生物滅蚊劑及其制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種生物滅蚊劑及其制備方法，由滅蚊真菌與滅蚊細(xì)菌復(fù)配制得，以1g濕菌絲的滅蚊真菌計(jì)，配以滅蚊細(xì)菌蘇云金桿菌以色列變種（Bacillusthuringiensisvar.israelensis）的個(gè)數(shù)為1.4×104～1.4×1018或配以滅蚊細(xì)菌球形芽孢桿菌（Bacillussphaericu）的個(gè)數(shù)為2.5×104～2.5×1020。滅蚊真菌為貴陽腐霉（PythiumguiyangenseSu）或卡地腐霉（PythiumcaronlinianumMatthews）。本發(fā)明專利技術(shù)具有既快速滅蚊、又持久制蚊的效果。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及生物
，具體來說涉及一種生物滅蚊劑，同時(shí)還涉及該生物滅蚊劑的制備方法。
技術(shù)介紹
農(nóng)業(yè)害蟲和林業(yè)害蟲每年給人類的農(nóng)業(yè)、林業(yè)生產(chǎn)帶來嚴(yán)重的損失。同時(shí)，蚊蟲不但騷擾人群，而且可以傳播20多種疾病，威脅人類健康。由于化學(xué)農(nóng)藥的專利技術(shù)，人們從蟲口里奪回了糧食，也控制了媒介昆蟲的數(shù)量，減少了蟲媒傳染病的流行。 然而長期大量使用化學(xué)殺蟲劑帶來了嚴(yán)重問題。I)環(huán)境污染，對(duì)人及生物的健康造成危害。農(nóng)藥中的重金屬殘留在土壤中，造成土壤變質(zhì)，農(nóng)業(yè)減產(chǎn)；農(nóng)產(chǎn)品殘毒含量高，出口受阻；2)生態(tài)平衡被破壞化學(xué)農(nóng)藥把害蟲和益蟲全殺死，使自然界控制害蟲的天敵大大減少，害蟲數(shù)量反彈，造成更大的危害；3)害蟲產(chǎn)生抗藥性昆蟲極易產(chǎn)生抵抗農(nóng)藥毒性的能力，使農(nóng)藥施用的劑量越來越大，甚至農(nóng)藥完全失效。而開發(fā)新的化學(xué)殺蟲劑要花大量資金和時(shí)間(據(jù)統(tǒng)計(jì)，約I億美元和10年時(shí)間開發(fā)一種新農(nóng)藥)。生物防治是采用害蟲天敵或可對(duì)害蟲致病的微生物來控制或殺滅害蟲。其所采用的“殺蟲劑”有對(duì)害蟲高度特異性，對(duì)非靶生物無毒無害，不污染環(huán)境，不破壞生態(tài)平衡，不易誘導(dǎo)害蟲的抗藥性的優(yōu)點(diǎn)，所以是很理想的害蟲防治方法。但無論國際國內(nèi)，農(nóng)業(yè)害蟲的生物防治較之醫(yī)學(xué)昆蟲的生物防治要發(fā)達(dá)很多，醫(yī)學(xué)昆蟲的生物防治是薄弱環(huán)節(jié)。到目前為止，用得最廣的生物滅蚊劑為蘇云金桿菌以色列變種(Mcillusthuringiensis var. israelensis,簡稱Bti)。它是胃毒型滅蚊劑。它芽孢囊內(nèi)的伴孢晶體含有毒素蛋白。該伴孢晶體被蚊幼蟲吃進(jìn)消化道即被腸內(nèi)分泌物分解，釋放S-內(nèi)毒素，作用于腸上皮細(xì)胞，使其溶解。腸壁損壞，大量細(xì)菌進(jìn)入血體腔引起敗血癥。蚊蟲在細(xì)菌毒素和敗血癥的作用下很快死亡。Bti的優(yōu)點(diǎn)是滅蚊能力強(qiáng)，滅蚊速度快，但是它在環(huán)境中生存時(shí)間比較短，持效期不長。實(shí)驗(yàn)證明它在陽光照射下滅蚊能力急劇下降。加上自然環(huán)境中水質(zhì)、水溫，以及淤泥吸附等因素的影響，它的持效時(shí)間一般為1-10天，特別是目前市場(chǎng)上比較多用的菌液和可濕性粉劑，持效性比較低。加上懸浮劑后，持效期可延長10多天，只有少數(shù)情況(如加大劑量)下可延長達(dá)I個(gè)多月。另外，由于Bti的殺蚊機(jī)理比較簡單，有可能誘導(dǎo)蚊蟲針對(duì)其毒素產(chǎn)生抗性。另一種滅蚊細(xì)菌球形芽孢桿菌(ifeci77i/5· sphaericu,簡稱Bs),它與Bti—樣，也屬于胃毒類殺蟲劑。Bs是一種普通的革蘭氏陽性菌。其殺蟲毒素是二元毒素蛋白質(zhì)，主要位于芽孢和細(xì)胞壁，有些位于伴孢晶體。菌株產(chǎn)生分子量為51. 4kD和41. 9kD的兩種毒素原蛋白，被蚊蟲吞食后，在蚊幼蟲腸道中活化成毒素，并發(fā)揮作用，使幼蟲死亡。Bs的滅蚊作用較Bti慢，持效期較Bti稍長，但在室外也一般為I個(gè)月左右。