本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種線蟲卵寄生真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑復(fù)配菌劑及其制備方法和應(yīng)用。所述真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑復(fù)配菌劑包括：淡紫擬青霉孢子粉或發(fā)酵液、孢子萌發(fā)促進(jìn)劑。本發(fā)明專利技術(shù)采用正交試驗(yàn)獲得能夠促進(jìn)淡紫擬青霉孢子萌發(fā)的各種營養(yǎng)物質(zhì)的最佳組合，并通過室內(nèi)生測實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其促進(jìn)淡紫擬青霉孢子萌發(fā)及防治根結(jié)線蟲的生防效果。本發(fā)明專利技術(shù)復(fù)配菌劑作用于根結(jié)線蟲5天，對于根結(jié)線蟲卵寄生率就可達(dá)80%以上，根結(jié)線蟲卵孵化率幾乎為零，明顯優(yōu)于對照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明本發(fā)明專利技術(shù)復(fù)配菌劑中所添加的孢子萌發(fā)促進(jìn)劑能夠有效促進(jìn)孢子萌發(fā)從而提高了淡紫擬青霉對根結(jié)線蟲卵的寄生率并縮短了作用時(shí)間，最終顯著提高了對植物根結(jié)線蟲的防治效果。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種生物農(nóng)藥制劑，尤其涉及一種線蟲卵寄生真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑的的生物農(nóng)藥復(fù)配制劑，本專利技術(shù)還涉及該生物農(nóng)藥復(fù)配制劑的制備方法及其在防治根結(jié)線蟲中的應(yīng)用，屬于植物寄生線蟲的生物防治領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
淡紫擬青霉(P.1ilacinus)是一種土壤及多種植物根圍的習(xí)居菌,對南方根結(jié)線蟲的寄生率很高，可達(dá)80%以上。現(xiàn)已認(rèn)為淡紫擬青霉是一 種非常重要的植物寄生線蟲卵寄生真菌，目前已廣泛應(yīng)用于防治根結(jié)線蟲、胞囊線蟲等有害植物寄生線蟲。作為防治植物病原線蟲的重要生防菌之一，淡紫擬青霉孢子快速萌發(fā)可直接影響菌株對寄主的致病力，并且可以大量地減少根結(jié)線蟲卵的孵化。迄今為止，世界上已經(jīng)有了多種以淡紫擬青霉分生孢子為主要有效成分的殺線制齊U，其中包括可濕性粉劑、顆粒劑及其微膠囊菌劑等。雖然淡紫擬青霉對根結(jié)線蟲卵寄生效果很高，實(shí)際應(yīng)用也較多，但是對根結(jié)線蟲卵后期和二齡幼蟲的寄生效果很差，而且研究發(fā)現(xiàn)其代謝產(chǎn)物還有助于根結(jié)線蟲卵的孵化。由于孢子萌發(fā)和菌絲生長均需一定的營養(yǎng)物質(zhì)，而撒施在土壤中的孢子較難迅速從土壤或寄主獲得其萌發(fā)所需的營養(yǎng)，從而有可能增加孢子萌發(fā)和侵入卵所需的時(shí)間，而添加孢子萌發(fā)促進(jìn)劑可起到補(bǔ)充營養(yǎng)的作用，促進(jìn)淡紫擬青霉分生孢子快速侵入根結(jié)線蟲卵，提高殺線效果。因此，篩選能夠促進(jìn)淡紫擬青霉分生孢子萌發(fā)的刺激物(簡稱孢子萌發(fā)促進(jìn)劑)，將其加入到孢子制劑當(dāng)中，以便在淡紫擬青霉分生孢子接觸卵后能夠迅速萌發(fā)和侵入，減少卵的孵化，可增強(qiáng)孢子制劑防治植物根結(jié)線蟲的效果。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)目的之一是提供一種孢子萌發(fā)率高、作用時(shí)間短、卵寄生率高、能夠有效抑制根結(jié)線蟲卵孵化的真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑的復(fù)配制劑；本專利技術(shù)目的之二是提供一種制備所述真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑的復(fù)配制劑的方法;本專利技術(shù)目的之三是提供將所制備的真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑的復(fù)配制劑應(yīng)用于防治植物根結(jié)線蟲；本專利技術(shù)的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種孢子萌發(fā)率高、能夠有效抑制根結(jié)線蟲卵孵化的真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑復(fù)配制劑，包括淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液、孢子萌發(fā)促進(jìn)劑；其中，所述的孢子萌發(fā)促進(jìn)劑選自維生素B1、糖類物質(zhì)、氨基酸大分子或有機(jī)氮源中的一種或一種以上；優(yōu)選的，所述的糖類物質(zhì)是蔗糖、D-山梨醇、麥芽糖或肌醇；所述氨基酸為L-丙氨酸、L-谷氨酸或L-天冬酰胺；所述的大分子有機(jī)氮源為蛋白胨或牛肉膏。