一種硫酸軟骨素提取方法技術

本發明專利技術一種硫酸軟骨素的提取方法，該方法采用超聲波作為輔助由預處理、滅活、水解、抽濾、離心、干燥粉碎六步驟組成。該方法工藝簡單、無污染，所得的硫酸軟骨素質量高，純度達到了87.96%，是生物醫藥領域一重大進步。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物制藥領域，具體涉及。
技術介紹
硫酸軟骨素(chondroitin sulfate, CS)又名牛磺軟骨素、康得寧,廣泛存在于人和一些動物如豬、牛、羊、魚等的軟骨組織中。CS在臨床上主要用于治療神經痛、關節炎、耳鳴以及促進潰瘍愈合和防治高血脂等，動物口服后未發現臨床毒性癥狀。除此之外，CS也廣泛應用于食品、化妝品行業。多年來，硫酸軟骨素一直是醫藥類的小品種，產銷量小。近年來，硫酸軟骨素作為一種新型藥用活性成分，在醫藥制劑、醫學材料、日化產品、化妝品、生發劑、保健品等領域應用廣泛，越來越受到人們的重視，市場需求趨旺。我國生產和出口量逐年大幅度增長，現已成為生化藥物的第三出口，發展前景看好。 目前，硫酸軟骨素普遍提取的方法主要有鹽解、堿解、酶解法以及堿-酶法，其分離純化的方法有乙醇沉淀法、離子交換色譜法、季銨鹽配合法、吸附法和纖維素分離法等。但是上述方法在現有生產工藝中普遍存在一個問題生產工藝繁瑣不易操作、堿酸乙醇使用量大、硫酸軟骨素品質不高、生產成本高昂，生產周期較長，產率低并且污染嚴重，不適合企業規模化生產需求。CN101250237B提供了一種硫酸軟骨素無溶劑提取方法，該方法通過無溶劑化學反應，彌補了一般有機化學反應產生雜質的不足，但是其要利用球磨機中研磨體所產生的高強度機械力作用來達到使硫酸軟骨素組織中硫酸軟骨素連接在核心蛋白上糖肽鍵發生鍛煉，該方法對設備和技術的要求高，操作難度大，不利于企業規模化生產。CN102093490A提供了一種高純度硫酸軟骨素的制備方法，該方法在傳統工藝的基礎上通過使用陽離子交換方法，在一定程度上提高了硫酸軟骨素的收率和純度，但是該方法工藝繁瑣，易不能逃脫傳統工藝的局限。實踐中，由于制備硫酸軟骨素的原料軟骨原料表面附著許多脂肪和肌肉組織，這些組織往往成為了硫酸軟骨素提取的主要雜質，又加上硫酸軟骨素本身比較粘稠，這就使得硫酸軟骨素的提取過濾非常困難，這也就直接導致規模化生產硫酸軟骨素過濾效率低，生產周期長。本專利技術人經多方研究，通過超聲波輔助，探索得出一種由超聲波輔助提取的堿-雙酶法提取硫酸軟骨素。
技術實現思路
本專利技術提供，以期在縮短硫酸軟骨素生產周期，降低硫酸軟骨素提取的污染情況的同時提高產品的質量，使得硫酸軟骨素的生產適合現代企業的規模化生產，為企業和社會創造更大的經濟效益。為實現上述專利技術目的，本專利技術一種硫酸軟骨素的提取方法，其具體實施的技術方案為本專利技術所述，其特征在于該方法由預處理、滅活、水解、抽濾、離心、干燥粉碎六步驟組成。本專利技術所述一種硫酸軟骨素的提取方法，其特征在于該方法實施的具體步驟為(I)預處理將牛喉管置于沸水中煮8 IOmin后撈出，去除表面的油脂等殘留物自然風干后粉碎。(2)滅活將預處理的軟骨浸于NaOH溶液中，置于超聲波隔音箱中，在功率為491W條件下超聲處理13(Tl40min，然后用HCl調節pH值至6. 8，添加一定量木瓜蛋白酶，恒溫水浴lh，升溫到90°C保溫15 20min滅酶。(3)水解調最適pH值，按一定量料液比加入胃蛋白酶，一定溫度條件下水解一定時間，升溫至90°C滅酶15 20min。 (4)抽濾按濾液體積的1%加入活性炭，按原料干質量的10%加入高嶺土，90°C吸附攪拌30min，快速冷卻后抽濾，將清液pH值調節至6. 8 7. 2，加入NaCl，然后緩慢加入無水乙醇，使體積分數達到70%。(5)離心靜置過夜收集沉淀，離心15 20min，用乙醇洗滌I 2次， (6)干燥粉碎抽濾，置于恒溫干燥箱中干燥，粉碎即得產品。本專利技術所述的一種硫酸軟骨素制備方法，其特征在于該方法pH為5. 4 8、酶解溫度30 50°C、酶解時間90 120min。