本發(fā)明專利技術(shù)涉及了一種利用氧載體提高發(fā)酵液中桿菌肽效價(jià)的方法，通過在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加一定量的氧載體，在不改變其它發(fā)酵條件的情況下，可以改善發(fā)酵液的溶氧情況，較大程度的提高發(fā)酵液中桿菌肽的效價(jià)。本方法工藝簡單，生產(chǎn)過程的氧載體可以回收利用，降低了生產(chǎn)成本，對于抗生素的生產(chǎn)有著重要的指導(dǎo)意義。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于微生物領(lǐng)域，涉及微生物發(fā)酵過程中優(yōu)化的應(yīng)用技術(shù)，尤其是。
技術(shù)介紹
桿菌肽(Bacitracin)，外觀為白色或灰白色粉末，無臭或微臭，味苦，有吸濕性，溶于水、甲醇和乙醇，不溶于丙酮、乙醚和氯防。桿菌肽是一種廣普抗生素，對革蘭陽性菌有較強(qiáng)的抑制作用，特別是梭狀芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、棒狀桿菌屬和奈瑟球菌屬等病原菌對其極為敏感，對耐青霉素的金黃色葡萄球菌也有較強(qiáng)的抑制作用，適用于治療膿腫、痤瘡、化膿性皮膚病、阿米巴痢疾、淋球菌和腦膜炎雙球菌等感染癥，對腎臟的毒性較大。目前，對微生物發(fā)酵方法生產(chǎn)桿菌肽的研究主要是發(fā)酵條件的優(yōu)化，如培養(yǎng)基優(yōu)化，發(fā)酵模式的優(yōu)化，并沒有很好地效果；也有的工廠通過傳統(tǒng)的微生物誘變育種來篩選高產(chǎn)桿菌肽的菌株，這種方法的缺點(diǎn)是隨即性太大，并且長期的誘變會(huì)使菌株的活力不斷的下降。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種利用氧載體提高發(fā)酵液中 桿菌肽效價(jià)的方法，通過在發(fā)酵液中加入氧載體，改善發(fā)酵液的溶氧狀況，促進(jìn)菌體的生長，合成更多的桿菌肽，提高發(fā)酵液的效價(jià)，并且發(fā)酵過程中的氧載體可以回收利用，節(jié)約更多的成本。本專利技術(shù)實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下，在微生物發(fā)酵生產(chǎn)桿菌肽的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入添加氧載體，所述氧載體為正十二烷、油酸或大豆油的一種或兩種以上的混合物。而且，所述氧載體的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的O. 5_10%。而且，所述微生物為地衣芽孢桿菌，由中國普通微生物菌種保藏中心保存，其編號(hào)為 CGMCC I.105。而且，具體的發(fā)酵步驟如下⑴菌種培養(yǎng)將地衣芽孢桿菌接種到種子培養(yǎng)基中，30-40°C，150-200rpm恒溫培養(yǎng)20-30小時(shí)；⑵發(fā)酵培養(yǎng)將步驟⑴得到的種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，30-40°C，200-300rpm，在發(fā)酵罐中加入無菌的氧載體，氧載體的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的O. 5-10%恒溫培養(yǎng)40-45小時(shí)，發(fā)酵得到桿菌肽。而且，所述種子培養(yǎng)基為牛肉膏5-10g/L、蛋白胨2-5g/L、氯化鈉5-10gL、pH7. 2。而且，所述發(fā)酵培養(yǎng)基為玉米粉20_40g/L、蔗糖10_20gL、硫酸銨l_10g/L、碳酸鈣 l-10g/L、玉米漿 20-40g/L。本專利技術(shù)的有益效果本專利技術(shù)在發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液中加入氧載體，可以增加發(fā)酵液中氧氣的溶量，增大氧氣在發(fā)酵液中的傳遞速率，減少發(fā)酵過程中的能量消耗，實(shí)驗(yàn)用到的氧載體用量少，并且是水不溶性，發(fā)酵結(jié)束后可以回收利用，在不增加生產(chǎn)成本的同時(shí)，增加桿菌肽的產(chǎn)量，對其它的對氧氣需求較大的發(fā)酵具有一定的指導(dǎo)意義。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對本專利技術(shù)的一種高鹽稀態(tài)黑豆醬油及其制備方法進(jìn)一步說明， 下述實(shí)施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來限定本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。本專利技術(shù)通過在發(fā)酵液中加入氧載體，改善發(fā)酵液的溶氧狀況，促進(jìn)菌體的生長，合成更多的桿菌肽，提高發(fā)酵液的效價(jià)，并且發(fā)酵過程中的氧載體可以回收利用，節(jié)約更多的成本。氧載體的種類為正十二烷、油酸和大豆油，發(fā)酵液中加入的氧載體的體積為O. 5-10%，氧載體可以增加發(fā)酵液的溶氧，有利于菌體的生長和桿菌肽的合成。以下實(shí)施例中使用的地衣芽孢桿菌在中國普通微生物菌種保藏中心保存，其編號(hào)為CGMCC 1.105。本專利技術(shù)的方法不限于這一單一菌種，凡是發(fā)酵能夠產(chǎn)生的桿菌肽即可，其中氧載體的添加數(shù)量根據(jù)菌種以及發(fā)酵液的不同，添加量會(huì)有變化，但這是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠合理獲知的。發(fā)酵液中桿菌肽的效價(jià)的測定方法為微生物二劑量法檢測發(fā)酵液中的桿菌肽的效價(jià)。實(shí)施例I，步驟如下⑴一級(jí)種子培養(yǎng)將地衣芽孢桿菌作為生產(chǎn)菌種從斜面接種到pH7. 2種子培養(yǎng)基中，在旋轉(zhuǎn)式搖床上160r/min轉(zhuǎn)速、溫度37°C條件下培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)，得到適于接種的種子培養(yǎng)液，種子培養(yǎng)基含有牛肉膏10g/L，蛋白胨5g/L氯化鈉10g/L。