用于控制蜂中的瓦螨的組合物制造技術

本文公開了一種分離的核酸劑，所述核酸劑包含減量調節狄斯瓦螨基因產物的表達的核酸序列。本文亦公開了包含所述核酸劑的組合物及其用途。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】用于控制蜂中的瓦螨的組合物專利
和背景本專利技術涉及用于控制蜂中的瓦螨(Varroamite)侵染的組合物。蜜蜂，即意大利蜜蜂(Apismellifera)為農作物的有效授粉所必需，因此對世界農業而言為關鍵性的。蜜蜂亦產生經濟上重要的產物，包括蜂蜜和蜂蠟。蜜蜂易感染許多寄生蟲和病原體，包括外寄生螨、狄斯瓦螨(Varroadestructor)。蜜蜂的蜂群崩潰失調病(ColonyCollapseDisorder，CCD)對摧毀美國和世界農業造成威脅。實際上，2006-2007年冬天在美國最近爆發的CCD中，估計240萬蜜蜂蜂巢的25%或更多因為CCD而消失。估計23%的美國養蜂運作在2006-2007年冬天受CCD所累，影響了平均45%的養蜂人運作。在2007-2008年冬天，USDA-ARS的CCD行動小組估計，總計來自商業運作的全部蜂巢的36%被CCD破壞。CCD通過自一群其成年蜂群體的迅速消失來表征，通常在距蜂群一定距離處發現死亡的成年蜂。在崩潰末期，蜂王僅由少量新形成的成年蜂照料。崩潰的蜂群常常具有大量封蓋的幼蜂和食物儲備。CCD現象首先在2006年報道；然而，養蜂人早在2004年就注意到與CCD一致的獨特的蜂群衰退。已假定多種因素作為原因，所述因素為例如螨和傳染劑、天氣模式、電磁(蜂窩天線)輻射、殺蟲劑、營養不良和應激。迄今為止，CCD的控制已集中在瓦螨控制、環境衛生和移除受影響的蜂巢，針對機會性感染(例如小孢子蟲(Nosema))進行處理和改善營養。至今仍未開發有效的預防措施。瓦螨寄生于蛹和成年蜂中并且在蛹的撫幼室中繁殖。螨使用它們的嘴刺穿外骨骼并且以蜂的血淋巴為食。這些外骨骼中的傷口部位隱匿細菌感染，例如蜂房球菌(Melissococcuspluton)，其導致歐洲幼蟲腐臭病(Europeanfoulbrood)。此外，因為它們的寄生作用，懷疑瓦螨充當許多蜜蜂病原體的載體，所述病原體包括羽翼畸形病毒(DWV)、克什米爾蜜蜂病毒(KBV)、蜜蜂急性麻痹病毒(ABPV)和黑蜂王臺病毒(BQCV)，并且瓦螨可減弱其宿主的免疫系統，使得它們易受感染的攻擊。如果不加以治療，瓦螨侵染典型地導致群體水平的死亡率。治療瓦螨侵染的現行方法被證明無效，因為螨形成對現有殺螨劑的抗性。此外，使用這類殺螨劑可能將有害的化學品引入旨在用于人消費的蜂蜜中。美國專利申請20090118214教導了dsRNA用于預防和治療蜜蜂中的病毒感染中的用途。專利技術概述本專利技術某些實施方案的一個方面提供了一種分離的核酸劑，所述核酸劑包含減量調節狄斯瓦螨基因產物的表達的核酸序列。本專利技術某些實施方案的一個方面提供了一種核酸構建體，所述核酸構建體包含編碼本專利技術的分離的核酸劑的核酸序列。本專利技術某些實施方案的一個方面提供了一種蜂可攝取的組合物，所述組合物包含至少一種核酸劑，所述核酸劑包含減量調節狄斯瓦螨基因產物的表達的核酸序列。本專利技術某些實施方案的一個方面提供了預防或治療蜂巢的狄斯瓦螨侵染的方法，所述方法包括給蜂施用有效量的至少一種包含減量調節狄斯瓦螨基因產物的表達的核酸序列的核酸劑，從而預防或治療蜂巢的狄斯瓦螨侵染。本專利技術某些實施方案的一個方面提供了預防或治療蜂巢的狄斯瓦螨侵染的方法，所述方法包括給蜂施用有效量的本專利技術的核酸構建體，從而預防或治療蜂巢的狄斯瓦螨侵染。本專利技術某些實施方案的一個方面提供了降低蜜蜂對蜂群崩潰失調病(CCD)的易感性的方法，所述方法包括給蜜蜂施用有效量的至少一種雙鏈核糖核酸(dsRNA)，所述至少一種dsRNA包含與狄斯瓦螨mRNA的至少21個核苷酸互補且能夠誘導狄斯瓦螨特異性mRNA降解的序列。根據本專利技術的某些實施方案，所述核酸序列與狄斯瓦螨特異性RNA的至少21個核苷酸互補且能夠誘導狄斯瓦螨RNA降解。根據本專利技術的某些實施方案，所述核酸劑選自dsRNA、反義RNA和核酶。根據本專利技術的某些實施方案，dsRNA選自siRNA、shRNA和miRNA。根據本專利技術的某些實施方案，所述基因產物為編碼選自以下的多肽的mRNA：ATP酶亞基A、RNA聚合酶I、RNA聚合酶III、凋亡抑制劑(IAP)、FAS凋亡抑制劑和α-微管蛋白。