免疫原性組合物和相關(guān)的方法技術(shù)

本公開涉及用于在免疫原性組合物中使用的佐劑，所述組合物包含至少一種抗原和已用磷酸鹽、羧酸鹽、碳酸鹽、硫酸鹽、二膦酸鹽或者這些化合物中兩種或更多種的混合物處理的含有氫氧基的鋁化合物，亦提供使用這些組合物用于預(yù)防和治療疾病的方法。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】免疫原性組合物和相關(guān)的方法相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2009年12月22日提交的美國序號(hào)61/289,077、2009年12月22日提交的美國序號(hào)61/289,236和2010年4月19號(hào)提交的美國序號(hào)61/325,615的優(yōu)先權(quán)，其通過引用以其整體結(jié)合到本文中。專利
本專利技術(shù)涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，特別地，涉及佐劑及其在免疫中的用途。
技術(shù)介紹
佐劑是摻入疫苗制劑中以增強(qiáng)疫苗抗原免疫原性的物質(zhì)。鋁鹽(例如磷酸鋁和氫氧化鋁)是現(xiàn)今在人和獸用疫苗中使用的最常用佐劑。雖然許多包含鋁的佐劑是可得的，但是對(duì)于任何一種特定的疫苗制劑，由其提供的佐劑/抗原效果可能不是最優(yōu)的。兩種方法已一般被用于制備具有鋁化合物的疫苗和類毒素-在存在抗原下原位沉淀鋁化合物和將抗原吸附到預(yù)形成的鋁凝膠上。在鋁佐劑的原位沉淀或到預(yù)形成的鋁凝膠上期間，在鋁佐劑上吸附抗原取決于抗原的物理和化學(xué)特性、使用的鋁佐劑類型和吸附條件?？捎绊懣乖阡X佐劑上的吸附的因素包括靜電力、疏水相互作用、范德瓦爾斯力、氫結(jié)合、pH、溫度、凝膠顆粒尺寸和反應(yīng)混合物的離子強(qiáng)度。通常，抗原通過靜電吸引(即，佐劑和抗原具有相反的電荷)和/或配體交換(例如，抗原上的磷酸基置換佐劑表面上的氫氧基)吸附于鋁佐劑(SeeberSJ,等Vaccine1991；9:201-3；IyerS.等,Vaccine2004；29:1475-9)。氫氧化鋁在其脫氫、結(jié)晶形式化學(xué)上是偏氫氧化鋁[AlO(OH)]，但在其水相通過獲得另外的水分子，它變成氫氧化鋁[Al(OH)3](HemS.L.等2007Vaccine25:4985-4986)。偏氫氧化鋁具有11的零電荷點(diǎn)(PZC)，因此它在pH7.4下帶正電荷。該正電荷使得偏氫氧化鋁對(duì)于帶負(fù)電荷的抗原(例如酸性蛋白)是好的吸附劑。在一個(gè)研究中，發(fā)現(xiàn)用磷酸陰離子預(yù)處理氫氧化鋁佐劑改變佐劑的表面電荷特性，使得堿性蛋白(溶菌酶，即p.+11.1)可被吸附。發(fā)現(xiàn)磷酸陰離子降低佐劑的正ζ電位(mV)，且佐劑表面電荷的該改變將佐劑和溶菌酶之間的靜電力從排斥變化為吸引，使得蛋白被佐劑吸附(RinellaJr.J.V.,等,Vaccine1996；14(第4期):298-300)。可以單層吸附于佐劑的抗原最大量被稱為“吸附能力”和吸附力的強(qiáng)度被稱為“吸附系數(shù)”(Jendrick等,Vaccine2003；21:3011-8)。吸附能力對(duì)疫苗免疫原性的影響研究表明吸附的抗原劑量百分比與制劑的免疫原性不相關(guān)(ChangM-F.等,Vaccine2001；19:2884-9；RomeroMendezIZ等Vaccine2007；25(5):825-33)。與此相反，一個(gè)研究顯示抗原與包含鋁的佐劑的吸附系數(shù)與由制劑引起的免疫反應(yīng)之間相關(guān)(Hansen等,Vaccine2007；25:6618-6624)。吸附可影響蛋白的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性。來自關(guān)于吸附于包含鋁的佐劑的影響的研究結(jié)果不完全一致：在一個(gè)研究中，吸附到Alhydrogel?或Adju-Phos?上后，去穩(wěn)定化三種蛋白(牛血清白蛋白(BSA)、溶菌酶和卵白蛋白)；在另一研究中，通過吸附到氫氧化鋁上，穩(wěn)定化BSA和?2-乳球蛋白(BLG)的結(jié)構(gòu)(JonesL.S.