本發明專利技術屬于生物技術領域，公開了一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產工藝。本發明專利技術所述生產工藝運用獨特的生物制備工藝技術，采用水提取垂體后葉干粉中的縮宮素，然后利用人造沸石吸附除去垂體后葉干粉提取液中加壓素最后利用皂土除去小分子物質、有機有色物和熱原，從而制得縮宮素。本發明專利技術所述生產工藝具有操作簡單、污染小、收率高等特點，適用于縮宮素的大規模生產。制得的縮宮素純度高、生物活性高，治療的療效顯著、藥物副作用小、安全性高，可廣泛應用于醫藥及動、植物養殖領域。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物
，具體涉及一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產工藝。
技術介紹
縮宮素(Oxytocin)，又稱催產素，是一種由9個氨基酸殘基組成的、具有一個二硫鍵的、具有生物活性的多肽類產品，分子式C43H66N12O12S2 ，分子量1007. 2，等電點7. 7，易溶于水，溶于丙酮、丁醇和稀醋酸，不溶于乙醚和石油醚，干品穩定，PH3. 5 4. 4的酸性溶液中穩定，堿性溶液中不穩定。結構式如下OH / J\ NHS ^ LRNHNH ΛQ % HNH-.sO縮宮素多肽的N末端和C末端分別為半胱氨酸和甘氨酸，其間的七個氨基酸以肽鍵相連形成一級結構，在此基礎上，由于氫鍵的形成，作用九肽間產生二級螺旋結構；而N末端的半胱氨酸和第6位的半胱氨酸的S結合形成雙S鍵而形成一個內環，加之疏水基團，如9肽中的酪氨酸，亮氨酸和異亮氨酸等形成疏水鍵，使九肽中的極性基團在內部，而離子基團在外部，使產品內部排斥水相而形成緊密結構的趨勢-β折疊，形成生物活性特定的空間結構活性中心。而縮宮素具有天然的雙S鍵和β-回折的結構決定了縮宮素的生物活性。縮宮素是一種哺乳動物激素，于1895年被發現，主要由下丘腦視上核和室旁核的神經分泌大細胞系統分泌產生，從垂體后葉釋放入血液，沿血液循環到達遠端的器官發揮作用，在臨床上被廣泛用于引產、催產及預防因分娩后子宮乏力引起的大出血，是目前美國FDA唯一認可用于臨床引產的藥物。縮宮素還能刺激乳腺的平滑肌收縮，有助于乳汁自乳房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。縮宮素不僅可作為育齡婦女生育時催產使用，同時該產品在國際上也被廣泛應用于動、植物養殖方面，如用于動物，不僅可提高動物的受胎率及繁殖率，還可提高單位產奶量；用于果樹，則不僅可加強果物的優異外觀，還能起到催熟的作用。目前主要采用化學合成法制備縮宮素。我國自1969年第一次合成縮宮素以來，國內30余家縮宮素制劑生產廠家均采用九肽酰胺經鈉-液氨法消除、縮合的辦法合成縮宮素。然而合成的縮宮素粗品含有一些與縮宮素結構類似的雜肽，例如氨基酸消旋化產生的非對映異構體、部分氨基酸未連接上產生的缺失肽、肽鍵斷裂產生的斷裂肽以及氧化不徹底產生的還原態開環肽等，造成縮宮素產品收率較低，純化困難。而且采用化學合成法制備的縮宮素無法形成其天然的雙S鍵和β -回折的結構，產品存在生物活性低的問題。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的在于針對現有制備方法的缺陷提供一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產工藝。為實現本專利技術的目的，本專利技術采用如下技術方案一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產工藝，包括 步驟I :垂體后葉干粉加水提取，離心收集提取液；步驟2 :提取液經含有O. 25%冰醋酸水溶液(體積/體積)的層析柱分離收集層析液，其中所述層析柱的填料為人造沸石；步驟3 :層析液用冰醋酸調節pH至3. 5，加熱至100°C保溫3分鐘，立即冷卻后過濾收集濾液，濾液用冰醋酸調節PH至3. 5，加入皂土吸附，過濾收集濾液即得。本專利技術所述生產工藝運用獨特的生物制備工藝技術，采用水提取垂體后葉干粉中的縮宮素，然后利用人造沸石吸附除去垂體后葉干粉提取液中加壓素最后利用皂土除去小分子物質、有機有色物和熱原，從而使制得縮宮素具有天然的雙S鍵和β -回折的結構，提高了制得的縮宮素的溶液的生物活性。其中，本專利技術所述垂體后葉干粉可以通過商業渠道從市場上購買得到，也可由哺乳動物小腦垂體后葉自行制備得到。在一個實施例中，所述垂體后葉干粉的制備方法為取哺乳動物小腦置于丙酮中脫水后，分離垂體后葉，干燥后粉碎過40-60目篩得到。