本發(fā)明專利技術(shù)涉及調(diào)節(jié)集落刺激因子3(CSF3)的表達(dá)和/或功能的反義寡核苷酸，尤其是通過(guò)靶向集落刺激因子3(CSF3)的天然反義多核苷酸。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及這些反義寡核苷酸的鑒定和它們?cè)谥委烠SF3表達(dá)相關(guān)的疾病和病癥中的用途。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】
本申請(qǐng)要求2010年4月2日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No. 61/320414的優(yōu)先權(quán)，其通過(guò)引用整體并入本文。本專利技術(shù)的實(shí)施方案包括調(diào)節(jié)CSF3和相關(guān)分子的表達(dá)和/或功能的寡核苷酸。背景DNA-RNA和RNA-RNA雜交對(duì)于核酸功能的許多方面是重要的，包括DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。雜交對(duì)于檢測(cè)特定核酸或改變其表達(dá)的多種技術(shù)也是關(guān)鍵的。反義核苷酸，例如通過(guò)與靶RNA雜交從而干擾RNA剪接、轉(zhuǎn)錄、翻譯和復(fù)制來(lái)破壞基因表達(dá)。反義DNA具有額 外的特性，即DNA-RNA雜交物作被核糖核酸酶H消化的底物，這是在大多數(shù)細(xì)胞類型中存在的活性。反義分子可被遞送到細(xì)胞中，如寡脫氧核苷酸(ODN)的情形，或反義分子可從內(nèi)源基因表達(dá)為RNA分子。FDA最近批準(zhǔn)了ー種反義藥物VITRAVENE (用于治療巨細(xì)胞病毒視網(wǎng)膜炎)，反映了反義藥物具有治療效用。概述提供本概述以展示本專利技術(shù)的概述，以簡(jiǎn)要地指出本專利技術(shù)的性質(zhì)和實(shí)質(zhì)。提交本概述應(yīng)理解的是，其不會(huì)用來(lái)解釋或限制權(quán)利要求書的范圍或含義。在一個(gè)實(shí)施方案中，本專利技術(shù)提供通過(guò)利用靶向天然反義轉(zhuǎn)錄物任何區(qū)域的反義寡核苷酸而導(dǎo)致相應(yīng)有義基因的上調(diào)來(lái)抑制天然反義轉(zhuǎn)錄物作用的方法。本文還預(yù)期，天然反義轉(zhuǎn)錄物的抑制可由siRNA、核酶和小分子實(shí)現(xiàn)，認(rèn)為這些在本專利技術(shù)的范圍中。一個(gè)實(shí)施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中CSF3多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，包括將所述細(xì)胞或組織與長(zhǎng)度為5至30個(gè)核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與包括SEQ IDNO: 2的核苷酸I至742中的5至30個(gè)連續(xù)核苷酸的多核苷酸的反向互補(bǔ)序列具有至少50%序列同一性，從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中CSF3多核苷酸的功能和/或表達(dá)。在實(shí)施方案中，寡核苷酸靶向CSF3多核苷酸的天然反義序列，例如，SEQ ID NO:2所列的核苷酸及其任何變體、等位基因、同系物、突變體、衍生物、片段及其互補(bǔ)序列。反義寡核苷酸的實(shí)例如SEQ ID N0:3至7所列。另ー實(shí)施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中CSF3多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，包括將所述細(xì)胞或組織與長(zhǎng)度為5至30個(gè)核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與CSF3多核苷酸的反義的反向互補(bǔ)序列具有至少50%序列同一'注；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中CSF3多核苷酸的功能和/或表達(dá)。另ー實(shí)施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中CSF3多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，包括將所述細(xì)胞或組織與長(zhǎng)度為5至30個(gè)核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與CSF3反義多核苷酸的反義寡核苷酸具有至少50%序列同一性；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中CSF3多核苷酸的功能和/或表達(dá)。在實(shí)施方案中，組合物包括一種或多種結(jié)合有義和/或反義CSF3多核苷酸的反義寡核苷酸。在實(shí)施方案中，寡核苷酸包括一種或多種修飾或取代的核苷酸。在實(shí)施方案中，寡核苷酸包括一種或多種修飾的鍵。在又一實(shí)施方案中，修飾的核苷酸包括包含硫代磷酸酷、膦酸甲酷、肽核酸、2’ -O-甲基、氟-或碳、亞甲基或其它鎖核酸(LNA)分子的修飾的堿基。優(yōu)選地，修飾的核苷酸是鎖核酸分子，包括a-L-LNA。在實(shí)施方案中，將寡核苷酸皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)施用給患者。在實(shí)施方案中，寡核苷酸以藥物組合物施用。治療方案包括向患者施用反義化合物至少一次；然而，可修改該治療以包括經(jīng)一段時(shí)間的多個(gè)劑量。該治療可與ー種或多種其它類型的治療聯(lián)合。 在實(shí)施方案中，將寡核苷酸封裝在脂質(zhì)體中或連接于載體分子(例如，膽固醇、TAT 肽)。