等,J.BiolChem2005；280(14):13406-13414；ZhengY.等,Spectroscopy2007；21(5-6):257-268)。用于穩(wěn)定化具有鋁鹽佐劑的疫苗組合物液體制劑儲(chǔ)存的方法包括凍干、冷凍和冷凍干燥，但經(jīng)常引起佐劑團(tuán)聚、免疫原濃度降低和免疫原性損失(例如，Maa等,(2003)J.Pharm.Sci.92:319-332；Diminsky等(1999)Vaccine18:3-17；Alving等(1993)Ann.NYAcad.Sci.690:265-275；和Warren等(1986)AnnRevImmunol.4:369-388，所有的這些通過引用結(jié)合)。甚至對(duì)于在冷藏條件(例如2℃-8℃)下保持的那些制劑，吸附的抗原可能化學(xué)上不穩(wěn)定，因此，隨時(shí)間推移可經(jīng)歷水解和破碎。因此，需要一種用于解決這些問題(例如，化學(xué)不穩(wěn)定性、抗原濃度降低)的生產(chǎn)包含鋁鹽佐劑的疫苗組合物的方法。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)涉及制備抗原穩(wěn)定性增加的包含至少一種抗原和含有氫氧基的鋁化合物的免疫原性組合物的方法。該方法包括：(a)將含有氫氧基的鋁化合物用選自以下的化合物處理：(i)磷酸鹽、(ii)羧酸鹽、(iii)碳酸鹽、(iv)硫酸鹽、(v)二膦酸鹽和(vi)(i)-(v)中兩種或更多種的混合物；和(b)將步驟(a)中的制備物與至少一種抗原混合?？蓪X化合物備選地用氟化物處理。相對(duì)于其中抗原與未處理的含有氫氧基的鋁化合物混合的組合物，將抗原與處理的含有氫氧基的鋁化合物混合增加抗原的穩(wěn)定性。亦提供包含至少一種抗原和已用磷酸鹽、羧酸鹽、碳酸鹽、硫酸鹽、二膦酸鹽、氟化物或者這些化合物中兩種或更多種的混合物處理的含有氫氧基的鋁化合物的免疫原性組合物以及使用這些組合物用于預(yù)防和治療疾病的方法。在一個(gè)實(shí)例中，根據(jù)公開的方法，制備包含肺炎鏈球菌蛋白PcpA和已用選擇的化合物之一(例如，磷酸鹽)處理的含有氫氧基的鋁化合物的組合物。組合物亦可包含來自多組氨酸三聯(lián)體家族的肺炎鏈球菌蛋白(PhtX：PhtA、PhtB、PhtD、PhtE)和/或解毒的肺炎鏈球菌溶血素。本專利技術(shù)提供數(shù)個(gè)優(yōu)勢。例如，本專利技術(shù)的組合物是免疫原性的并具有改善的穩(wěn)定性。本專利技術(shù)的其他特征和優(yōu)勢從下述詳述、附圖和權(quán)利要求中將顯而易見。附圖概述參考附圖，從下述描述將進(jìn)一步理解本專利技術(shù)。圖1a-f.多價(jià)制劑(用AlO(OH)或磷酸鹽處理的AlO(OH)(PTH)配制)中的PcpA和PhtD的穩(wěn)定性。使用AlO(OH)或具有終濃度為2mM磷酸鹽的PTH制備制劑，然后在各種溫度(即5℃、25℃、37℃或45℃)下孵育30周。然后通過RP-HPLC評(píng)估完整的抗原濃度。圖2.通過ELISA評(píng)價(jià)的PhtD和PcpA在應(yīng)激條件下的穩(wěn)定性。將100μg/mL的二價(jià)制劑在37℃孵育12周，并通過ELSIA評(píng)價(jià)抗原性。圖3是關(guān)于本專利技術(shù)抗原(Prt1、Prt2和Prt3)和鋁化合物的配制過程概況的圖示。圖4a，4b，4c.將Balb/c小鼠用于評(píng)估由用幾種不同佐劑之一配制的二價(jià)疫苗組合物引起的免疫反應(yīng)(實(shí)施例4)。使用純化的重組PhtD和PcpA蛋白制備制劑(如在實(shí)施例1中所述)。通過終點(diǎn)稀釋ELISA測量總抗原-特異性IgG效價(jià)(圖4a)并計(jì)算各組的幾何平均效價(jià)(+/-SD)。計(jì)算抗原-特異性IgG1(圖4b)和IgG2效價(jià)(圖4c)以評(píng)估IgG1/2a亞類。結(jié)果的概述描繪在該圖中。圖5.描繪通過終點(diǎn)稀釋ELISA測量的總抗原-特異性IgG效價(jià)和各組的幾何平均效價(jià)(+/-SD)。在該研究中(實(shí)施例6)，將Balb/c小鼠用于評(píng)估由新鮮制備的和老化的有佐劑的二價(jià)制劑引起的免疫反應(yīng)。將重組PhtD和PcpA與AlOOH或含有PO4(2mM)的AlOOH配制。