一種提高白及組培苗移栽成活率的方法技術

本發明專利技術公開了一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，所用專用培養基由種子萌發培養基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L、增殖培養基MS+6-BA1.0mg/L+KT3.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L、生根培養基MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L組成，按以下步驟進行：A.白及種子無菌萌發；B、增殖培養；C、生根培養和抗逆誘導；D、煉苗移栽。本發明專利技術在生根階段加入SA0.3g/L+CTS2g/L的自制誘抗劑10ml/L，使其在生根培養的同時誘導組培苗的抗逆性，增強苗對外界環境的適應能力，以提高苗的移栽成活率。?

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于組培育苗
，具體說涉及。
技術介紹
mkQBletilla striata (Thunb. )Rchb. f.)為蘭科白及屬多年生草本植物，以干燥假傷出血、瘡瘍腫毒、肺結核咳血、潰瘍病出血等病癥，在我國民間作為藥用已有上千年的歷史，為多種中成藥的原料。另外工業上用作染布的粘合劑、在卷煙生產中用白及作粘合劑卷制煙條，在美容上用作護膚化妝品的原料，此外，白及花色艷麗，是一種很好的景觀植物。近年來，由于白及的藥用價值和觀賞價值引起人們的關注，野生白及遭到過度采挖，導致野生資源越來越少，目前已被《中國植物紅皮書一稀有瀕危植物》第I冊收錄，同時也被寫入了《瀕危野生動植物國際貿易公約》保護種類。白及的種子非常細小且無胚乳，自然條件下極難萌發和生長，實生苗的栽培較為困難，傳統栽培主要靠分株繁殖，但分株繁殖周期長，繁殖效率低，而且耗種量大，很難滿足大量栽培的需要。組織培養技術可以快速繁殖大量種苗，遠較分株繁殖快捷高效。近年來，一些地區開展了白及組培快繁的研究，但實驗證明白及組培苗移栽成活率非常低，未能使組培快繁技術應用于生產實踐。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供，該方法在生根階段加入自制誘抗劑，使其在生根培養的同時誘導組培苗的抗逆性，增強苗對外界環境的適應能力，以提聞苗的移栽成活率。 本專利技術的技術方案是，為組織培養方法，所用專用培養基由種子萌發培養基、增殖培養基、生根培養基組成，其中 種子萌發培養基的配方配比為l/2MS+6-BA I. Omg/L+NAA 0. 75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L ； 增殖培養基的配方配比為MS+6-BA I. Omg/L + KT 3. Omg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L ； 生根培養基的配方配比為MS+NAA0. 5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L ； ，按以下步驟進行 A.白及種子無菌萌發將采摘來的未開裂蒴果用自來水沖洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自來水沖洗30min，然后在超凈工作臺上用75%酒精浸泡30秒，無菌水沖洗2-3次，再置于次氯酸鈉溶液中12分鐘，期間不斷攪拌，無菌水沖洗3-5次，然后浸泡在無菌水中待用；用無菌的解剖刀將已消毒的白及蒴果切開，將白及種子接種在上述的種子萌發培養基中，培養于光照12小時/天，光照強度3000 lx，溫度21 士 2°C的培養室；接種一星期后，種子萌發為肉眼可見的白色原球莖，兩星期后白色原球莖膨大變綠，萌發率可達到99%以上；B、增殖培養培養45天待種子苗長到2-3cm左右，在超凈工作臺上，將種子苗取出，采用直立插入的方法轉接到上述的增殖培養基中，培養于光照12小時/天，光照強度3000lx，溫度21 士 2°C的培養室。兩個月后，增殖倍率達到5 ； C、生根培養和抗逆誘導在超凈工作臺上，將白及無根苗取出，采用直立插入的方式接種到上述的生根培養基中，生根培養基中同時加有自制誘抗劑10ml/L，培養于光照12小時/天，光照強度為30001X，溫度為21 士 2°C的培養室；兩個月后，平均每株生根數可達到2-4條；所述自制誘抗劑的配方配比為SA 0.3 g/L + CTS 2 g/L ； D、煉苗移栽從培養室取出培養瓶，置于煉苗室常溫適應3d，旋松蓋子2d，然后開蓋適應3d ;煉苗完成后，洗干凈白及根部的瓊脂，移栽到盛有松針土的花盆中；花盆周圍擺上裝滿水的盆或敞口瓶以保持周圍環境的濕度，移栽后精心管理，每天早晚葉面噴水；2周后可觀察到葉片返青，繼續培養35天后可見到新葉開始生長，表明移栽的苗已經成活。 與現有技術相比，常規培養的白及組培苗移栽成活率非常低，僅為20%，本專利技術在生根階段加入自制誘抗劑，使其在生根培養的同時誘導組培苗的抗逆性，增強苗對外界環境的適應能力，以提高苗的移栽成活率，這是本專利技術的關鍵點。通過本專利技術培養的組培苗，其移栽成活率可達63%，提高了 43個百分點，是原成活率的3. 15倍，說明本專利技術的處理確實有效。附圖說明圖I是處理A苗和處理B苗在PEG脅迫下的相對含水量； 圖2是處理A苗和處理B苗在PEG脅迫下的相對電導率。具體實施例方式 下面根據附圖和實施例對本專利技術的作進一步的說明。，為組織培養方法，所用專用培養基由種子萌發培養基、增殖培養基、生根培養基組成。