根據本專利技術的某些實施方案，所述至少一種核酸劑包含至少五種核酸劑，用于減量調節ATP酶亞基A、RNA聚合酶III、凋亡抑制劑(IAP)、FAS凋亡抑制劑和α-微管蛋白，所述至少五種核酸劑的每一種都靶定不同的基因。根據本專利技術的某些實施方案，所述至少一種核酸劑包含至少六種核酸劑，用于減量調節ATP酶亞基A、RNA聚合酶I、RNA聚合酶III、凋亡抑制劑(IAP)、FAS凋亡抑制劑和α-微管蛋白，所述至少六種核酸劑的每一種都用于靶定不同的基因。根據本專利技術的某些實施方案，所述核酸劑如SEQIDNo:1、13、27、30和39所述。根據本專利技術的某些實施方案，所述核酸劑如SEQIDNo:1、4、7、10、13、16、19、22、25、27、30、33、36和39所述。根據本專利技術的某些實施方案，所述核酸序列長度大于15個堿基對。根據本專利技術的某些實施方案，所述核酸序列長度為19-25個堿基對。根據本專利技術的某些實施方案，所述核酸序列長度大于30個堿基對。根據本專利技術的某些實施方案，所述組合物呈固體形式。根據本專利技術的某些實施方案，所述組合物呈液體形式。根據本專利技術的某些實施方案，所述組合物包含蛋白質。根據本專利技術的某些實施方案，所述蛋白質呈花粉和/或大豆餅的形式。根據本專利技術的某些實施方案，所述液體為蔗糖溶液。根據本專利技術的某些實施方案，所述液體為玉米糖漿溶液。根據本專利技術的某些實施方案，所述液體進一步包含碳水化合物或糖補充劑。根據本專利技術的某些實施方案，所述蜂為蜜蜂。根據本專利技術的某些實施方案，所述蜜蜂為采集蜂。根據本專利技術的某些實施方案，所述蜜蜂為蜂巢蜂(hivebee)。根據本專利技術的某些實施方案，所述蜜蜂為蜂群的蜂，且其中所述施用降低蜂群體對蜂群崩潰失調病的易感性。根據本專利技術的某些實施方案，所述施用通過飼喂來實現。根據本專利技術的某些實施方案，所述飼喂包括提供液體的蜂可攝取的組合物。根據本專利技術的某些實施方案，所述飼喂包括提供固體的蜂可攝取的組合物。根據本專利技術的某些實施方案，狄斯瓦螨mRNA編碼選自以下的多肽：NADH脫氫酶亞基2、ATP合成酶亞基8、ATP合成酶亞基6、鈉通道和細胞色素氧化酶亞基I。除非另有定義，否則本文所用的所有技術和/或科學術語都具有與本專利技術所屬領域的普通技術人員通常理解的相同的意義。雖然與本文所述方法和材料類似或等同的方法和材料可用于實踐或測試本專利技術的實施方案，但示例性的方法和/或材料描述于下文。在沖突的情況下，以本專利說明書(包括定義)為準。此外，所述材料、方法和實施例僅為說明性的而不意圖其為必要限制。附圖簡述僅作為實例參考附圖在此描述本專利技術的某些實施方案?，F在詳細地具體參考附圖，強調的是，所示細節是作為實例并且以闡述性地討論本專利技術的實施方案為目的。在這點上，帶有附圖的描述使得本專利技術的實施方案可如何實施對本領域技術人員顯而易見。在附圖中：圖1為用于dsRNA轉入瓦螨的各種實驗的時程的示意圖。圖2A-E為狹線印跡分析(Slotblotanalysis)已攝取的蜂(圖2A)、通過成年蜂喂養的幼蟲(圖2B)、蛹本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2009.10.14 US 61/2513391.一種核酸構建體，所述核酸構建體包含編碼分離的核酸劑的核酸序列，所述核酸劑包含由配對鏈組成的瓦螨特異性雙鏈RNA雙鏈體，所述配對鏈由SEQIDNo:27和其反義核酸序列組成，其中所述雙鏈RNA不包含與任何蜂基因組序列或人基因組RNA序列完全同源的長于19個堿基的任何序列，并且其中所述dsRNA減量調節瓦螨中SEQIDNo:27的表達。2.一種蜂可攝取的組合物，所述組合物包含分離的核酸劑，所述核酸劑包含由配對鏈組成的瓦螨特異性雙鏈RNA雙鏈體，所述配對鏈由SEQIDNo:27和其反義序列組成，其中所述雙鏈RNA不包含與任何蜂基因組序列或人基因組RNA序列完全同源的長于19個堿基的任何序列，并且其中所述dsRNA減量調節瓦螨中SEQIDNo:27的表達。3.權利要求2的蜂可攝取的組合物，其中所述至少一種核酸劑還包含至少一種額外的dsRNA雙鏈體，其由配對鏈組成，所述配對鏈由選自以下的核酸序列和其反義序列組成：SEQIDNo:1、4、6、7、10、13、16、18、19、22、23、25、30、31、33、38...

【專利技術屬性】
技術研發人員：I塞拉，S沙弗，E毛里，Y加比安，E本查諾奇，G亞登，
申請(專利權)人：耶路撒冷希伯來大學伊森姆研究發展公司，比奧羅吉克斯公司，
類型：
國別省市：