該研究中使用的老化的制劑在第一次免疫前已儲(chǔ)存大約6個(gè)月(約2℃-8℃)。該研究中使用的新鮮制備的制劑在第一次免疫的一周內(nèi)制備。將多組小鼠用合適的制劑以3周間隔肌內(nèi)(IM)免疫3次。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2009.12.22 US 61/289236;2009.12.22 US 61/289077;201.一種包含至少一種抗原的免疫原性組合物，所述至少一種抗原選自肺炎鏈球菌膽堿結(jié)合蛋白APcpA和肺炎鏈球菌組氨酸三聯(lián)體蛋白DPhtD，其中所述至少一種抗原吸附于偏氫氧化鋁，所述偏氫氧化鋁已用磷酸鹽處理，其中，相對(duì)于其中至少一種抗原吸附于未處理的偏氫氧化鋁的組合物，所述處理增加至少一種吸附抗原的穩(wěn)定性。2.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中元素鋁的濃度為0.28mg/ml-1.68mg/ml。3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述至少一種抗原是蛋白或多糖，或蛋白多糖綴合物。4.權(quán)利要求1的組合物，其中元素磷的濃度為2.0mM-80.0mM。5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包含緩沖劑。6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物的pH為6.4-8.4。7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物的pH為7.4。8.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包含超過一種抗原。9.權(quán)利要求1的組合物，其中超過一種抗原吸附于偏氫氧化鋁。10.一種用于制備免疫原性組合物的方法，其包括：(a)將偏氫氧化鋁用磷酸鹽處理；和(b)將步驟(a)中的制備物與PcpA和PhtD中的至少一種混合，其中，相對(duì)于其中至少一種抗原與未處理的偏氫氧化鋁混合的組合物，將步驟(a)中的制備物與至少一種抗原混合增加至少一種抗原的穩(wěn)定性。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述偏氫氧化鋁的濃度為0.28mg/mL-1.68mg/mL。12.權(quán)利要求10的方法，其中所述抗原是蛋白或多糖。13.權(quán)利要求10的方法，其中磷酸鹽的濃度為2.0mM-80.0mM。14.權(quán)利要求10的方法，其中所述組合物另外包含緩沖劑。15.權(quán)利要求10的方法，其中所述組合物的pH為6.4-8.4。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物的pH為7.4。17.權(quán)利要求10的方法，其中所述組合物包含超過一種抗原。18.權(quán)利要求10的方法，其中超過一種抗原吸附于佐劑。19.權(quán)利要求17的方法，其中所述至少一種抗原是PcpA或PhtD。20.權(quán)利要求19的方法，其中一種抗原是PcpA和第二種抗原是PhtD。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述組合物另外包含解毒的肺炎鏈球菌溶血素PlyD1。22.一種包含吸附于偏氫氧化鋁的PcpA的免疫原性組合物，所述偏氫氧化鋁已用磷酸鹽處理，其中，相對(duì)于其中PcpA吸附于未處理的偏氫氧化鋁的組合物，所述處理增加PcpA的穩(wěn)定性。23.權(quán)利要求22的免疫原性組合物，其中所述組合物另外包含至少一種另外的抗原。24.權(quán)利要求22的免疫原性組合物，其中所述組合物另外包含PhtD。25.權(quán)利要求24的免疫原性組合物，其中所述組合物另外包含PlyD1。2...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：K哈珀，B朱蒂奇，S加利錢，M奧赫斯奧諾蘭漢姆亨，G莫爾菲爾德，F奧薩，MD薩爾哈，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：賽諾菲巴斯德有限公司，
類型：
國別省市：