牦牛細管凍精制作方法技術

本發明專利技術屬于動物的凍精制作領域，特別是涉及牦牛細管凍精的制作方法。本發明專利技術所要解決的技術問題是提供一種牦牛細管凍精制作方法。該方法包括以下步驟：a、配制稀釋液；b、采精和檢查c、稀釋；d、灌裝；e、冷凍；f、抽檢；g、冷凍貯藏：抽檢合格批次的細管凍精移入液氮中貯藏。在本領域采用本發明專利技術方法制作牦牛細管凍精，在原精液質量滿足要求的情況下，解凍后活率能達0.6以上，用此精液進行人工授精配懷率會更高，可提高所產牦牛質量。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及牦牛的凍精制作方法，特別是涉及牦牛細管凍精的制作方法。
技術介紹
耗牛是生活在我國聞海拔、聞寒牧區的聞原偶蹄目牛科特有物種，耐聞寒、聞海拔缺氧氣候。牦牛的生存能力極強，但生產性能較低，周期長，繁殖技術落后，種公畜利用年限短，加之牦牛性情粗野，活畜引種困難，一直阻礙著牦牛生產的發展。近三十年來人工授精技術已成為家畜繁殖和品種保護的一門先進技術，但是牦牛人工授精技術的關鍵節點之一牦牛精液的冷凍保存至今仍是一個難題。成年牦種公牛的射精量、精液密度、精子活力、耐 凍性都與黃牛、奶牛的有較大區別，難以使用這些牛類的現有方法。如能開發出合適高效的細管凍精制作方法，將會極大地促進牦牛產業的發展。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種。本專利技術解決上述技術問題的技術方案為提供一種。該方法包括以下步驟a、配制稀釋液；b、采精和檢查采取種公牛的精液，并對精液進行常規檢查，合格者用于制作細管凍精；C、稀釋在25 30°C條件下，在待冷凍的精液中加入稀釋液并攪拌；d、灌裝灌裝進凍精細管后，放到冷凍架上，控制溫度在O 5°C，持續I 2小時進行平衡；e、冷凍的細管凍精先使冷凍柜啟動后至4°C，停留5分鐘；待溫度恒定在4°C后將凍精細管移入冷凍箱；從41降至-10°C后停留時間為5分鐘，此為精液移入冷凍箱后的過渡平衡期；然后冷凍箱從-10 °C至-100°C后設定冷凍時間為40分鐘；從-100°C至-140°C后設定冷凍時間為20分鐘；細管結束冷凍進入液氮中保存備用，其液氮中的溫度在_140°C至-193。。；f、鏡檢冷凍結束后，抽檢精液活率，解凍抽檢活率達到O. 6以上移入液氮貯藏罐中冷凍貯藏備用。其中，上述方法中的，其特征在于所述步驟C的稀釋方法為，鏡檢合格的原精，在25-30°C條件按照1:1的比例加入25-30°C的A液進行稀釋，稀釋液沿盛原精容器壁緩慢加入，輕輕攪拌；檢測精液濃度，再按每細管中的目標精子數和吸管容積，計算出需添加的B液量，并加入盛原精容器，稀釋好后用于后繼的灌裝細管步驟；所述稀釋液A液的配方為每IOOmL蒸餾水+2. 97g檸檬酸鈉，然后再每100毫升中加入IOmL卵黃得稀釋液A液；所述稀釋液B液的配方為每41. 75mL A液+7mL甘油+2. 5g果糖。其中，上述方法中所述稀釋液中加入青毒素至1000單位/毫升，加入鏈毒素至1000微克/暈升。其中，上述方法步驟b要求采集的精液直觀檢測合格無異狀，在35_38°C條件下鏡檢精子活力達O. 7以上者，以及每毫升精液精子數達8億以上者和畸形率為15%以下才可用于后繼步驟。其中，上述方法步驟C的稀釋步驟一般要求按每細管容納2000萬個左右的精子數的要求進行稀釋。檢測精子濃度一般常用分光光度法。本專利技術的有益效果是在本領域采用本專利技術制作出來的牦牛細管凍精，在原精液質量滿足要求的情況下，解凍后活率能達O. 6以上，遠好于顆粒凍精等方法，好于現有的其他技術。用此精液進行人工授精配懷率高，能有效提高牦牛質量，克服活畜引種在生態方面的不適應和飼養管理方面的困難，也為本領域提供了一種新的選擇，這對牦牛的資源利用來說具有尤其重要的意義。具體實施例方式以下通過具體實施方式的描述對本專利技術進行詳細的說明。結合上面的檢測方法，本專利技術方法包括以下步驟a、配制稀釋液。b、采精和檢查按常規方法采取種公牛的精液，并對精液進行常規檢查，要求直觀檢查無異狀，在35-38°C條件下鏡檢精子活力達O. 7以上者，以及每毫升精液精子數達8億以上者和畸形率為15%以下者方可用于制作細管凍精。C、稀釋在25 30°C條件下，在待冷凍的精液中加入稀釋液并攪拌。d、灌裝灌裝進凍精細管后，即放到冷凍架上，控制溫度在O 5°C，持續I 2小時進行平衡。