培養基篩選 首先，種子萌發培養基的選擇 選擇基本培養基、6-BA、NAA、椰子汁四個因素，分別設定3個水平(見表1)，采用L9(34)正交表(見表2)進行正交試驗以考察白及種子萌發的適宜培養基。各組培養基均添加30g/L蔗糖和8g/L瓊脂，pH值為5. 8。表I白及種子萌發正交試驗因素與水平表權利要求1. ，其特征是為組織培養方法，所用專用培養基由種子萌發培養基、增殖培養基和生根培養基組成，其中 種子萌發培養基的配方配比為1/2MS+6-BA l.Omg/L+NAA O. 75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L ； 增殖培養基的配方配比為MS+6-BA I. Omg/L + KT 3. Omg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L ； 生根培養基的配方配比為MS+NAA O. 5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L ； 按以下步驟進行 A、白及種子無菌萌發將采摘來的未開裂蒴果用自來水沖洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自來水沖洗30min，然后在超凈工作臺上用75%酒精浸泡30秒，無菌水沖洗2-3次，再置于次氯酸鈉溶液中12分鐘，期間不斷攪拌，無菌水沖洗3-5次，然后浸泡在無菌水中待用；用無菌的解剖刀將已消毒的白及蒴果切開，將白及種子接種在所述的種子萌發培養基中，培養于光照12小時/天，光照強度3000 lx，溫度21 士 2°C的培養室；接種一星期后，種子萌發為肉眼可見的白色原球莖，兩星期后白色原球莖膨大變綠； B、增殖培養培養45天待種子苗長到2-3cm左右，在超凈工作臺上，將種子苗取出，采用直立插入的方法轉接到所述的增殖培養基中，培養于光照12小時/天，光照強度3000lx，溫度21 士 2°C的培養室；兩個月后，增殖倍率達到5 ； C、生根培養和抗逆誘導在超凈工作臺上，將白及無根苗取出，采用直立插入的方式接種到所述的生根培養基中，生根培養基中同時加有自制誘抗劑10ml/L，培養于光照12小時/天，光照強度3000 lx，溫度21 士 2°C的培養室；兩個月后，生根數可達2-4條/株； 所述自制誘抗劑的配方配比為SA 0.3 g/L + CTS 2 g/L； D、煉苗移栽從培養室取出培養瓶，置于煉苗室常溫適應3d，旋松蓋子2d，然后開蓋適應3d ;煉苗完成后，洗干凈白及根部的瓊脂，移栽到盛有松針土的花盆中；花盆周圍擺上裝滿水的盆或敞口瓶以保持周圍環境的濕度，移栽后精心管理，每天早晚葉面噴水；2周后可觀察到葉片返青，繼續培養35天后可見到新葉開始生長，表明移栽的苗已經成活。全文摘要本專利技術公開了，所用專用培養基由種子萌發培養基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L、增殖培養基MS+6-BA1.0mg/L+KT3.0mg/本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，其特征是：為組織培養方法，所用專用培養基由種子萌發培養基、增殖培養基和生根培養基組成，其中：種子萌發培養基的配方配比為：?1/2MS+6?BA?1.0mg/L+NAA?0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L；增殖培養基的配方配比為：MS+6?BA?1.0mg/L?+?KT?3.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L；生根培養基的配方配比為：MS+NAA?0.5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L；按以下步驟進行：A.?白及種子無菌萌發：?將采摘來的未開裂蒴果用自來水沖洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自來水沖洗30min，然后在超凈工作臺上用75%酒精浸泡30秒，無菌水沖洗2?3次，再置于次氯酸鈉溶液中12分鐘，期間不斷攪拌，無菌水沖洗3?5次，然后浸泡在無菌水中待用；用無菌的解剖刀將已消毒的白及蒴果切開，將白及種子接種在所述的種子萌發培養基中，培養于光照12小時/天，光照強度3000?1x，溫度21士2oC的培養室；接種一星期后，種子萌發為肉眼可見的白色原球莖，兩星期后白色原球莖膨大變綠；B、增殖培養：培養45天待種子苗長到2?3cm左右，在超凈工作臺上，將種子苗取出，采用直立插入的方法轉接到所述的增殖培養基中，培養于光照12小時/天，光照強度3000?1x，溫度21士2oC的培養室；兩個月后，增殖倍率達到5；C、生根培養和抗逆誘導：在超凈工作臺上，將白及無根苗取出，采用直立插入的方式接種到所述的生根培養基中，生根培養基中同時加有自制誘抗劑10ml/L，培養于光照12小時/天，光照強度3000?1x，溫度21士2oC的培養室；兩個月后，生根數可達2?4條/株；所述自制誘抗劑的配方配比為：SA?0.3?g/L?+?CTS?2?g/L；D、煉苗移栽：從培養室取出培養瓶，置于煉苗室常溫適應3d，旋松蓋子2d，然后開蓋適應3d；煉苗完成后，洗干凈白及根部的瓊脂，移栽到盛有松針土的花盆中；花盆周圍擺上裝滿水的盆或敞口瓶以保持周圍環境的濕度，移栽后精心管理，每天早晚葉面噴水；2周后可觀察到葉片返青，繼續培養35天后可見到新葉開始生長，表明移栽的苗已經成活。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：龔寧，王定景，張明生，
申請(專利權)人：貴州師范大學，
類型：發明
國別省市：