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    一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝制造技術(shù)

    技術(shù)編號(hào):8449251 閱讀:275 留言:0更新日期:2013-03-21 03:38
    本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝,依次包括以下步驟:1)制備斜面菌種;2)制備搖瓶種子;3)將搖瓶種子接入裝有種子培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中,在26℃下培養(yǎng)24h,制備成一級(jí)種子;4)發(fā)酵,將一級(jí)種子按體積比1%的接種量接種于裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵,其培養(yǎng)基葡萄糖的濃度為90g/L,發(fā)酵24h之后,向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加160g/L的葡萄糖,同時(shí)向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加一定的氮源,維持碳氮平衡,發(fā)酵期間使用無(wú)菌空氣保持發(fā)酵罐通風(fēng),自發(fā)酵開(kāi)始60小時(shí)后培養(yǎng)成熟。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)的發(fā)酵產(chǎn)酸由分批發(fā)酵的33.5g/L提高到50.1g/L,提高了49.5%,縮短了發(fā)酵周期,提高了原料利用率。

    【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

    本專(zhuān)利技術(shù)涉及一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝
    技術(shù)介紹
    L-色氨酸是人體和動(dòng)物生命活動(dòng)中八種必需的氨基酸之一,對(duì)人和動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、新陳代謝起著重要的作用,被稱(chēng)為第二必需氨基酸,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和飼料等方面。在生物體內(nèi),L-色氨酸是合成5-羥基色胺、吲哚乙酸、煙酸、色素、生物堿和輔酶等激素和生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。而這些激素和生理活性物質(zhì)參與生物體特定生命活動(dòng),例如,吲哚乙酸是一種植物生長(zhǎng)激素,5-羥基色胺是脊椎動(dòng)物的一種神經(jīng)遞質(zhì),它在神經(jīng)系統(tǒng)中的含量與神經(jīng)的興奮和抑制狀態(tài)有密切關(guān)系,同時(shí)它也是一種血管收縮素。在醫(yī)學(xué)上,色 氨酸廣泛用于氨基酸大輸液和復(fù)合氨基酸制劑,用來(lái)消除精神緊張、改善睡眠效果、預(yù)防和治療糙皮病等。此外,由于色氨酸是一些植物蛋白中較為缺乏的氨基酸,可用來(lái)強(qiáng)化食品和作為飼料添加劑,對(duì)提高植物蛋白質(zhì)的利用率具有重要的作用,是繼蛋氨酸和賴(lài)氨酸之后的第三大飼用氨基酸。而且,L-色氨酸還有防霉、消毒以及阻止氧化的作用,可以作為魚(yú)類(lèi)保鮮劑。目前,微生物法生產(chǎn)L-色氨酸占主導(dǎo)地位,有直接發(fā)酵法、微生物轉(zhuǎn)化法和酶法。近年來(lái),還出現(xiàn)了將直接發(fā)酵法與化學(xué)合成法相結(jié)合、直接發(fā)酵法與轉(zhuǎn)化法相結(jié)合生產(chǎn)L-色氨酸的方法。其中酶促轉(zhuǎn)化法具有終產(chǎn)物積累量高、反應(yīng)周期短、分離提純?nèi)菀椎葍?yōu)點(diǎn)。但是,酶促反應(yīng)法也存在著底物價(jià)格高,產(chǎn)酸轉(zhuǎn)化率低等問(wèn)題。因此,微生物發(fā)酵法是目前工業(yè)化生產(chǎn)L-色氨酸的主要方法。發(fā)酵法生產(chǎn)色氨酸的方法研究的比較早,該法是以葡萄糖、甘蔗糖蜜等廉價(jià)原料為碳源,利用優(yōu)良的色氨酸生產(chǎn)菌種,在合適的發(fā)酵條件下,直接發(fā)酵生產(chǎn)色氨酸。但是,公知的發(fā)酵法工藝落后,發(fā)酵周期長(zhǎng),原料利用率低。
    技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
    本專(zhuān)利技術(shù)的目的是要提供一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝。為了達(dá)到上述目的,本專(zhuān)利技術(shù)的技術(shù)方案是一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝,依次包括以下步驟 1)制備斜面菌種,將菌種接入斜面培養(yǎng)基,在30°C下培養(yǎng)72h,制得斜面菌種; 2)制備搖瓶種子,將斜面菌種接入藥瓶活化培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面活化,于30°C培養(yǎng)24h,制備成搖瓶種子; 3)將搖瓶種子接入裝有種子培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中,在26°C下培養(yǎng)24h,制備成一級(jí)種子; 4)發(fā)酵,將一級(jí)種子按體積比1%的接種量接種于裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵,其培養(yǎng)基葡萄糖的濃度為90g/L,發(fā)酵24h之后,向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加160g/L的葡萄糖,同時(shí)向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加一定的氮源,維持碳氮平衡,發(fā)酵期間使用無(wú)菌空氣保持發(fā)酵罐通風(fēng),自發(fā)酵開(kāi)始60小時(shí)后培養(yǎng)成熟。進(jìn)一步,所述步驟I)的斜面培養(yǎng)基組成為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、NaCl 2. 5g、瓊脂條20g,該培養(yǎng)基的pH為7. 2。進(jìn)一步,所述步驟2)的種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖lg、蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、NaCl 2. 5g、瓊脂條20g,該培養(yǎng)基的pH為7. 2。進(jìn)一步,所述步驟3)的種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖5g,蛋白胨10g,牛肉膏10g,酵母膏5g,NaCl 2. 5g,該培養(yǎng)基的pH為7. 2。進(jìn)一步,所述步驟5)發(fā)酵的第12h和24h各補(bǔ)加一次的L-苯丙氨酸、L-酪氨酸使得發(fā)酵液中兩者濃度為50mg/L。 進(jìn)一步,所述步驟5)發(fā)酵過(guò)程中用氫氧化鈉或氨水控制pH為7. 2。本專(zhuān)利技術(shù)提供的方法發(fā)酵產(chǎn)酸由分批發(fā)酵的33. 5g/L提高到50. lg/L,提高了49. 5%,并且縮短了發(fā)酵周期,提高了原料利用率。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝,依次包括以下步驟 1)制備斜面菌種,將菌種接入斜面培養(yǎng)基,在30°C下培養(yǎng)72h,制得斜面菌種; 2)制備搖瓶種子,將斜面菌種接入藥瓶活化培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面活化,于30°C培養(yǎng)24h,制備成搖瓶種子; 3)將搖瓶種子接入裝有種子培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中,在26°C下培養(yǎng)24h,制備成一級(jí)種子; 4)發(fā)酵,將一級(jí)種子按體積比1%的接種量接種于裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵,其培養(yǎng)基葡萄糖的濃度為90g/L,發(fā)酵24h之后,向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加160g/L的葡萄糖,同時(shí)向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加一定的氮源,維持碳氮平衡,發(fā)酵期間使用無(wú)菌空氣保持發(fā)酵罐通風(fēng),自發(fā)酵開(kāi)始60小時(shí)后培養(yǎng)成熟。所述步驟I)的斜面培養(yǎng)基組成為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、NaCl 2. 5g、瓊脂條20g,該培養(yǎng)基的pH為7.2 ;所述步驟2)的種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖lg、蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、NaCl 2. 5g、瓊脂條20g,該培養(yǎng)基的pH為7. 2 ;所述步驟3)的種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖5g,蛋白胨10g,牛肉膏10g,酵母膏5g,NaCl 2. 5g,該培養(yǎng)基的PH為7. 2 ;所述步驟5)發(fā)酵的第12h和24h各補(bǔ)加一次的L-苯丙氨酸、L-酪氨酸使得發(fā)酵液中兩者濃度為50mg/L ;所述步驟5)發(fā)酵過(guò)程中用氫氧化鈉或氨水控制pH為7. 2。本專(zhuān)利技術(shù)對(duì)L-色氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵工藝中不同初糖濃度、不同補(bǔ)料方式、碳氮源比例、不同pH值調(diào)節(jié)方式、添加L-苯丙氨酸、L-酪氨酸對(duì)發(fā)酵的影響進(jìn)行了系統(tǒng)研究,優(yōu)化了工藝。發(fā)酵產(chǎn)酸由分批發(fā)酵的33. 5g/L提高到50. lg/L,提高了 49. 5%,縮短了發(fā)酵周期,提高了原料利用率。凡在不脫離本專(zhuān)利技術(shù)核心的情況下做出的簡(jiǎn)單的變形或修改均落入本專(zhuān)利技術(shù)的保護(hù)范圍。本文檔來(lái)自技高網(wǎng)
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    【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
    一種L?色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝,其特征在于,該方法依次包括以下步驟:1)制備斜面菌種,將L?色氨酸菌種接入斜面培養(yǎng)基,在30℃下培養(yǎng)72h,制得斜面菌種;2)制備搖瓶種子,將斜面菌種接入藥瓶活化培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面活化,于30℃培養(yǎng)24h,制備成搖瓶種子;3)將搖瓶種子接入裝有種子培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中,在26℃下培養(yǎng)24h,制備成一級(jí)種子;4)發(fā)酵,將一級(jí)種子按體積比1%的接種量接種于裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵,其培養(yǎng)基葡萄糖的濃度為90g/L,發(fā)酵24h之后,向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加160g/L的葡萄糖,同時(shí)向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加一定的氮源,維持碳氮平衡,發(fā)酵期間使用無(wú)菌空氣保持發(fā)酵罐通風(fēng),自發(fā)酵開(kāi)始60小時(shí)后培養(yǎng)成熟。