(平衡溫度優選4°C)e、冷凍先使冷凍柜啟動后至4°C，停留5分鐘；待溫度恒定在4°C后將細管精液移入冷凍箱；從41降至-10°C后停留時間為5分鐘，此為精液移入冷凍箱后的過渡平衡期；然后冷凍箱從-10°C至-100°C后設定冷凍時間為40分鐘；-100°C至-140°C后設定冷凍時間為20分鐘；細管結束冷凍進入液氮中保存備用，其液氮中的溫度在_140°C至-193°C。f、鏡檢冷凍結束后，抽檢精液活率，解凍抽檢活率達到O. 6以上合格，才能移入液氮貯藏罐中冷凍貯藏備用。g、冷凍貯藏合格細管凍精移入液氮中貯藏。其中，上述方法中的，其特征在于所述步驟C的稀釋方法為，鏡檢合格的原精，在25-30°C條件按照1:1的比例加入25-30°C的A液進行稀釋，稀釋液沿盛原精容器壁緩慢加入，輕輕攪拌；用分光光度法檢測精液濃度，再按每細管中的目標精子數和吸管容積，計算出需添加的B液量，并加入盛原精容器，稀釋好后用于后繼的灌裝細管步驟；所述稀釋液A液的配方為每IOOmL蒸餾水+2. 97g檸檬酸鈉制成解凍液，然后每100毫升+IOmL卵黃得稀釋液A液；所述稀釋液B液的配方為每41. 75mL A液+7mL甘油+2. 5g果糖。其中，上述方法中所述稀釋液中加入青毒素至1000單位/毫升，加入鏈毒素至1000微克/暈升。其中，上述方法步驟C的稀釋步驟一般要求按每細管容納2000萬個左右的精子數的要求進行稀釋。在進行本專利技術的細管凍精方法之前，需要獲取適用的牦牛精液。一般的要求是選取健壯適齡公牦牛，使用常規方法取精。獲取的精液一般要求，直觀檢查無異狀，在35-38°C條件下鏡檢精子活力達O. 7以上者，以及每毫升精液精子數達8億以上者和畸形率為15%以下者作為合格精液，用于制作細管凍精。精子數過少或畸形率過高會影響受胎率。牦牛精液的獲取和檢測一般會涉及如下操作采精制凍用種公牛要求特級或一級以上種公牛，按常規方法采集種公牛精液。對 精液進行常規檢查有如下方法可以選用(一 ) 一般直觀檢查1、色澤正常的精液為乳白色或略帶黃色，凡是淡黃色、褐色或黃綠色均不能使用。2、氣味正常的精液無味或略呈牦牛精液固有的青草腥味。3、鏡下狀態良好的精液用肉眼觀察時，可看到精液有“云霧”或“旋風”式的活動狀態。(二)精子活力測定1、測定精子活力取滴精液于載坡片上，加上蓋坡片，置于顯微鏡下檢查精子運動狀況(在37-38°C )，并估計前進運動的精子占整個視野內精子的百分數。如全部精子呈直線運動為1. O級，如其中90%的精子呈直線運動，則評為O. 9級，以下依此類推。如牦牛精子密度較大，可稀釋后評定。2、精子活率計算計算非前進運動的精子數將蓋玻片推蓋在計數板上，使其互相粘連呈密合狀態，先用低倍鏡找到計算室(方格)，用紅血球稀釋管收取公牛精液到刻度O. 5處，擦去管端附著的精液，而后吸至膨大部，吸入O. 9% Nacl溶液到刻度101處(即將原精液稀釋成200倍)，以拇指和中指緊按兩端，充分擺動混勻。棄掉稀釋管內最初兩滴，然后將管中已稀釋妥的精液滴一滴，至蓋玻與計算板之間的空隙邊緣，使液體彌散至計算室中，放大200-400倍進行觀察，計算一定方格內死亡、顫動、圓圈運動的精子數，即非前進運動的精子數。計算精子總數將上述精子非前進運動精子數后，再加熱(放于恒溫干燥箱內100°C，2分鐘)使精子全部死亡，計算精子總數。精子活率=(總精子數-非前進運動精子數)/總精子數(三)精子密度檢查(I本文檔來自技高網...

【技術保護點】
牦牛細管凍精制作方法，其特征在于：其制作步驟包括：a、配制稀釋液；b、采精和檢查：采取種公牛的精液，并對精液進行常規檢查，合格者用于制作細管凍精；c、稀釋：在25～30℃條件下，在待冷凍的精液中加入稀釋液并攪拌；d、灌裝：將精液灌裝進凍精細管后，放到冷凍架上，控制溫度在0～5℃，持續1～2小時進行平衡；e、冷凍的細管凍精：先使冷凍柜啟動后至4℃，停留5分鐘；待溫度恒定在4℃后將凍精細管移入冷凍箱；從4℃降至?10℃后停留時間為5分鐘，此為精液移入冷凍箱后的過渡平衡期；然后冷凍箱從?10℃至?100℃后設定冷凍時間為40分鐘；從?100℃至?140℃后設定冷凍時間為20分鐘；細管結束冷凍進入液氮中保存備用，其液氮中的溫度在?140℃至?193℃；f、鏡檢：冷凍結束后，抽檢精液活率，解凍抽檢活率達到0.6以上移入液氮貯藏罐中冷凍貯藏備用。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張洪波，毛進彬，張永成，馬樹榮，阿龍呷，劉成烈，孫文平，王鵬，代舜堯，方世界，楊鵬波，邵發亮，
申請(專利權)人：甘孜藏族自治州畜牧站，
類型：發明
國別省市：