用于檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的探針、用途及制備方法技術

本發(fā)明專利技術涉及一種用于檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的探針、用途及制備方法。該探針具有如式Ⅰ所示的結構：本發(fā)明專利技術探針在溶液中本身呈淺黃色且低熒光，與硫代膽堿（Thiocholine）巰基反應后產(chǎn)生強烈的綠色熒光（熒光發(fā)射波長525nm），選擇性強，靈敏度高，采用該探針的熒光檢測方法在生物醫(yī)藥領域有極大的應用前景。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及一種。
技術介紹
阿爾茨海默氏病(AD)即所謂的老年癡呆癥，是一種進行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，其病因主要是由于在皮層內(nèi)的乙酰膽堿(Ach)的濃度過低；臨床表現(xiàn)為認知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。乙酰膽堿(Ach)是一種中樞神經(jīng)遞質(zhì)，而乙酰膽堿酯酶(AChE)水解乙酰膽堿(Ach)是調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)反應系統(tǒng)的一個重要過程。臨床治療AD主要基于乙酰膽堿酯酶抑制劑，并因此需要能檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的技術手段。此外，神經(jīng)氣體、含有機磷和氨基甲酸酯類的殺蟲劑都是乙酰膽堿酯酶抑制劑，因此前述技術手段也可用于檢測神經(jīng)氣體和農(nóng)藥。傳統(tǒng)檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的方法有Ellmann比色、或者檢測膽堿氧化所產(chǎn)生的過氧化氫的方法，但這些檢測方法靈敏度低，往往會有背景干擾。據(jù)專利技術人了解，應用熒光探針的檢測方法具有良好的靈敏性，應當由此角度入手，研發(fā)更好的檢測方法。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術存在的問題，提供一種用于檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的探針、用途、及制備方法。本專利技術技術構思如下?lián)＠夹g人所知，氯化乙酰硫代膽堿(ATC)在乙酰膽堿酯酶(AChE)作用下會生成硫代膽堿(Thiocholine)，只要制備能與硫代膽堿的巰基發(fā)生反應產(chǎn)生熒光的探針即可。權利要求1.一種用于檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的探針，其特征是，具有如式I所示的結構2.一種制備權利要求I所述探針的方法，其特征是，包括以下步驟 第一步、先將如式A所示的熒光素與氯仿、甲醇、冠醚及氫氧化鈉反應，再將反應產(chǎn)物提純，得到式II所示熒光素單醛；3.根據(jù)權利要求2所述方法，其特征是，第一步的具體過程為(1)將熒光素與氯仿、甲醇、15-冠-5放于反應容器中，保持反應溫度于50°C _60°C并加入氫氧化鈉溶液得到反應液，在該反應溫度下持續(xù)攪拌該反應液；(2)當反應液顏色變?yōu)楹诤稚珪r,冷卻停止反應，然后加入硫酸酸化并搖晃反應液,使反應液pH為2-3,并使反應液顏色為黃褐色并產(chǎn)生沉淀；(3)收集沉淀，真空干燥后采用硅膠層析提純，即得熒光素單醛；所述硅膠層析采用體積比200:3的CH2Cl2: CH3OH為洗脫液。4.根據(jù)權利要求2所述方法，其特征是，第二步的具體過程為(1)將熒光素單醛、2_環(huán)戊烯酮、咪唑加至四氫呋喃中，再加入去離子水混合，持續(xù)攪拌得到混合液；(2)將混合液濃縮后，用乙酸乙酯萃取混合液，收集有機層溶液；(3)將有機層溶液經(jīng)硅膠層析分離得到探針；所述硅膠層析采用體積比25:75的乙酸乙酯石油醚為洗脫液。5.權利要求I所述探針用于檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的用途。全文摘要本專利技術涉及一種。該探針具有如式Ⅰ所示的結構本專利技術探針在溶液中本身呈淺黃色且低熒光，與硫代膽堿(Thiocholine)巰基反應后產(chǎn)生強烈的綠色熒光(熒光發(fā)射波長525nm)，選擇性強，靈敏度高，采用該探針的熒光檢測方法在生物醫(yī)藥領域有極大的應用前景。文檔編號G01N21/64GK102964353SQ201210411860公開日2013年3月13日 申請日期2012年10月25日 優(yōu)先權日2012年10月25日專利技術者陳小強, 王惠琳, 周國棟 申請人:南京工業(yè)大學本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種用于檢測乙酰膽堿酯酶活性抑制率的探針，其特征是，具有如式Ⅰ所示的結構：FDA00002305817900011.jpg

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：陳小強，王惠琳，周國棟，
申請(專利權)人：南京工業(yè)大學，
類型：發(fā)明
國別省市：