⑵二級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)將種子培養(yǎng)液按5% (v/v)的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種前加過濾除菌的1% (v/v)的正十二烷。發(fā)酵培養(yǎng)基含有玉米漿35g/L、蔗糖12g/L、硫酸銨 3g/L、碳酸鈣 2g/L、玉米粉 25g/L、pH=7. 2。⑶發(fā)酵培養(yǎng)方式是在7L的發(fā)酵罐上進(jìn)行，發(fā)酵罐的裝液量為3. 5L，250rpm、37°C溫度條件下發(fā)酵培養(yǎng)45小時(shí)。本實(shí)施例中發(fā)酵液中桿菌肽的效價(jià)是594. 8u/ml,比未添加氧載體的培養(yǎng)基中的桿菌肽的效價(jià)522. 4u/ml高出了 13. 86%。實(shí)施例2，步驟如下⑴一級(jí)種子培養(yǎng)同實(shí)施案例I中的⑴。⑵二級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)將種子培養(yǎng)液按5% (v/v)的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種前加過濾除菌的2%(v/v)的油酸。發(fā)酵培養(yǎng)基含有玉米漿30g/L、蔗糖15g/L、硫酸銨2g/L、碳酸鈣 3g/L、玉米粉 20g/L、pH=7. 2。⑶發(fā)酵培養(yǎng)方式是在7L的發(fā)酵罐上進(jìn)行，發(fā)酵罐的裝液量為3. 5L。250rpm、37°C溫度條件下發(fā)酵培養(yǎng)46小時(shí)。本實(shí)施例中發(fā)酵液中桿菌肽的效價(jià)是562. 7u/ml,比未添加氧載體的培養(yǎng)基中的桿菌肽的效價(jià)522. 4u/ml高出了 7. 71%。實(shí)施例3，步驟如下⑴一級(jí)種子培養(yǎng)同實(shí)施案例I中的⑴。⑵發(fā)酵培養(yǎng)將種子培養(yǎng)液按5% (v/v)的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種前加·過濾除菌的5% (v/v)的大豆油。發(fā)酵培養(yǎng)基含有玉米漿30g/L、蔗糖13g/L、硫酸銨4g/L、碳酸鈣 2g/L、玉米粉 25g/L、pH=7. 2。⑶發(fā)酵培養(yǎng)方式是在7L的發(fā)酵罐上進(jìn)行，發(fā)酵罐的裝液量為3. 5L。200rpm、37°C溫度條件下發(fā)酵培養(yǎng)42小時(shí)。本實(shí)施例中發(fā)酵液中桿菌肽的效價(jià)是547. lu/ml,比未添加氧載體的培養(yǎng)基中的桿菌肽的效價(jià)522. 4u/ml高出了 4. 73%。權(quán)利要求1.，其特征在于在微生物發(fā)酵生產(chǎn)桿菌肽的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入添加氧載體，所述氧載體為正十二烷、油酸或大豆油的一種或兩種以上的混合物。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用氧載體提高發(fā)酵液中桿菌肽效價(jià)的方法，其特征在于所述氧載體的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的O. 5-10%O3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用氧載體提高發(fā)酵液中桿菌肽效價(jià)的方法，其特征在于所述微生物為地衣芽孢桿菌，由中國普通微生物菌種保藏中心保存，其編號(hào)為CGMCCI.105。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用氧載體提高發(fā)酵液中桿菌肽效價(jià)的方法，其特征在于具體的發(fā)酵步驟如下 (1)菌種培養(yǎng) 將地衣芽孢桿菌接種到種子培養(yǎng)基中，30-40°C，150-200rpm恒溫培養(yǎng)20-30小時(shí)； ⑵發(fā)酵培養(yǎng) 將步驟⑴得到的種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，30-40°C，200-300rpm，在發(fā)酵罐中加入無菌的氧載體，氧載體的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的O. 5-10%恒溫培養(yǎng)40-45小時(shí),發(fā)酵得到桿菌肽。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用氧載體提高發(fā)酵液中桿菌肽效價(jià)的方法，其特征在于所述種子培養(yǎng)基為牛肉膏5-10gL、蛋白胨2-5gL、氯化鈉5-10gL、pH7. 2。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用氧載體提高發(fā)酵液中桿菌肽效價(jià)的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基為玉米粉20-40gL、蔗糖10-20g/L、硫酸銨l_10g/L、碳酸鈣Ι-lOgL、玉米漿 20-40g/L。全文摘要本專利技術(shù)涉及了，通過在本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種利用氧載體提高發(fā)酵液中桿菌肽效價(jià)的方法，其特征在于：在微生物發(fā)酵生產(chǎn)桿菌肽的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入添加氧載體，所述氧載體為正十二烷、油酸或大豆油的一種或兩種以上的混合物。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：別松濤，李建勛，路福平，謝進(jìn)霞，徐星，蔡鑫，
申請(專利權(quán))人：天津科技大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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