本發明專利技術公開了一種從西蘭花種子中提取高純蘿卜硫素的方法，包括：⑴用干燥的西蘭花種子粉碎后加水，水解得到固液混合物；⑵往該混合物中加入無水乙醇，超聲浸提，抽濾或雙層紗布過濾；⑶將濾液真空濃縮蒸發乙醇；⑷料液用大孔樹脂柱層析，用乙醇水溶液進行梯度洗脫；⑸收集含蘿卜硫素洗脫液，再用氧化鋁柱層析；蘿卜硫素層析液經濃縮至浸膏，獲得蘿卜硫素粗品；⑹將獲得的粗品加水溶解,采用極性溶劑進行萃??；⑺收集有機層,再經真空濃縮至油狀浸膏，即獲得高純蘿卜硫素。本方法可從西蘭花種子及西蘭花相關材料中直接提取高純蘿卜硫素，優點是流程簡單、產品穩定、設備簡單、生產安全。適用于工業化提純蘿卜硫素的企業。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及提取純化天然產物中有效成分的方法，具體而言，涉及從西蘭花種子中提取高純度蘿卜硫素的方法。
技術介紹
據世界衛生組織統計，目前全球每年因癌癥死亡的人數高達700萬。但至今為止，人們尚未找到攻克癌癥的辦法。因此，研究和控制腫瘤是當今生命科學領域的重大課題。流行病學及藥理學研究表明癌癥發病率低的地方，人們飲食中的蔬菜、水果所占比例較大。究其原因，是蔬菜水果中存在一種或多種阻止或減緩癌癥發展的活性成分，如番茄中的番茄紅素、大豆制品中的大豆異黃酮、漿果中的鞣化酸以及十字花科蔬果中的蘿卜硫素、吲哚類物質，均已證實具有良好的防癌抗癌作用。在眾多含有抗癌活性成分的蔬菜中，十字花科(洋白菜、花莖甘藍、球莖甘藍、青花椰菜、芥藍、白蘿卜和高麗菜等)富含硫代葡萄糖苷(硫 甙)，其在蔬菜本身具有的黑芥子酶作用下能降解成異硫代氰酸鹽類抗癌物質。蘿卜硫素是屬于異硫代氰酸鹽中的一種，也是迄今為止蔬菜中發現的最強抗癌成分。西蘭花又名綠花菜、青花菜等，為十字花科蕓薹屬甘藍種中以綠色花球為產品的一個變種。研究表明，西蘭花中含有豐富的蘿卜硫素，能有效對抗乳腺癌和大腸癌。健康的人們經常食用西蘭花也能起到預防癌癥的作用。因此，西蘭花被譽為“防癌新秀”。目前已有一些從西蘭花中提取蘿卜硫素的專利申請件，例如《一種提取蘿卜硫素的方法(CN101143842)》、《一種西蘭花種子提取物及其制備方法(CN101229211)》、《一種萊菔硫烷的制備方法(CN1982294)》、《一種蘿卜硫素的提取方法(CN101544995)》，均公開了西蘭花種子中有效活性成分蘿卜硫素的提取和純化方法。這些方法存在的問題有純化過程中都采用硅膠柱層析，再用C18制備色譜或凝膠柱來純化蘿卜硫素，硅膠柱展開劑中使用有毒有機溶劑洗脫，生產過程還存在易燃易爆的問題，再加上柱層析材料再生較難等缺陷，導致上述專利只適合小批量及實驗室制備用，不適于工業化生產。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種從西蘭花種子中提取高純蘿卜硫素的方法，以克服現有技術不能工業化生產的缺陷，從而為將從西蘭花種子中提取的蘿卜硫素用于人類防治癌癥打下基礎。專利技術人經過系統的研究和試驗后，提出的方法包括以下步驟 (1)用干燥的西蘭花種子為原料，粉碎后加水；在溫水中水解，得到固液混合物； (2)往水解后的固液混合物中加入無水乙醇，超聲浸提，抽濾或雙層紗布過濾； (3)將濾液在真空條件下濃縮蒸發乙醇； (4)將去醇后料液用同極性大孔樹脂柱層析，用乙醇水溶液為洗脫劑進行梯度洗脫，選擇性收集含蘿卜硫素洗脫液； (5)將獲得蘿卜硫素洗脫液，過氧化鋁干柱層析脫色，收集蘿卜硫素層析液，再經真空濃縮至油狀浸膏，即獲得純度為60%的蘿卜硫素； (6)將上步獲得純度為60%的蘿卜硫素浸膏,加水溶解后，采用有機溶劑進行萃??； (7)萃取后棄去水層，有機層進行真空濃縮，即得純度大于90%的蘿卜硫素提取物。上述步驟(I)中，所述西蘭花種子粉碎至30 60目；所述加水的質量是種子粉末質量的I. 5 2倍；所述溫水的溫度為25°C 35°C ;所述水解時間為7 9h。上述步驟(2)中，所述加入無水乙醇的質量是固液混合物質量的8 8. 5倍；所述超聲浸提時間為30 60min，超聲浸提頻率40kHz，功率200W。上述步驟(3)中，所述真空條件下濃縮時的真空度為-O. 06 -O.OSMPa，溫度為30°C 40°C。上述步驟(4)中，所述同極性大孔樹脂的型號是AB-8、DM-130, DlOl ;所述梯度洗·脫的乙醇溶液的質量分數分別為30 %、50 %、70 %。上述步驟(5)中，所述真空濃縮時的真空度為-O. 06 -O. 08MPa，溫度為30°C 40。。。