本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種單克隆抗體及其應(yīng)用，尤其是呋喃唑酮代謝物衍生物的單克隆抗體及其應(yīng)用，屬于免疫化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)的呋喃唑酮代謝物單克隆抗體1C3’是由小鼠雜交瘤細(xì)胞株1C3產(chǎn)生，其亞型是IgG1型。本發(fā)明專利技術(shù)的有益效果是：通過小鼠雜交瘤細(xì)胞株1C3產(chǎn)生的單克隆抗體1C3’，能夠大量生產(chǎn)，可用于制備檢測呋喃唑酮代謝物（AOZ）的酶聯(lián)免疫分析法試劑盒和膠體金試紙條，達(dá)到快速且靈敏地檢測肌肉、肝臟、及水產(chǎn)品中的呋喃唑酮藥物代謝物的目的，為檢測呋喃唑酮代謝物殘留的試劑盒、膠體金產(chǎn)品研制奠定基礎(chǔ)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種單克隆抗體及其應(yīng)用，尤其是呋喃唑酮代謝物衍生物的單克隆抗體及其應(yīng)用，屬于免疫化學(xué)
技術(shù)介紹
呋喃唑酮(Furazolidone, FZ),又名痢特靈,是一種人工合成的硝基呋喃類廣譜抗菌藥，對多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌及某些原蟲和真菌具有抑制或殺滅效果，而且藥效穩(wěn)定，在畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖中得到了廣泛的應(yīng)用。但毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，呋喃唑酮及其代謝物3-氨基-2-惡唑燒酮(3-amino-2_oxazolidinone, Α0Ζ)均有很強(qiáng)的毒副作用，可致癌、 致突變，可引起溶血性貧血、血小板減少性紫癜、多發(fā)性神經(jīng)炎等多種疾病。1995年歐盟首先禁止呋喃唑酮在畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用，隨后美國、日本、澳大利亞等國家將呋喃唑酮列為禁用藥，我國農(nóng)業(yè)部2002年3月頒布的《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》(農(nóng)牧發(fā) I號)中將呋喃唑酮列為禁用藥。歐盟委員會于2003年通過了 2003/181/EC委員會決議，建立了用于檢測禽肉產(chǎn)品和水產(chǎn)品中總硝基呋喃類藥物的代謝物的各種方法的最小要求性能限值(Minimum Required Performance Limits,MRPL)為 I Ug/kg,即歐盟從第三國進(jìn)口的動物性產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物的代謝物的含量不得超過I μ g/kg。2004年美國FDA公布了禁止在進(jìn)口動物源性食品中使用的11種藥物名單，其中包括呋喃唑酮。因此呋喃唑酮在食品動物中的殘留不僅直接危害使用者的身體健康，同時(shí)還嚴(yán)重制約我國動物性食品出口，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，用于AOZ殘留檢測的方法主要有理化分析法和酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)等。 理化分析法主要是高效液相色譜(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS )等。理化分析法靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，但是樣品需經(jīng)一系列復(fù)雜的處理凈化，繁瑣費(fèi)時(shí)，所需儀器設(shè)備價(jià)格昂貴， 只有特定的專業(yè)技術(shù)人員才能操作，不能進(jìn)行現(xiàn)場檢測，時(shí)效性差，難以推廣。免疫化學(xué)分析法特別是酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)(ELISA)具有快速、靈敏度高、操作簡單、專一性好等優(yōu)點(diǎn)，適合高通量的樣品篩選，申請人檢索發(fā)現(xiàn)，申請?zhí)枮?00610041480. I，名稱為《單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃唑酮?dú)埩魴z測方法及應(yīng)用》的一篇中國專利技術(shù)專利申請中采用ELISA法檢測呋喃唑酮的殘留，由于呋喃唑酮在動物體內(nèi)很快代謝為AOZ，AOZ與組織蛋白結(jié)合且在體內(nèi)滯留時(shí)間長，被視為呋喃唑酮?dú)埩舻臉?biāo)示物。僅通過檢測母體藥物并不能判定呋喃唑酮的實(shí)際殘留情況。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)要解決技術(shù)問題是針對以上現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)，提出一種呋喃唑酮代謝物衍生物的單克隆抗體，并將該單克隆抗體應(yīng)用于檢測呋喃唑酮代謝物。