C-2的孢子，并稀釋至2 3X IO6個/mL制得孢子懸浮液，并將孢子懸浮液保存在4°C備用。進一步地，種子培養包括將孢子懸浮液接種于種子液體培養基中，控制種子液體培養基的pH值為7. O 7. 2，培養溫度控制在28°C 30°C，200r/m培養12 16h ;或將孢子懸浮液接種于種子固體培養基中，控制種子固體培養基的初始PH值為6. 5，培養溫度控制在28V 30°C，培養48h ;其中，種子液體培養基為以臍橙囊衣粉為碳源的培養基，包括如下含量的組分=(NH4)2SO4 2g/L 2. 5g/L、MgSO4 0. 6g/L lg/L、K2HPO4 lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、臍橙囊衣粉或臍橙皮果渣15g/L 20g/L ;并且在121°C溫度下滅菌30min制得種子液體培養基。進一步地，液體深層發酵培養的步驟包括將經過種子培養的含黑曲霉C-2的種子液體培養基接種于發酵瓶中進行深層發酵培養，發酵培養條件為12h內溫度為30°C，12h 后 28°C ；pH 值為 7. 0 7. 2 ;壓力位 0. 06MPa 0. 08MPa ;攪拌速度 12h 內 180r/m, 12h后200r/m ;通氣量1:1. 0 1. 5 ;發酵時間108 120h,制得酶制劑。進一步地，固態發酵培養的步驟包括經過種子培養的含黑曲霉c-2的種子固體培養基接種入固態發酵培養基中，30°C培養108h，得到黑曲霉C-2固態發酵曲，固態發酵曲通過低溫干燥及粉碎后制得酶制劑，或通過0. 5mol/L pH=6. 5磷酸緩沖液中浸提獲得酶制劑；其中，固態發酵培養基通過以下方法制備將麥麩95重量份、臍橙果渣或臍橙果皮粉180重量份、硫酸銨2重量份、硫酸鎂0. 5重量份、磷酸氫二鉀I重量份加入水拌勻并調節水分濕度為60%，得固態發酵培養基。進一步地，包括將酶制劑經過超濾、濃縮制得濃縮酶制劑，或將酶制劑制備成粉劑或顆粒劑。根據本專利技術的另一個方面，提供一種用于降解臍橙囊衣微生物的培養基，培養基為以臍橙囊衣粉或臍橙皮果渣為碳源。進一步地，包括如下含量的組分(NH4)2SO42g/L 2. 5g/L、MgSO4 0. 6g/L Ig/L^K2HPO4lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、臍橙囊衣粉 6g/L 10g/L 和瓊脂 15g/L 20g/L，并且在121°C溫度下滅菌30min制得培養基。進一步地，包括如下含量的組分(NH4)2SO42g/L 2. 5g/L、MgSO4 0. 6g/L Ig/ L、K2HPO4lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、臍橙囊衣粉或臍橙皮果渣15g/L 20g/L ;并且在121°C溫度下滅菌30min制得培養基。采用本專利技術的技術方案，以臍橙囊衣粉或臍橙皮果渣為碳源的培養基對本專利技術中的微生物(保藏號為CCTCCN0:M 2012160，保藏日為2012年5月7日)進行培養制備酶制劑，制得的酶制劑不僅降解臍橙囊衣效果明顯，還利用臍橙果渣發酵產酶，變廢為寶，既提高了臍橙產業的附加值，有保護了環境，具有經濟和社會雙重意義。具體實施例方式需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相互組合。下面將結合實施例來詳細說明本專利技術。根據本專利技術一種典型的實施方式，提供一種降解臍橙囊衣微生物。該微生物的保藏名稱為黑曲霉C-2(Aspergillus sp. C-2)，保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC N0:M 2012160，保藏日為2012年5月7日。本專利技術的降解臍橙囊衣微生物是通過以下步驟篩選獲得的從腐爛臍橙表面、土壤等樣品中篩選目標菌株，然后經過紫外誘變后，通過反復的篩選獲得對臍橙囊衣具有高效降解作用的菌株。本專利技術的準用菌株經鑒定為黑曲霉C-2 (Aspergillus sp.C-2)，其主要生物學特征為在固體培養基上，培養3d 5d，菌落蔓延迅速，初為白色，后變成褐色直至黑色厚絨狀，背面無色或中央略帶黃褐色。分生孢子頭褐黑色放射狀，分生孢子梗長短不一。頂囊球形，雙層小梗。分生孢子褐色球形。頂部形成球形頂囊，其上全面覆蓋一層梗基和一層小梗，小梗上長有成串褐黑色的球狀，直徑2. 5 4. O Pm。分生孢子頭球狀，直徑700 800 ym，褐黑色。分生孢子頭褐黑色放射狀，分生孢子梗長短不一。分生孢子梗自基質中伸出長約I 3mm,壁厚而光滑。根據本專利技術一種典型的實施方式，提供一種降解臍橙囊衣酶制劑。該酶制劑采用上述降解臍橙囊衣微生物制得。由于該降解臍橙囊衣酶制劑不涉及酸堿的大量使用，通過生物酶解作用進行臍橙囊衣的脫除，因此可大大提升生產效率、減少臍橙果破碎率、使產品質量穩定，并且能夠降低生產成本，無殘留、綠色環本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種降解臍橙囊衣酶制劑的制備方法，其特征在于，采用保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO:M?2012160的黑曲霉C?2作為發酵菌株，經過液體深層發酵或固態發酵培養制備得到所述降解臍橙囊衣酶制劑。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙良忠，尹樂斌，李文，伍桃英，肖凱，郭育齊，周小虎，蔣瓊華，周曉潔，
申請(專利權)人：湖南李文食品有限公司，
類型：發明
國別省市：
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