一種蛹蟲草子實體液態培養培養基及其培養方法技術

本發明專利技術的提供的蛹蟲草子實體液態培養培養基及其培養方法，所述培養基由固體無機培養介質和液態營養液組成,其解決了傳統培養基需要菌盒整體滅菌的問題，培養基的活性成分利用度高，培養基殘留物經過爍燒滅菌后可以繼續使用。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種真菌子實體培殖方法，更加具體的說涉及一種蛹蟲草液態培養的培養基及其培養方法。
技術介紹
蛹蟲草(Cordyceps militaris)與冬蟲夏草同屬蟲草屬(Cordyceps),親緣關系十分接近。蛹蟲草始載于《新華本草綱要》，其“味甘、性平”，有“益肺腎、補精髓、止血化痰”之功效。蛹蟲草富含蟲草素、腺苷、多糖、超氧化物歧化酶(S0D)、蟲草酸、氨基酸等活性成分，以及硒、鋅、鐵等礦物質元素。大量的藥理及臨床試驗證明，蛹蟲草的功效成分和藥理作用接近或超過冬蟲夏草，可作為冬蟲夏草的替代品，具有較大的開發利用價值?！び枷x草又名北冬蟲夏草、北蟲草等,分類學上屬于子囊菌亞門(Ascomycotina)、核菌綱(Pyrenomycetes)、球殼菌目(Sphaeriales)、麥角菌科(Claviciptiaceae)、蟲草屬(Cordyceps)，與冬蟲夏草為同屬。它是由蛹蟲草菌的菌絲體通過各種方式浸染鱗翅目等昆蟲，以昆蟲體內的營養物質為營養基礎，生長成子座(子實體)，子座單生或叢生，橙黃色，長2-5cm。相對來說,蛹蟲草的生長環境遠沒有冬蟲夏草那樣狹窄,主產于云南、吉林、遼寧、內蒙古等省區，寄生于針葉林地、闊葉林或混交林地表土層中的鱗翅目、鞘翅目、雙翅目等昆蟲幼蟲或蛹體上。蛹蟲草的天然資源非常有限，規?；美щy。隨著科學技術的進步，經科研人員的攻關，人工培育蛹蟲草已獲成功，目前主要有以下3種培養方法一是以終產物蟲草菌絲體為目的，將蛹蟲草液體菌種，接種到麥麩、稻糠等固體培養基上，經發酵后獲得蛹蟲草菌絲體；二是以蟲草子實體為目的，將蛹蟲草菌種接種到大米等固體培養基上，在一定的環境適宜條件下，培養可得蛹蟲草子實體(又名蟲草花)；三是以蟲菌復合體為目的，將蛹蟲草菌種接種在活體柞蠶、家蠶幼蟲或蛹體內，適宜的環境條件下，培養可獲得蟲菌復合體-蠶蛹蟲草。
技術實現思路
為解決蛹蟲草子實體培養中原料價格過高、培養基滅菌難度大等問題，本專利技術提供了一種蛹蟲草子實體的生產方法，用液態的碳源和氮源替代在蛹蟲草發菌和培養階段采用的固態培養基，蛹蟲草子實體的子座固定在無機培養介質上，具體的
技術實現思路
為—種蛹蟲草子實體液態培養培養基，所述培養基由固體無機培養介質和液態營養液組成。所述無機培養介質為粒度分布維度值介于I. 2-3. 5之間的無機多孔材料。所述無機培養介質為浮石、煤渣、礦渣中的一種。所述無機培養介質在培養基中的鋪墊厚度為3cm ;所述無機培養介質為顆粒狀，顆粒直徑為I-IOmm之間。所述發菌培養液和出草培養液兩部分組成；其中，每30CmX30Cm面積的發菌培養液的配方為麥芽糖IOOg,酵母膏20g,葡萄糖20g,磷酸二氫鉀2g,硫酸鎂2g, VB1IOmg,水lOOOmL，pH6.5 ；每30CmX30Cm面積的出草培養液為蔗糖250g，酵母膏30g，磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂 O. 8g, VB1IOmg,水 IOOOmL, ρΗ7· 5。一種蛹蟲草子實體液態培養方法，包括以下步驟I)將蛹蟲草菌株從PDA培養基直接接種到權利要求4所述的發菌培養液中，置于發酵罐發酵，至發菌培養液產生菌絲；2)將步驟I)所述產生菌絲的發菌培養液直接注入到權利要求3所述的無機培養介質中；3)在潔凈度優于10級的條件下進行發菌階段培養，培養為25±2°C，濕度為80-95%，暗室培養至菌絲長滿無機培養介質； 4)完成發菌階段培養后繼續出草階段的培養，培養為18±2°C，濕度為75-85%，光照12小時強度1000-50001uX，暗室12小時，培養至無機培養介質中物流動水時，加入權利要求4所述的出草培養液；5)繼續出草階段的培養得到蛹蟲草子實體。所述發菌培養時間為7-10天，所述出草階段的培養時間為25-30天。