該方法具有操作簡便、成本低廉、高通量、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。本專利技術(shù)所涉及的雜交瘤細(xì)胞株1C3已于2011年7月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號是CGMCC No. 5071，分類命名為抗呋喃唑酮代謝物衍生物單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。由上述雜交瘤細(xì)胞株1C3產(chǎn)生的單克隆抗體命名為1C3’，其制備方法包括以下步a.制備免疫原和包被原采用間醛基苯甲酸法將載體蛋白與呋喃唑酮代謝產(chǎn)物小分子偶聯(lián)，合成免疫原和包被原；b.動物免疫注射以Balb/c鼠作為免疫動物，免疫途徑為頸背部皮下多點(diǎn)注射，融合前的超強(qiáng)免疫途徑為腹腔免疫；c.篩選動物免疫血清用間接酶聯(lián)免疫吸附法和競爭間接酶聯(lián)免疫吸附法篩選免疫鼠血清；d.制備雜交瘤細(xì)胞取小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,經(jīng)過亞克隆獲得可以穩(wěn)定分泌抗呋喃唑酮代謝物衍生物單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1C3 ；e.制備并純化單克隆抗體對小鼠腹腔注射雜交瘤細(xì)胞1C3，采集腹水，對腹水進(jìn)行液相層析純化，獲得呋喃唑酮代謝物衍生物單克隆抗體1C3’。其中，步驟a所述載體蛋白為牛血清白蛋白和卵清白蛋白，對應(yīng)的免疫原為 A0Z-BSA，包被原為AOZ-OVA ;所述間醛基苯甲酸法中，交聯(lián)劑活化小分子衍生物的時(shí)間為 1-2小時(shí)，用呋喃唑酮代謝物小分子衍生物與載體蛋白偶聯(lián)反應(yīng)10-15小時(shí)。所述步驟b中的各次免疫注射劑量為100 μ g/只。所述步驟e中對免疫小鼠腹腔進(jìn)行單克隆抗體細(xì)胞株的注射量為(1-5) X IO6個/只。通過亞型鑒定得出本專利技術(shù)單克隆抗體的亞型為IgGl型。通常制備呋喃唑酮代謝物單克隆抗體的方法主要是通過藥物的羧基與載體蛋白的氨基偶聯(lián)，本專利技術(shù)將呋喃唑酮代謝物小分子通過間醛基苯甲酸進(jìn)行衍生化并將衍生化產(chǎn)物的羧基通過混合酸酐法與載體蛋白的氨基偶聯(lián)，這樣，該法合成的完全抗原，通過交聯(lián)臂間醛基苯甲酸的作用，可以將呋喃唑酮代謝物小分子充分暴露出來，使機(jī)體更容易識別抗原決定簇，提高抗原的免疫原性，在后期篩選過程中可以獲得針對呋喃唑酮代謝物衍生物的抗體。呋喃唑酮代謝物結(jié)構(gòu)式如下權(quán)利要求1.一種產(chǎn)生呋喃唑酮代謝物衍生物的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1C3，是小鼠雜交瘤細(xì)胞系 CGMCC No. 5071。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述雜交瘤細(xì)胞株1C3產(chǎn)生的單克隆抗體1C3’。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述單克隆抗體1C3’，其特征在于所述單克隆抗體亞型為IgGl型。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述單克隆抗體1C3’在檢測呋喃唑酮代謝物中的應(yīng)用。全文摘要本專利技術(shù)涉及一種單克隆抗體及其應(yīng)用，尤其是呋喃唑酮代謝物衍生物的單克隆抗體及其應(yīng)用，屬于免疫化學(xué)
本專利技術(shù)的呋喃唑酮代謝物單克隆抗體1C3’是由小鼠雜交瘤細(xì)胞株1C3產(chǎn)生，其亞型是IgG1型。本專利技術(shù)的有益效果是通過小鼠雜交瘤細(xì)胞株1C3產(chǎn)生的單克隆抗體1C3’，能夠大量生產(chǎn)，可用于制備檢測呋喃唑酮代謝物(AOZ)的酶聯(lián)免疫分析法試劑盒和膠體金試紙條，達(dá)到快速且靈敏地檢測肌肉、肝臟、及水產(chǎn)品中的呋喃唑酮藥物代謝物的目的，為檢測呋喃唑酮代謝物殘留的試劑盒、膠體金產(chǎn)品研制奠定基礎(chǔ)。文檔編號G01N33/577GK102936582SQ20121033594公開日2013年2月20日 申請日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月23日專利技術(shù)者唐宏, 崔迎利, 王曉艷 申請人:泰州康正生物技術(shù)有限公司本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種產(chǎn)生呋喃唑酮代謝物衍生物的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1C3，是小鼠雜交瘤細(xì)胞系CGMCC？No.5071。
【技術(shù)特征摘要】
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：唐宏，崔迎利，王曉艷，
申請(專利權(quán))人：泰州康正生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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