本專利技術(shù)通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，維生素能夠顯著地影響淡紫擬青霉孢子萌發(fā)和二級孢子產(chǎn)生，其中，核黃素、抗壞血酸、維生素B6對淡紫擬青霉孢子萌發(fā)有抑制作用，只有維生素BI對淡紫擬青霉孢子萌發(fā)有顯著的促進(jìn)作用，其對孢子萌發(fā)的促進(jìn)效果要優(yōu)于糖類物質(zhì)、氨基酸和大分子有機(jī)氮源，所以在淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液中僅添加維生素BI就能有效的達(dá)到促進(jìn)孢子萌發(fā)的顯著效果。為此，本專利技術(shù)提供了一種抑制根結(jié)線蟲卵孵化的真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑復(fù)配制齊 ，包括淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液和維生素BI ；為了達(dá)到更好的效果，其中，按質(zhì)量百分比計(jì)，各組分的用量優(yōu)選為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 8-99. 95%，維生素BI O. 05-0. 2% ；更優(yōu)選的，各組分的用量為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 9%，維生素BI O. 1%。本專利技術(shù)通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在上述由淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液和維生素BI組成的復(fù)配制劑中加入糖類物質(zhì)能夠更有效的抑制根結(jié)線蟲卵孵化；其中，所加入的糖類物質(zhì)優(yōu)選為蔗糖、D-山梨醇、麥芽糖或肌醇，更優(yōu)選為蔗糖；其中，加入蔗糖后，按質(zhì)量百分比計(jì)，復(fù)配制劑中各組分的用量優(yōu)選為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 6-99. 9%，維生素Β10. 05-0. 2%、蔗糖O. 05-0. 2% ;更優(yōu)選的，各組分的用量為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 75%，維生素BI O. 1%、蔗糖O. 15%。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在上述復(fù)配制劑中加入特定的氨基酸能夠顯著提高制劑的防治根結(jié)線蟲的效果；其中，所加入的氨基酸優(yōu)選為L-丙氨酸、L-谷氨酸或L-天冬酰胺或，更優(yōu)選為L-丙氨酸或L-谷氨酸；其中，在生物農(nóng)藥復(fù)配劑中加入氨基酸后，按質(zhì)量百分比計(jì)，生物農(nóng)藥復(fù)配劑中各組分的用量優(yōu)選為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 4-99. 85%，維生素BI O. 05-0. 2%、蔗糖O. 05-0. 2%、氨基酸O. 05-0. 2% ;更優(yōu)選的，各組分的用量為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 65%，維生素BI O. 1%、蔗糖O. 15%、氨基酸O. 1%。本專利技術(shù)通過更進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在上述生物農(nóng)藥復(fù)配制劑中加入大分子有機(jī)氮源能夠顯著促進(jìn)淡紫擬青霉孢子萌發(fā)，其中，所述的大分子有機(jī)氮源優(yōu)選為蛋白胨或牛肉膏，更優(yōu)選為蛋白胨；在生物農(nóng)藥復(fù)配劑中加入蛋白胨后，按質(zhì)量百分比計(jì)，生物農(nóng)藥復(fù)配劑中各組分的用量優(yōu)選為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 2-99. 8%，維生素BIO. 05-0. 2%、蔗糖O. 05-0. 2%、氨基酸O. 05-0. 2%、蛋白胨O. 05-0. 