本專利技術所述的一種硫酸軟骨素制備方法，其特征在于該方法步驟(2)浸泡軟骨的溶液為5%的NaOH溶液，滅酶時間為20min。本專利技術所述一種硫酸軟骨素的提取方法，其特征在于該方法步驟(3)胃蛋白酶添加量I 2:1000，滅酶時間為15min。本專利技術所述一種硫酸軟骨素的提取方法，其特征在于該方法步驟(4) NaCl的添加量為濾液體積3%。本專利技術所述一種硫酸軟骨素的提取方法，其特征在于該方法步驟(5)離心速度為6000r/min,離心時間為 15min。本專利技術所述一種硫酸軟骨素的提取方法，其特征在于該方法步驟(6)干燥的溫度為 60。。。本專利技術具有以下優點1.本方法提取的硫酸軟骨素純度高、質量好。2.本方法工藝簡單，容易操作，適合企業規模化生產。具體實施例方式下面的實施可更詳細地說明本專利技術，但不以任何形式限制本專利技術。將牛喉管置于沸水中煮8 IOmin后撈出，去除表面的油脂等殘留物自然風干后粉碎。將預處理的軟骨浸于5%的NaOH溶液中，置于超聲波隔音箱中，在功率中國肉類食品綜合研究中心加工工藝為491W條件下超聲處理139min，然后用HCl調節pH值至5. 5 7. 5，添加一定量木瓜蛋白酶，45°C恒溫水浴lh，升溫到90°C保溫20min滅酶。調最適PH值，按一定量料液比加入胃蛋白酶，一定溫度條件下水解一定時間，升溫至90°C滅酶15min，按濾液體積的1%加入活性炭，按原料干質量的5 15%加入高嶺土，90°C吸附攪拌30min，快速冷卻后抽濾，將清液pH值調節至6. 8 7. 2，加入濾液體積3%的NaCl，然后緩慢加入無水乙醇，使體積分數達到70%，靜置過夜收集沉淀，6000r/min離心15min，用乙醇洗滌I 2次，抽濾，置于恒溫干燥箱中60°C干燥，粉碎即得產品。紅外光譜法對樣品進行結構鑒定所得產品用紅外光譜對樣品結構驗證，用標準品對照，得附圖說明圖1 : CS標準品紅外光譜圖；圖2提取樣品CS紅外光譜圖。由圖1、2可見，與標準品相比，提取樣品在相應的波段均存在特征吸收峰，在約3400CHT1處有特征吸收峰，說明存在一 OH和一NH伸縮振動，2920CHT1附近存在-CH2伸縮振動。1650CHT1附近存在NH彎曲振動，1560CHT1和HlOcnT1處分別存在一 COO不對陣伸縮振動和一 COO對稱伸縮振動，在約1560CHT1及840 cnT1處有硫酸基特征吸收峰。說明提取的樣品是CS. 產品各項指標檢測 水分測定采用常壓恒溫干燥法；蛋白質含量測定；采用Bradford法；澄清度測定采 用分光光度法測定640nm波長處50g/L溶液的吸光度，pH值測定；將產品配制成50mg/mL溶液，用pH計測定其pH值；CS純度測定；采用氨基己糖測定法。CS純度=氨基己糖含量X 2. 82 CS得率=(產品質量/原料質量)X 100 鑒定且純度達到87. 96%，其他各項指標均符合《中華人民共和國衛生部藥品標準》要求。權利要求1.，其特征在于該方法由預處理、滅活、水解、抽濾、離心、干燥粉碎六步驟組成。2.根據權利要求1所述一種硫酸軟骨素的提取方法，其特征在于該方法實施的具體步驟為 預處理將牛喉管置于沸水中煮8 IOmin后撈出，去除表面的油脂等殘留物自然風干后粉碎； 滅活將預處理的軟骨浸于NaOH溶液中，置于超聲波隔音箱中，在功率為491W條件下超聲處理13(Tl40min，然后用HCl調節pH值至6. 8，添加一定量木瓜蛋白酶，恒溫水浴lh，升溫到90°C保溫本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種硫酸軟骨素提取方法，其特征在于該方法由預處理、滅活、水解、抽濾、離心、干燥粉碎六步驟組成。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：曾培安，郝芳，吳健民，賀蓮，張靜，劉娟，
申請(專利權)人：康普藥業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：