    【技術(shù)特征摘要】
    1.一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝,其特征在于,該方法依次包括以下步驟 1)制備斜面菌種,將L-色氨酸菌種接入斜面培養(yǎng)基,在30°C下培養(yǎng)72h,制得斜面菌 種; 2)制備搖瓶種子,將斜面菌種接入藥瓶活化培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面活化,于30°C培養(yǎng)24h,制備成搖瓶種子; 3)將搖瓶種子接入裝有種子培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中,在26°C下培養(yǎng)24h,制備成一級(jí)種子; 4)發(fā)酵,將一級(jí)種子按體積比1%的接種量接種于裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵,其培養(yǎng)基葡萄糖的濃度為90g/L,發(fā)酵24h之后,向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加160g/L的葡萄糖,同時(shí)向發(fā)酵培養(yǎng)基中流加一定的氮源,維持碳氮平衡,發(fā)酵期間使用無(wú)菌空氣保持發(fā)酵罐通風(fēng),自發(fā)酵開(kāi)始60小時(shí)后培養(yǎng)成熟。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種L-色氨酸分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝,其特征在于,所述步驟I)的斜面培養(yǎng)基組成為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏...

    【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
    技術(shù)研發(fā)人員:楊曉明馬秋紅趙俊
    申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人:孟州市華興生物化工有限責(zé)任公司
    類(lèi)型:發(fā)明
    國(guó)別省市:

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