2% ;更優(yōu)選的，各組分的用量為淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液99. 55%，維生素Β10. 1%、蔗糖O. 15%、氨基酸O. 1%、蛋白胨O. 1%。本專利技術(shù)中所述的淡紫擬青霉孢子粉或孢子發(fā)酵液的濃度可以是任何一種防治根結(jié)線蟲有效量的濃度，例如，淡紫擬青霉孢子粉的活孢子數(shù)可以是IO6個(gè)/g以上，孢子發(fā)酵液的濃度可以是IO6個(gè)/ml以上，優(yōu)選為孢子濃度為5 X IO6個(gè)/ml的孢子發(fā)酵液；淡紫擬青霉孢子粉、孢子或孢子發(fā)酵液可通過各種商業(yè)途徑購買得到，本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員也可按照文獻(xiàn)中所公開的方法制備得到淡紫擬青霉孢子粉、孢子或孢子發(fā)酵液。作為參考，本領(lǐng)域技術(shù)人員可參考下述方法制備得到淡紫擬青霉孢子粉(1)制備淡紫擬青霉液體發(fā)酵液；(2)從淡紫擬青霉液體發(fā)酵液中回收孢子產(chǎn)物；(3)干燥所回收的淡紫擬青霉孢子產(chǎn)物，即得淡紫擬青霉粉。淡紫擬青霉液體發(fā)酵液的制備方法已在各種文獻(xiàn)中公開(例如周靖等.淡紫擬青霉(Paecilomyces Iilacinus)培養(yǎng)條件的優(yōu)化.微生物學(xué)雜志.2007年3月第27卷第2期.45-48 ;毛成利等，淡紫擬青霉的研究開發(fā).化學(xué)工程師.2004年7月.63-64.)，本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員可按照文獻(xiàn)中所公開的各種方法制備得到淡紫擬青霉液體發(fā)酵液；例如，采用三級培養(yǎng)方法，即種子培養(yǎng)、二級液體擴(kuò)大培養(yǎng)和液體發(fā)酵培養(yǎng)，制備得到淡紫擬青霉菌發(fā)酵液；其中，在液體發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，可以采用發(fā)酵罐發(fā)酵或采用搖瓶培養(yǎng)的方式進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。三級培養(yǎng)所用到的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)條件均已在文獻(xiàn)中公開，作為參考，其中，所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分包括碳源和氮源；所述的碳源包括但不限于葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉或玉米粉中的任一種或多種。所述的氮源包括但不限于硝酸鈉、硫酸銨、蛋白胨或黃豆粉中的任一種或多種。淡紫擬青霉在24°C _30°C范圍內(nèi)均能生長產(chǎn)孢，所以在制備淡紫擬青霉液體發(fā)酵液的各個(gè)培養(yǎng)過程中，各培養(yǎng)溫度可以是24°C -30°C。在發(fā)酵培養(yǎng)過程搖床轉(zhuǎn)速可以為80-250r/min,當(dāng)搖床轉(zhuǎn)速為220r/min時(shí)，產(chǎn)孢量會(huì)達(dá)到最高。液體發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為3-9時(shí)均能產(chǎn)孢；當(dāng)初始pH值為5. 0-5. 5時(shí)，淡紫擬青霉的孢本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種線蟲卵寄生真菌和孢子萌發(fā)促進(jìn)劑復(fù)配制劑，其特征在于，包括：淡紫擬青霉(Paecilomyces?lilacinus)孢子粉或孢子發(fā)酵液、孢子萌發(fā)促進(jìn)劑；其中，所述的孢子萌發(fā)促進(jìn)劑選自維生素B1、糖類物質(zhì)、氨基酸大分子或有機(jī)氮源中的一種或一種以上；優(yōu)選的，所述的糖類物質(zhì)是蔗糖、D?山梨醇、麥芽糖或肌醇；所述氨基酸為L?丙氨酸、L?谷氨酸或L?天冬酰胺或；所述的大分子有機(jī)氮源是蛋白胨或牛肉膏。
【技術(shù)特征摘要】
...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王曦茁，汪來發(fā)，郭志斌，馬建偉，樸春根，李永，
申請(專利權(quán))人：中國林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與保護(hù)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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