其它方面在以下描述。附圖簡(jiǎn)述圖I是實(shí)時(shí)PCR結(jié)果的圖，顯示利用Lipofectamine 2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸處理IfepG2細(xì)胞后與對(duì)照相比CSF3mRNA的倍數(shù)變化+標(biāo)準(zhǔn)差。實(shí)時(shí)PCR結(jié)果顯示，用針對(duì)CSF-3反義BM553437設(shè)計(jì)的ー種寡核苷酸處理后48h，HepG2細(xì)胞中CSF_3mRNA的水平顯著增加。標(biāo)為⑶R-0464至⑶R-1468的條柱分別對(duì)應(yīng)用SEQ IDN0:3至7處理的樣品。序列表描述-SEQ ID NO: I :智人集落刺激因子3 (粒細(xì)胞)(CSF3)、轉(zhuǎn)錄變體I、mRNA(NCBI 登記號(hào)NM_000759) ；SEQ ID N0:2 :天然 CSF3 反義序列(BM553437) ；SEQ IDN0:3至7 :反義寡核苷酸。*指示硫代磷酸酯鍵。詳述下面參考用于示例的實(shí)例應(yīng)用來(lái)描述本專利技術(shù)的多個(gè)方面。應(yīng)理解的是，列出許多具體細(xì)節(jié)、關(guān)聯(lián)和方法以提供對(duì)本專利技術(shù)的完全理解。然而，相關(guān)領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易認(rèn)識(shí)到，可沒(méi)有ー種或多種具體細(xì)節(jié)地實(shí)踐本專利技術(shù)或以其它方法實(shí)踐本專利技術(shù)。本專利技術(shù)不限于行為或事件的順序，因?yàn)椹`些行為可以不同順序進(jìn)行和/或與其它行為或事件同時(shí)進(jìn)行。而且，并非所有列舉的行為或事件都是實(shí)施根據(jù)本專利技術(shù)的方法所需的。本文公開(kāi)的所有基因、基因名稱和基因產(chǎn)物預(yù)期對(duì)應(yīng)來(lái)自本文公開(kāi)的組合物和方法可適用的任何物種的同系物。因此，這些術(shù)語(yǔ)包括但不限于來(lái)自人和小鼠的基因和基因產(chǎn)物。應(yīng)理解的是，當(dāng)公開(kāi)來(lái)自具體物種的基因或基因產(chǎn)物時(shí)，這一公開(kāi)僅g在示例，不應(yīng)解釋為限制，除非在其存在的上下文清楚地指明。因此，例如，對(duì)于本文公開(kāi)的基因，其在一些實(shí)施方案中涉及哺乳動(dòng)物核酸和氨基酸序列，預(yù)期涵蓋來(lái)自其它動(dòng)物的同源和/或直系同源基因和基因產(chǎn)物，所述其它動(dòng)物包括但不限于其它哺乳動(dòng)物、魚、兩棲類、爬行動(dòng)物和鳥類。在實(shí)施方案中，基因或核酸序列是人的。定義本文所用的術(shù)語(yǔ)僅是為了描述具體實(shí)施方案的目的，并不g在限制本專利技術(shù)。除非上下文另外清楚地指明，否則本文所用的単數(shù)形式〃 ー個(gè)/ ー種(a) 〃、〃一個(gè)/ ー種(an)〃和〃該(the) 〃預(yù)期包括復(fù)數(shù)形式。而且，就詳述和/或權(quán)利要求書中使用術(shù)語(yǔ)〃包括(including) 〃、〃包括(includes) 〃、〃具有(having) 〃、〃具有(has)"、〃帶有(with) 〃或其變化形式來(lái)說(shuō)，這些術(shù)語(yǔ)預(yù)期以類似于術(shù)語(yǔ)〃包含(comprising) 〃的方式被包括。術(shù)語(yǔ)〃約〃或〃大約〃是指在由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定的特定數(shù)值的可接受誤差范圍內(nèi)，其將部分地取決于如何測(cè)量或確定該數(shù)值，即，測(cè)量系統(tǒng)的限度。例如，按照本領(lǐng)域中的實(shí)踐，〃約〃可表示在I個(gè)或多于I個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差內(nèi)?？蛇x地，〃約〃可表示給定數(shù)值的達(dá)20%、優(yōu)選地達(dá)10%、更優(yōu)選地達(dá)5%、仍更優(yōu)選地達(dá)1%的范圍。可選地，尤其是有關(guān)生物系統(tǒng)或方法，術(shù)語(yǔ)可表示在數(shù)值的數(shù)量級(jí)內(nèi)，優(yōu)選地在5倍內(nèi)，更優(yōu)選地在2倍內(nèi)。當(dāng)在本申請(qǐng)和權(quán)利要求書中描述特定數(shù)值時(shí)，除非另外指明，否則應(yīng)假設(shè)術(shù)語(yǔ)"約"表示在特定數(shù)值可接受的誤差范圍內(nèi)。本文所用的術(shù)語(yǔ)〃mRNA〃是指靶基因的目前已知的mRNA轉(zhuǎn)錄物和可能說(shuō)明的任何進(jìn)ー步的轉(zhuǎn)錄物。 〃反義寡核苷酸〃或〃反義化合物〃是指結(jié)合另ー RNA或DNA (靶RNA、DNA)的RNA或DNA分子。例如，如果其是RNA寡核苷酸，其借助于RNA-RNA相互作用結(jié)合另一 RNA靶并 且改變靶RNA的活性。反義寡核苷酸可上調(diào)或下調(diào)特定多核苷酸的表達(dá)和/或功能。該定義意為包括從治療、診斷或其它觀點(diǎn)來(lái)說(shuō)有用的任何外來(lái)RNA或DNA分子。這種分子包括，例如，反義RNA或DNA分子、干擾本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：J·克拉德，O·霍克瓦舍曼，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：庫(kù)爾納公司，
類型：
國(guó)別省市：
還沒(méi)有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。