自體真皮成纖維細胞的劑量單位調配物制造技術

劑量單位由自體細胞療法產品組成，所述產品由針對待治療的每個個體所生長的成纖維細胞構成。使用現行良好制造規范（CGMP）和標準組織培養程序從每個個體自身皮膚的活檢體生長的自體成纖維細胞的懸浮液在含有具有至少98%成纖維細胞純度以及至少85%成活力的低溫保存的成纖維細胞或其前驅體的小瓶中供應，用于以1.0-2.0×107個細胞/毫升的濃度投予1到6mL、優選2mL的細胞。當注射到鼻唇溝皺紋（鼻側上延伸到嘴角的皺褶）中時，認為自體成纖維細胞會增加細胞外基質組分（包括膠原蛋白）的合成，從而減輕這些皺紋的嚴重程度。已證實投藥劑量和時機對達成臨床上顯著的成果至關重要。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術關于經過分離和制備的自體真皮成纖維細胞的劑量單位調配物，其用于在一個部位注射以供修復和/或長期改善人類個體的皮膚和軟組織缺陷。
技術介紹
如美國專利第5，591，444 號、第 5，660，850 號、第 5，665，372 號以及第 5，858，390號中所述，個體皮膚中的美容和審美缺陷可以通過將自體真皮成纖維細胞的懸浮液注射到 較鄰近于缺陷的真皮和皮下組織中來矯正。可以通過此方法矯正的典型缺陷包括皺皮、萎縮紋、凹陷性瘢痕、非外傷來源的皮膚凹陷、由尋常痤瘡引起的瘢痕以及唇部發育不全。所述細胞與個體組織相容，優選地通過培養從個體獲取的活檢標本而得到，并且已通過在細胞培養系統中繼代培養而擴增。將材料(“注射物(injectate)”)注射到體內并且尤其注射到面部以產生美學效果從接近十九世紀開始。舉例來說，注射石蠟來矯正面部輪廓缺陷在第I次世界大戰之前多年中享有一段短暫的接受期。然而，并發癥和長期結果不能令人滿意的性質導致放棄了實施。可注射硅酮的可用性使得這些事件在I960年代早期開始實質上重現。專門制造的“醫用級”硅酮溶液，例如道康寧(Dow Corning) MDX 4. 4011，已在美國的許多經過批準的測試中心在實驗的基礎上加以使用。并發癥，如對硅酮的局部和全身反應、注射物遷移以及局部組織崩塌，限制了硅酮注射液的使用。通過注射非生物性材料而獲得的不良結果促使嘗試使用外來蛋白質(尤其牛膠原蛋白)作為注射物。雖然未經過加工的牛膠原蛋白對于注射到人體內來說具有過度免疫原性，但是通過酶促降解而去除牛膠原蛋白的C端和N端肽會得到一種材料(“去端肽膠原蛋白(atelocollagen)”)，如果患者經過預篩選以排除那些具有免疫反應性的患者，那么所述材料可按有限量使用。雖然被廣泛使用，但是所述材料與約90%的個體中產生抗牛抗體以及約1-3%的個體中的明顯免疫并發癥相關聯。德魯斯特F. (DeLustro, F.)等人，1987，整形與改造外科學(Plastic and Reconstructive Surgery)79:581。呈溶液形式的去端肽膠原蛋白經證實不能完全令人滿意，這是因為所述材料在相對較短時間內被個體從注射部位吸收而不被主體材料替換。通過戊二醛交聯、隨后通過細篩過濾并剪切來延長在體內的滯留。然而，增加以及不規律的粘度使得所述材料難以使用。完全來源于個體自身組織樣品的注射用的人類膠原蛋白是可用的，但是沒有證據表明人類膠原蛋白注射液比牛膠原蛋白注射液更持久。這些問題通過開發自體成纖維細胞制劑來解決。然而，有了問題的解決方案并不代表有了已通過反復試驗驗證并通過臨床試驗確認，并且已遵照美國食品藥品管理局(U. S. Food and Drug Administration)的要求制造并包裝,按規定劑量穩定存儲的產品。因此，本專利技術的一個目標在于提供自體真皮成纖維細胞的規定劑量單位調配物，用于注射到患者體內以供修復和長期改善皮膚缺陷。本專利技術的另一個目標在于提供含有干細胞、前驅細胞或部分分化的細胞的劑量單位調配物，其可用于修復和長期改善皮膚缺陷。
技術實現思路