Bti和Bs是胃毒型殺蚊齊U，必須被蚊蟲吃進(jìn)去才能把蚊蟲殺死，當(dāng)它們被淤泥掩蓋或包裹則不起作用。貴^\觀霉iPythium guiyangense Su,簡稱Pg)是一種滅蚊真菌。其無性繁殖階段游動(dòng)孢子可以在水中主動(dòng)搜尋蚊幼蟲，在幼蟲體壁囊化，發(fā)出芽管，伸入后者體內(nèi)，生長繁殖，奪取營養(yǎng)，破壞組織，使蚊幼蟲死亡。其菌絲再從蚊尸中伸出體表，釋放游動(dòng)孢子進(jìn)一步感染新的蚊幼蟲，從而在蚊群中造成流行病，產(chǎn)生長期制約蚊蟲種群的效果。同時(shí)，由于Pg的滅蚊機(jī)理復(fù)雜，涉及很多環(huán)節(jié)，蚊蟲不易產(chǎn)生抗藥性。但是，Pg的滅蚊過程比較慢，在剛施用時(shí)殺蚊作用不明顯，因而不易被大家接受，其應(yīng)用由此受限。另一種滅蚊真菌卡地腐霉caronlinianum Matthews)的滅蚊效果與Pg類似。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服上述缺點(diǎn)而提供的一種既快速滅蚊、又持久制蚊的生物滅蚊劑。本專利技術(shù)的另一目的在于提供該生物滅蚊劑的制備方法。·本專利技術(shù)的一種生物滅蚊劑，由滅蚊真菌與滅蚊細(xì)菌復(fù)配制得，以Ig濕菌絲的滅蚊真菌計(jì)，配以滅蚊細(xì)菌蘇云金桿菌以色列變種(Bti)個(gè)數(shù)為I. 4X IO4 I. 4X1018或配以滅蚊細(xì)菌球形芽孢桿菌(Bs)的個(gè)數(shù)為2. 5 X IO4 2. 5 X IO200其中滅蚊真菌為貴陽腐霉(Pg)或卡地腐霉。一種生物滅蚊劑的制備方法，包括以下步驟 (1)采用SFE或KPYG2液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)滅蚊真菌5天，培養(yǎng)溫度25°C± I °C，搖床轉(zhuǎn)速120rpm ;濾出菌絲，無菌水洗滌3次，加水至原體積，粉碎機(jī)高速粉碎10秒，備用； (2)配制I% 3% (W/V)海藻酸鈉溶液； (3)將滅蚊真菌菌絲懸液與海藻酸鈉溶液按1:4比例混合，拌勻； (4)將上述混合液緩慢滴入1% 5%(W/V)氯化鈣溶液，微膠囊顆粒形成，沉淀，O. 5 3小時(shí)后濾出微膠囊，清水沖洗備用； (5)接種滅蚊細(xì)菌于滅蚊細(xì)菌液體培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120rpm，溫度30°C±1°C;48小時(shí)后，離心收集芽孢，用時(shí)稀釋至以下密度I. 4X IO4 I. 4X 1019，得芽孢懸液； (6)按I IOml細(xì)菌芽孢懸液/IOOg微膠囊的比例將芽孢懸液與微膠囊混勻，包裝。一種生物滅蚊劑的制備方法，包括以下步驟 (1)采用SFE或KPYG2液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)滅蚊真菌5天，培養(yǎng)溫度25°C± I °C，搖床轉(zhuǎn)速120rpm ;濾出菌絲，無菌水洗滌3次，加水至原體積，粉碎機(jī)高速粉碎10秒，備用； (2)將準(zhǔn)備好的滅蚊真菌菌液在無菌條件下加入BF培養(yǎng)基，每100克(濕重)培養(yǎng)基加菌液15ml，拌勻，靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C ±1°C ； (3)采用滅蚊細(xì)菌液體培養(yǎng)基，接種滅蚊細(xì)菌，搖床培養(yǎng)48小時(shí)，搖床速度120rmp，培養(yǎng)溫度30°C ±1°C ;將培養(yǎng)好的菌液在無菌條件下加入HF培養(yǎng)基，每100克(濕重)培養(yǎng)基加菌液15ml，拌勻，靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30°C ±1°C ; (4)5天后，將上述培養(yǎng)物按滅蚊真菌培養(yǎng)物滅蚊細(xì)菌培養(yǎng)物=1:3的比例均勻拌在一起，包裝。上述的生物滅蚊劑的制備方法，其中KPYG2培養(yǎng)基的制備方法為將I. 5克蛋白胨、I. 5克酵母粉、3. O克葡萄糖、O. 025克膽固醇、O. 11克無水氯化鈣、I. O克玉米油混合，加水至1000毫升，121°C滅菌30min ； 上述的生物滅蚊劑的制備方法，其中SFE (葵花籽培養(yǎng)基)的制備方法為生葵花籽100克加水1000毫升，粉碎，6層紗布過濾，濾液再加水至2000毫升；分裝冷凍于_20°C。