上述步驟￠)中，所述加水溶解的量為浸膏量的10倍量；所述有機溶劑是乙酸乙酯或二氯甲烷與乙醇按照I : I組成的混合溶劑；所述萃取次數為3次，萃取所用有機溶劑的量為水層料液的兩倍量。上述步驟(7)中，所述真空濃縮時控制的真空度為-O. 06 -O. 08MPa。專利技術人指出，本專利技術的技術步驟可歸納如下西蘭花種子粉碎至30 60目后加水I. 5 2倍，于25°C 35°C的溫度下水解7 9h，往水解后的固液混合物中加入8 8. 5倍的無水乙醇后超聲浸提30 60min，板框過濾(雙層紗布)，30°C 40°C條件下真空濃縮去醇，去醇后的提取液用大孔樹脂柱層析(洗脫梯度為30 %、50 %、70 %的乙醇水溶液)，收集含蘿卜硫素的液體(經HPLC檢測確定)，洗脫液過氧化鋁干柱層析，收集層析液；經30°〇 40°C條件下真空濃縮至浸膏，獲得純度為60%的蘿卜硫素，加入適量水溶解后，采用有機溶劑進行萃取，棄去水層，有機層真空濃縮，即得純度大于90%的蘿卜硫素提取物。本專利技術方法可以從西蘭花種子中直接提取純度大于90%的高純蘿卜硫素，具有工藝流程簡單、產品質量穩定、使用試劑安全及生產設備簡單等易工業化生產的優點。適用于以西蘭花種子為原料工業化提取蘿卜硫素的企業。具體實施例方式實施例I 取西蘭花種子100g，粉碎至30 60目后，加水200ml ;在35°C的溫度下水解8h，加入無水乙醇800ml，超聲浸提30min，超聲浸提頻率40kHz，功率200W ;然后采用雙層紗布過濾；將濾液在40°C條件下真空濃縮蒸發乙醇；采用抽濾的方式過濾至清亮，將清亮后料液150mL,用AB-8大孔樹脂柱層析，用質量分數為30%的乙醇400mL除去雜質，并棄去洗脫液，再用質量分數為50%的乙醇600mL洗脫大孔樹脂層析柱上的蘿卜硫素，收集洗脫液，再用氧化鋁柱層析，并收集蘿卜硫素洗脫液，再經40°C條件下真空濃縮至油狀浸膏，稱取5mg的濃縮油狀物用甲醇IOml溶解，再用HPLC檢測，產品中蘿卜硫素純度為60%。將上步獲得的純度為60%的蘿卜硫素浸膏適量水溶解后，采用乙酸乙酯進行萃取3次，棄去水層，收集有機層，并在40°C、真空-O. 08MPa條件下濃縮至油狀浸膏；稱取5mg的濃縮油狀物用甲醇IOmL溶解，再用HPLC檢測，即得純度大于90%的蘿卜硫素提取物。實施例2 取西蘭花種子100g，粉碎至30 60目后，加水200mL ;在35°C的溫度下水解10h，加入無水乙醇800mL，超聲浸提30min，超聲浸提頻率40kHz，功率200W ;然后采用雙層紗布過濾； 將濾液在40°C條件下真空濃縮蒸發乙醇；采用抽濾的方式過濾至清亮，將清亮后料液150mL，用DM130大孔樹脂柱層析，用質量分數為30%的乙醇400mL除去雜質，并棄去洗脫液，再用質量分數為50%的乙醇600mL洗脫大孔樹脂層析柱上的蘿卜硫素，收集洗脫液，再用氧化鋁柱層析，并收集蘿卜硫素洗脫液，再經40°C條件下真空濃縮至油狀浸膏，稱取5mg的濃縮油狀物用甲醇IOmL溶解，再用HPLC檢測，產品中蘿卜硫素純度為60%。將上步獲得60%純度蘿卜硫素浸膏適量水溶解后，采用二氯甲烷和乙醇1:1混合溶劑進行萃取3次，收集有機層，并在40°C、真空-O. 06MPa條件下濃縮至油狀浸膏，稱取 5mg的濃縮油狀物用甲醇IOmL溶解，再用HPLC檢測，即得純度大于90%的蘿卜硫素提取物。權利要求1.一種從西蘭花種子中提取高純蘿卜硫本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種從西蘭花種子中提取高純蘿卜硫素的方法，其特征包括以下步驟：⑴？用干燥的西蘭花種子為原料，粉碎后加水；在溫水中水解，得到固液混合物；⑵？往水解后的固液混合物中加入無水乙醇，超聲浸提，抽濾或雙層紗布過濾；⑶？將濾液在真空條件下濃縮蒸發乙醇；⑷？將去醇后料液用同極性大孔樹脂柱層析，用乙醇水溶液為洗脫劑進行梯度洗脫，選擇性收集含蘿卜硫素洗脫液；⑸？將獲得蘿卜硫素洗脫液，過氧化鋁干柱層析脫色,收集蘿卜硫素層析液，再經真空濃縮至油狀浸膏，即獲得純度為60％的蘿卜硫素；(6)？將上步獲得純度為60％的蘿卜硫素浸膏，加水溶解后,采用有機溶劑進行萃??；(7)？萃取后棄去水層,有機層進行真空濃縮,即得純度大于90％的蘿卜硫素提取物。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：何珺，謝述瓊，康冀川，楊佳年，
申請(專利權)人：貴州大學，
類型：發明
國別省市：
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