本專利技術的有益技術效果是本專利技術的提供的蛹蟲草子實體液態培養培養基及其培養方法，其解決了傳統培養基需要菌盒整體滅菌的問題，培養基的活性成分利用度高，培養基殘留物經過爍燒滅菌后可以繼續使用。具體實施例方式實施例I培養基碳源的考察發菌培養液配方碳源I，酵母膏20g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂2g，VB11OmgjjC lOOOmL，pH6 ;試驗中更換相應碳源；出草培養液配方基礎配方碳源II，酵母膏30g，磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. Sg,VBlIOmgjjC lOOOmL，pH7. 5 ;試驗中添加相應小分子碳源。將試驗菌種接入PDA培養基中，置于20°C恒溫生化培養箱中培養7-10d，菌絲長滿斜面備用以上述發菌培養液配方為基礎，分別加入等含碳量的葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖及可溶性淀粉，制作液體培養基，觀察菌絲生長狀況。將液體培養基裝入300mL三角瓶中，每瓶裝入120mL，在0. 15MPa濕熱高壓蒸汽下滅菌30min，冷卻后接人蛹蟲草菌種，20°C下轉速120rpm搖床震蕩培養?？瞻讓φ?，每批次20個重復，觀察菌絲生長狀況。終止發酵后，用冷凍離心機8000rpm，離心lOmin，55°C下烘干至恒重，10個重復，計算IOOmL中菌絲干重。其中菌絲生長速率測定采用試管斜面測定法。即在上述液體培養基中添加18g瓊脂，制作試管斜面。接人蛹蟲草菌種后，測定菌種萌發后菌絲體在試管斜面上的生長速度。栽培培養基制作以發菌培養液配方為基礎，分別添加等含碳量的葡萄糖或蔗糖，觀察發菌及出草情況。培養基裝入300mL罐頭瓶后，在0. 15MPa濕熱高壓蒸汽下滅菌lh，冷卻后接人液體菌種中長勢最優液體菌種，每批次30個重復。接種固體無機培養介質和發菌培養液的培養基中，應在超凈工作臺中進行，培養室的潔凈度要求優于10萬級。接種完畢，將培養瓶移人25°C左右恒溫培養室中進行發菌管理，濕度為80-95%，避光培養，其間注意通風，約4天后菌絲長滿瓶。菌絲長滿瓶后，給予散射光照射，進行轉色管理，一定晝夜溫差刺激蟲草原基分化形成。在蟲草子座表面形成子囊殼時及時采收。不同碳源對液體菌種菌絲生長狀況直接決定著菌種的優劣，對菌種接種后的發菌及出草情況有著重要影響。表I不同碳源對發酵罐液體菌種菌絲生長狀態的影響 權利要求1.一種蛹蟲草子實體液態培養培養基，其特征在于所述培養基由固體無機培養介質和液態營養液組成。2.根據權利要求I所述的蛹蟲草子實體液態培養培養基，其特征在于所述無機培養介質為粒度分布維度值介于I. 2-3. 5之間的無機多孔材料。3.根據權利要求2所述的蛹蟲草子實體液態培養培養基，其特征在于所述無機培養介質為浮石、煤洛、礦洛中的一種。4.根據權利要求3所述的蛹蟲草子實體液態培養培養基，其特征在于所述無機培養介質在培養基中的鋪墊厚度為3cm。5.根據權利要求I所述的蛹蟲草子實體液態培養培養基，其特征在于所述發菌培養液和出草培養液兩部分組成；其中，每30cmX30cm面積的發菌培養液的配方為麥芽糖100g，酵母膏20 g,葡萄糖20 g,磷酸二氫鉀2 g,硫酸鎂2 g, VB1 10 mg,水IOOOmL, pH6. 5 ; 每30cmX 30cm面積的出草培養液為蔗糖250 g，酵母膏30 g，磷酸二氫鉀I g，硫酸鎂 O. 8g, VB1 10 mg，水 1000 mL, ρΗ7· 5。6.一種蛹蟲草子實體液態培養方法，其特征在于包括以下本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種蛹蟲草子實體液態培養培養基，其特征在于：所述培養基由固體無機培養介質和液態營養液組成。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳均，龍新，劉飛，
申請(專利權)人：重慶慈恩生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：