本發明專利技術公開了一種6-羧基熒光素的制備方法，所述的方法包括以下步驟：a、反應步驟；b、結晶步驟；c、水解步驟。本發明專利技術與現有技術相比，使用金屬催化劑四氯化錫（SnCl4）選擇性催化反應，制備6-羧基熒光素，在分離純化中選擇合適的混合溶劑的比例及純化方法，將所需產物6-羧基熒光素與副產物5-羧基熒光素比例從1:1提高到2.6:1,?分離產率提高到原來的1.9倍?(從32%提高到61%左右)。大大降低了生產成本，減化了提純過程，?為制備廣泛用于熒光標記生物大分子的6-羧基熒光素及其衍生物提供了一種高效實用的新工藝方法，具有很高的應用價值。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于6-羧基熒光素的制備方法，具體涉及選擇性金屬催化制備6-羧基熒光素的制備方法。
技術介紹
6-羧基熒光素作為一種廣泛使用的熒光染料，其相關衍生物可與蛋白、抗體， 多肽，核酸和磷脂等生物大分子結合，廣泛應用于生物科學和醫藥研究，如用于核酸探針，實時PCR和藥物靶標標記技術等。但是，現有制備6-羧基熒光素的方法中，有一個共同的難題，就是在生成6-羧基熒光素的同時，有約等量的5-羧基熒光素生成(參考文獻Yuichiro Ueno, Guan-Sheng Jiao & Kevin Burgess, Synthesis, 2004 (15)， 2591-2593)。由于5-羧基熒光素與6-羧基熒光素互為位置異構體，性質很相近，當反應產物的組成比例為6-羧基熒光素5_羧基熒光素近為1:1時，將使分離6-羧基熒光素與 5_羧基熒光素相當困難。即使分離，由于兩異構體相互交叉，損失較大，產率較低。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題在于一種制備6-羧基熒光素的新工藝方法。本專利技術解決技術問題的技術方案為，包括以下步驟a、反應步驟室溫下，在反應容器中，將間苯二酚類物質溶于甲基磺酸，再加入偏苯三酸酐，室溫攪拌均勻，加入四氯化錫，升溫至90-110 C，保溫6-10小時后，將反應體系冷至室溫，得到反應溶液；偏苯三酸酐、間苯二酚類物質、四氯化錫的摩爾比為I :2 :0. 2-0. 22b、結晶步驟將反應溶液倒入冰水溶液中，攪拌10-15分鐘，產物沉淀析出，過濾，干燥，再用甲醇和己烷混合溶液(甲醇己烷的體積比為I: 4)進行重結晶，過濾，干燥，得到6-羧基熒光素甲基磺酸加合物；C、水解步驟將6-羧基熒光素甲基磺酸加合物加入4 M NaOH水溶液中，室溫攪拌1-2小時后， 得到6-羧基熒光素鈉鹽；6-羧基熒光素甲基磺酸加合物與NaOH的摩爾比為I: I. 2-1. 3 ；再將6-羧基熒光素鈉鹽溶液加入6 N HCl水溶液中，室溫攪拌1_2小時后，產物沉淀析出，干燥至恒重，得到自由酸式6-羧基熒光素，6-羧基熒光素鈉鹽與HCl的摩爾比為 I 0. 5-0. 6。所述的間苯二酚類物質的結構式如下權利要求1.，包括以下步驟a、反應步驟；b、結晶步驟；c、水解步驟。2.根據權利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的a、反應步驟室溫下，在反應容器中，將間苯二酚類物質溶于甲基磺酸，再加入偏苯三酸酐，室溫攪拌均勻，加入四氯化錫，升溫至90-110 C，保溫6-10小時后，將反應體系冷至室溫，得到反應溶液；偏苯三酸酐、間苯二酚類物質、四氯化錫的摩爾比為I :2 :0. 2-0. 22。·2.根據權利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的b、結晶步驟將反應溶液倒入冰水溶液中，攪拌10-15分鐘，產物沉淀析出，過濾，干燥，再用甲醇和己烷混合溶液(甲醇己烷的體積比為I: 4)進行重結晶，過濾，干燥，得到6-羧基熒光素甲基磺酸加合物。3.根據權利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的C、水解步驟將6-羧基熒光素甲基磺酸加合物加入4 M NaOH水溶液中，室溫攪拌1_2小時后，得到 6_羧基熒光素鈉鹽；6_羧基熒光素甲基磺酸加合物與NaOH的摩爾比為I: I. 2-1. 3 ；再將6-羧基熒光素鈉鹽溶液加入6 N HCl水溶液中，室溫攪拌1-2小時后，產物沉淀析出，干燥至恒重，得到自由酸式6-羧基熒光素，6-羧基熒光素鈉鹽與HCl的摩爾比為I : O. 5-0. 6。4.根據權利要求I一種6-羧基突光素的制備方法,其特征在于所述的所述的間苯二酚類物質的結構式如下全文摘要本專利技術公開了，所述的方法包括以下步驟a、反應步驟；b、結晶步驟；c、水解步驟。本專利技術與現有技術相比，使用金屬催化劑四氯化錫(SnCl4)選擇性催化反應，制備6-羧基熒光素，在分離純化中選擇合適的混合溶劑的比例及純化方法，將所需產物6-羧基熒光素與副產物5-羧基熒光素比例從1:1提高到2.6:1, 分離產率提高到原來的1.9倍 (從32%提高到61%左右)。大大降低了生產成本，減化了提純過程， 為制備廣泛用于熒光標記生物大分子的6-羧基熒光素及其衍生物提供了一種高效實用的新工藝方法，具有很高的應用價值。文檔編號C07D311/80GK102942553SQ20121039000公開日2013年2月27日 申請日期2012年10月15日 優先權日2012年10月15日專利技術者石平 申請人:石平本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種6?羧基熒光素的制備方法，包括以下步驟：a、反應步驟；b、結晶步驟；c、水解步驟。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：石平，
申請(專利權)人：石平，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。