用時(shí)，取出解凍，121°C滅菌30min ； 上述的生物滅蚊劑的制備方法，其中滅蚊細(xì)菌液體培養(yǎng)基為蘇云金桿菌以色列變種液體培養(yǎng)基，其制備方法為將O. 7g酵母膏、O. 2g硫酸鎂(MgSO4 · 7H20)、lg蛋白胨、Ig磷酸氫二鉀、Ig葡萄糖、和O. 2g硫酸銨混合，加蒸餾水至1000ml，pH值為7. 0_7. 2，121°C滅菌30min。(固體培養(yǎng)基加瓊脂I. 5%_2%)； 上述的生物滅蚊劑的制備方法，其中滅蚊細(xì)菌液體培養(yǎng)基為球形芽孢桿菌液體培養(yǎng)基，其制備方法為將3. Og蛋白胨、5. Og牛肉膏、5. Og酵母膏、O. Olg MnCl2. 4H20、O. IgCaCl2. 2Η20、0· 2g MgCl2. 6H20，加蒸餾水至 1000ml, pH 值為 7. 0-7. 2，121°C 滅菌 30min。(固體培養(yǎng)基加瓊脂I.本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種生物滅蚊劑，其特征在于：由滅蚊真菌與滅蚊細(xì)菌復(fù)配制得，以1g濕菌絲的滅蚊真菌計(jì)，配以滅蚊細(xì)菌蘇云金桿菌以色列變種個(gè)數(shù)為1.4×104～1.4×1018或配以滅蚊細(xì)菌球形芽孢桿菌的個(gè)數(shù)為2.5×104～2.5×1020。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種生物滅蚊劑，其特征在于由滅蚊真菌與滅蚊細(xì)菌復(fù)配制得，以Ig濕菌絲的滅蚊真菌計(jì)，配以滅蚊細(xì)菌蘇云金桿菌以色列變種個(gè)數(shù)為I. 4X IO4 I. 4X1018或配以滅蚊細(xì)菌球形芽孢桿菌的個(gè)數(shù)為2. 5 X IO4 2. 5 X IO2002.如權(quán)利要求I所述的生物滅蚊劑，其特征在于滅蚊真菌為貴陽腐霉或卡地腐霉。3.—種生物滅蚊劑的制備方法，包括以下步驟 (1)采用SFE或KPYG2液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)滅蚊真菌5天，培養(yǎng)溫度25°C± I °C，搖床轉(zhuǎn)速120rpm ;濾出菌絲，無菌水洗滌3次，加水至原體積，粉碎機(jī)高速粉碎10秒，備用； (2)配制I% 3% (W/V)海藻酸鈉溶液； (3)將滅蚊真菌菌絲懸液與海藻酸鈉溶液按1:4比例混合，拌勻； (4)將上述混合液緩慢滴入1% 5%(W/V)氯化鈣溶液，微膠囊顆粒形成，沉淀，O. 5 3小時(shí)后濾出微膠囊，清水沖洗備用； (5)接種滅蚊細(xì)菌于滅蚊細(xì)菌液體培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120rpm，溫度30°C±1°C;48小時(shí)后，離心收集芽孢，用時(shí)稀釋至以下密度I. 4X IO4 2. 5X102°，得芽孢懸液； (6)按I IOml細(xì)菌芽孢懸液/IOOg微膠囊的比例將芽孢懸液與微膠囊混勻，包裝。4.一種生物滅蚊劑的制備方法，包括以下步驟 (1)采用SFE或KPYG2液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)滅蚊真菌5天，培養(yǎng)溫度25°C± I °C，搖床轉(zhuǎn)速120rpm ;濾出菌絲，無菌水洗滌3次，加水至原體積，粉碎機(jī)高速粉碎10秒，備用； (2)將準(zhǔn)備好的滅蚊真菌菌液在無菌條件下加入BF培養(yǎng)基，每100克(濕重)培養(yǎng)基加菌液15ml，拌勻，靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C ±1°C ； (3)采用滅蚊細(xì)菌液體培養(yǎng)基，接種滅蚊細(xì)菌，搖床培養(yǎng)48小時(shí)，搖床速度120rmp，培養(yǎng)溫度30°C ±1°C ;將培養(yǎng)好的菌液在無菌條件下加入HF培養(yǎng)基，每100克(濕重)培養(yǎng)基加菌液...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蘇曉慶，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：鄭文定，蘇曉慶，
類型：發(fā)明
國別省市：