劑量單位由自體細胞療法產品組成，所述產品由針對待治療的每個個體所生長的成纖維細胞構成。使用現行良好制造規范(CGMP)和標準組織培養程序從每個個體自身皮膚的活檢體生長的自體成纖維細胞的懸浮液在含有具有至少98%成纖維細胞純度以及至少85%成活力的低溫保存的成纖維細胞或其前驅體的小瓶中供應，用于以I. 0-2. OX IO7個細胞/毫升的濃度分三次，約間隔五周投予I到6mL、優選2mL的細胞，每線性厘米長度注射O. 05到O. 5mL。通過在無蛋白質的培養基中培育經過擴增的成纖維細胞一段時間，使得經過繼代培養的真皮成纖維細胞實質上不含培養基中所存在的免疫原性蛋白質。當注射到鼻唇溝皺紋(鼻側上延伸到嘴角的皺褶)中時，認為自體成纖維細胞會增加細胞外基質組分(包括膠原蛋白)的合成，從而減輕這些皺紋的嚴重程度。已證實投藥劑量和時機對達成臨床上顯著的成果至關重要。雖然在美國(US)有若干種經過批準的療法用于治療鼻唇溝皺紋，如Restylane'JuWderm 以及RadieSSes\但是成纖維細胞懸浮液并不屬于與這些產品相同的藥理學類 另O。這些產品是注射到面部組織中以通過暫時為面部組織增加體積來平復皺紋和溝的結構填充劑。成纖維細胞劑量調配物通過一種極為不同的提議作用機理而起作用。本文所述的劑量調配物單位適用于治療皺皮、鼻唇和唇頰溝、口周紋、外眼角紋、眶周紋以及眉間紋。成纖維細胞劑量調配物還適用于提供用于組織修復和再生的多能細胞。附圖說明圖I為標準化制造工藝流程圖。圖2為來自伯恩(Byrne) 2008人類分子遺傳學(Hum. Mol. Gen. ) 17:R37_R41的示意圖，其展示使用外遺傳重編程可使源自皮膚的成纖維細胞去分化成多能干細胞的方式，所述多能干細胞接著可分化成神經細胞、心肌細胞、β胰島細胞以及造血細胞。圖3為可使成纖維細胞去分化成多能細胞的方法的示意圖細胞融合(科文(Cowan)等人，2005)、直接重編程(高橋(Takahashi)等人，2007)以及體細胞核轉移(伯恩(Byrne)等人,2007)。圖4為用于醫師客觀評估的痤瘡瘢痕嚴重程度的活動期分級，即“評估者活動期痤瘡癒痕評估量表(Evaluator Live Acne Scar AssessmentScale)”中的圖解,所述量表采用在直接和切線照明下相對瘢痕外觀的比較性評估。具體實施例方式已開發出一種自體成纖維細胞產品。所述細胞療法產品是由使用標準組織培養程序從每個個體自身皮膚的活檢體生長的自體成纖維細胞的懸浮液構成。從患者耳后區域提取皮膚組織(真皮和表皮層)的活檢體并且經由次日送達在2-8°C下運送到制造設施。將經由酶消化從組織分離的成纖維細胞擴增到足以注射到患者的目標治療區域中的量。細胞療法產品由經過擴增的成纖維細胞組成，這些成纖維細胞被調配成目標細胞療法產品的細胞濃度且在冷凍小瓶中低溫保存，稱為冷凍小瓶裝散裝原料藥。最終細胞療法產品由解凍的散裝細胞療法產品-經過解凍、洗滌并且準備用于患者注射的冷凍小瓶細胞組成。最初銷售批準是用于治療中度到重度鼻唇溝皺紋。當前臨床開發集中于治療真皮輪廓畸形、聲帶瘢痕、牙齦退縮、限制性燒傷瘢痕以及痤瘡瘢痕。如下文所論述，視待治療的病狀而定，劑量和投藥方案有所不同。雖然確切機理未知，但是認為構成成纖維細胞劑量調配物的活性組分的自體成纖維細胞當注射到患者皮膚中時會增加細胞外基質組分(如膠原蛋白)的合成，由此增強皮膚完整性并且最終使得細紋和皺紋減少。本文中使用以下定義ATM分析測試法AZFICEL-T自體培養的成纖維細胞的USAN名稱散裝收集物(BULK HARVEST)在最終收集之后、在低溫保存培養基中調配之前的材料CGMP現行良好制造規范 CS細胞堆疊DMEM 達爾伯克改良伊格爾培養基(Dulbecco，s Modification ofEagle’ sMedium)DMSO 二甲亞砜注射用藥品(DRUG PR0DUCT-INJECTI0N)經過洗滌并于DMEM中重新調配、裝入小瓶并且準備運送到臨床場所的材料冷凍小瓶裝原料藥(DRUG 本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：約翰·馬斯洛斯基，
申請(專利權)人：法布羅賽爾科技公司，
類型：
國別省市：