其中，所述哺乳動物為豬、狗、牛、羊、馬中的一種。優選為豬、羊。本專利技術所述生產工藝首先采用水提取垂體后葉干粉以將其中的縮宮素分離。其中，步驟I所述加水提取優選為加水提取四次，每次30分鐘，合并提取液。進一步的，作為優選，步驟I所述加水提取的步驟中垂體后葉干粉與水的重量比為 1:10-1:20。更優選為 1:12-1:16。在本專利技術中，所述提取縮宮素的水可以為蒸餾水、去離子水、注射用水中的一種。優選為注射用水。在一個具體實施例中所述加水提取為稱后葉干粉，加入16倍注射用水，攪拌提取30分鐘，離心，收集液體，殘渣再分別加入14倍、12倍、12倍注射用水按同法提取三次，合并四次離心液。本專利技術所述生產工藝步驟2利用人造沸石吸附除去垂體后葉干粉提取液中加壓素，從而得到較純的縮宮素。由于縮宮素在ΡΗ3. 5 4. 4的酸性環境中最穩定，因此本專利技術所述層析柱加入了 O. 25%的冰醋酸以使溶液呈酸性。本專利技術所述生產工藝步驟2所述分離收集層析液的步驟為在人造沸石加入O. 25%冰醋酸水溶液(體積/體積)，攪拌后倒入層析柱內，使人造沸石自然沉降，等人造沸石沉降約2-3cm后，打開柱的出口，調節合適的流速，使人造沸石繼續沉積，同時逐漸加入O. 25%冰醋酸水溶液(體積/體積)平衡層析柱，待層析柱中人造沸石加至柱高2/3時，加入O. 25%冰醋酸水溶液(體積/體積)至冰醋酸水溶液液面高于人造沸石沉積面2-3厘米，立即加入提取液，收集層析柱出口流出的白色渾濁的層析液。其中所述逐漸加入O. 25%冰醋酸水溶液(體積/體積)平衡層析柱的目的是使層析柱內的人造沸石之間無縫隙，保證提取液的層析效率。進一步地，在具體實施例方式中，當提取液面下降到人造沸石表面時，立即繼續加注射用水，但渾濁液流盡后停止收集。作為優選，按g/mL計，人造沸石與O. 25%冰醋酸水溶液(體積/體積)的質量體積比為1:10。進一步地，本專利技術所述生產工藝步驟2所述提取液的流速優選為45 50mL/min。 本專利技術所述生產工藝步驟3層析后的層析液用冰醋酸調節pH至3. 5，加熱然后加入皂土吸附以除去小分子物質、有機有色物和熱原，從而能進一步純化縮宮素。作為優選，所述加入皂土吸附的步驟為按每IOOmL濾液加入3mL10%皂土漿的量加入皂土衆，攪拌吸附40分鐘。從上述的技術方案可以看出，本專利技術制備縮宮素的方法取垂體后葉干粉加水提取，離心收集提取液；提取液經含有O. 25%冰醋酸水溶液(體積/體積)的人造沸石層析柱分離收集層析液；層析液用冰醋酸調節PH至3. 5，加熱至100°C保溫3分鐘，立即冷卻后過濾收集濾液，濾液用冰醋酸調節PH至3. 5，加入皂土吸附，過濾收集濾液即得。本專利技術所述生產工藝運用獨特的生物制備工藝技術，采用水提取垂體后葉干粉中的縮宮素，然后利用人造沸石吸附除去垂體后葉干粉提取液中加壓素最后利用皂土除去小分子物質、有機有色物和熱原，從而制得縮宮素。本專利技術所述生產工藝具有操作簡單、污染小、收率高等特點，適用于縮宮素的大規模生產。本專利技術所述生產工藝制得的縮宮素純度高、生物活性高，治療的療效顯著、藥物副作用小、安全性高，可廣泛應用于醫藥及動、植物養殖領域。具體實施例方式本專利技術實施例公開了一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產工藝。本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本專利技術。本專利技術的方法已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
技術實現思路
、精神和范圍內對本文所述的方法進行改動或適當變更與組合，來實現本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產工藝，包括步驟1：垂體后葉干粉加水提取，離心收集提取液；步驟2：提取液經含有0.25%冰醋酸水溶液（體積/體積）的層析柱分離收集層析液，其中所述層析柱的填料為人造沸石；步驟3：層析液用冰醋酸調節pH至3.5，加熱至100℃保溫3分鐘，立即冷卻后過濾收集濾液，濾液用冰醋酸調節pH至3.5，加入皂土吸附，過濾收集濾液即得。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：金榮富，陳靜，
申請(專利權)人：安徽宏業藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：
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