牛大力種苗組織培養(yǎng)快速繁殖及育苗的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種牛大力種苗組織培養(yǎng)快速繁殖及育苗的方法，其特征是通過采外殖體、無菌分化、快速增殖、壯苗培養(yǎng)，再裝袋育壯苗，采用牛大力莖段、芽苞和葉片作為外植體，消毒，配制分化培養(yǎng)基，壯苗培養(yǎng)基，用定向聚丙烯薄膜袋作為培養(yǎng)皿器，接種，培養(yǎng)。當(dāng)小苗形成的植株長至3～8厘米時，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7～14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移至裝有營養(yǎng)土的營養(yǎng)杯栽培，經(jīng)2～5個月生長得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。中苗最好為苗高15cm以上，每株苗有分叉2～8條，有3～10條根以上，須根多，葉片厚濃綠，無病蟲，無變異苗白化苗。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種珍稀食用植物油種苗繁育方法，具體地說，涉及一種牛大力種苗快速繁殖及育苗的方法。
技術(shù)介紹
牛大力屬豆科豆藤屬，直立或披散亞灌木，高I 2米。根系向下直伸，長I米許。幼枝有棱角，披白柔毛。葉互生；3出復(fù)葉；托葉2片，三角狀，長約I厘米，具疏茸毛；葉柄長2 3厘米，被長茸毛；小葉矩圓形至卵狀披針形，長4 9厘米，寬2 4厘米，先端略鈍，有時具小銳尖，全緣，基部在葉背邊緣密被茸毛，上面被稀疏的短茸毛，下面密生長茸毛；小托葉2片，線形?；▋尚裕干?，短總狀花序稠密；花梗長I I. 5厘米；花苞2裂；萼5裂，披針形，在最下面的I片最長；花冠略長于萼，粉紅色，旗瓣禿凈，圓形，基部白色，外有縱紫紋；翼瓣基部白色，有柄，前端紫色；龍骨瓣2片，基部淺白色，前部互相包著雌雄蕊；雄蕊·10，兩體，花藥黃色，圓形；雌蕊1，子房上位。莢果長8 10毫米，徑約5毫米。種子2枚，圓形。花期8 9月。果期10月。生長于深山幽谷之中，氣味甘香，性溫和，具有壯陽，養(yǎng)腎補(bǔ)虛，強(qiáng)筋活絡(luò)，平肝、潤肺之功效，主治腎虛，氣虛，腰酸腿痛、風(fēng)濕病、慢性肝炎、支氣管炎，咳嗽，肺結(jié)核等有很好的療效。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種通過組織培養(yǎng)技術(shù)可以脫除多種植物病毒，避免病毒引起的品種退化和減產(chǎn)造成的損失，使原來的優(yōu)良種性得到保持；繁殖快且量大、成苗快、種苗品質(zhì)好、移栽成活率高，品種遺傳物質(zhì)變異小，高產(chǎn)的牛大力的種苗繁殖方法。本專利技術(shù)人通過選定的牛大力芽苞和葉片作為外植體，經(jīng)消毒去掉雜質(zhì)，將芽尖組織和葉片放在分化培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌培育成小植株，將誘導(dǎo)出的小植株切割后接入新的分化培養(yǎng)基中，多次繼代采用分化培養(yǎng)，結(jié)果叢生芽數(shù)量多，生長快。再轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成袋裝苗，經(jīng)過自然光照下煉苗后出袋栽培，移栽到營養(yǎng)杯中育中苗，成活率達(dá)到98%以上。經(jīng)三年摸索篩選，由于靠本專利技術(shù)人利用了培養(yǎng)基上培養(yǎng)出壯苗，終于找到適合細(xì)胞分化，壯苗的培養(yǎng)基作為專利技術(shù)點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)了本專利技術(shù)。本專利技術(shù)的牛大力繁殖及育苗方法，包括以下技術(shù)工藝步驟一種牛大力種苗組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于通過采外殖體、無菌分化、快速增殖、壯苗培養(yǎng)，再裝袋育壯苗，采用牛大力莖段、芽苞和葉片作為外植體，消毒，配制分化培養(yǎng)基，壯苗培養(yǎng)基，用定向聚丙烯薄膜袋作為培養(yǎng)皿器，接種，培養(yǎng)，其技術(shù)工藝步驟如下(I)采外植體，選定牛大力的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采集，選取芽苞和嫩葉放清水沖洗，然后用飽和洗衣粉水清洗，再用流動的清水漂洗5 10分鐘。(2)無菌分化，把漂洗干凈的牛大力芽苞或嫩葉片作為外植體，在無菌接種室工作臺上用72 % 75 %的酒精消毒10 15秒后，用無菌水沖洗3 8次后置于O. I % O. 2 %的升萊中消毒10 30分鐘,再用無菌水漂洗6 10次,后置于10 15%的過氧化氫中消毒10 15分鐘，再用無菌水漂洗4 8次去掉外表雜物。把所消毒的芽苞、葉片放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后取下頂尖的芽尖O. 2 O. 25mm組織，用接種針接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 20天得到小植株，所述的分化培養(yǎng)基每升含椰子汁50 150ml,鹿糖15 45g,卡拉膠6 IOg,肌醇50 150mg,甘氨酸I 3mg,煙酸I 3mg, D-泛酸 丐O. I O. 5mg,批P多辛鹽酸O. 2 3. 5mg,生長素O. 09 O. 25mg，分裂素6BA0. I O. 3mg，烯腺嘌呤O. 01 O. 03mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分。(3)快速增殖，培養(yǎng)5 20天后，將誘導(dǎo)出的小植株切割成O. 3 O. 5mm后接入新的分化培養(yǎng)基中，多次繼代采用分化培養(yǎng)基，在每次轉(zhuǎn)袋過程中，不斷淘汰白化苗和污染袋苗，剪除枯黃葉片，經(jīng)5 10次轉(zhuǎn)袋培養(yǎng)后，得到的小植株再進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，(4)壯苗培養(yǎng)，將無菌分化增殖獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)45 60天得到小苗，所述的壯苗培養(yǎng)基每升含水解酪蛋白I 5g，蔗糖10 35g，卡拉膠6 10g，a-萘乙酸O. 2 5. Omg,肌醇20 120mg,鹽酸硫胺5 15mg,甘氨酸I. 5 6. Omg,煙酸O. 5 5mg,卩引哚丁酸O. I 3mg, D-泛酸I丐I 6mg,批卩多辛鹽酸O. 4 I. 5mg,生長素 O. 09 O. 25mg，蘋果汁10 30g，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。步驟(2)分化培養(yǎng)基每升含椰子汁50 100ml,鹿糖15 45g,卡拉膠8g,肌醇IOOmg,甘氨酸2mg,煙酸O. 25mg, D-泛酸I丐O. 44mg,卩比卩多辛鹽酸O. 4 I. 5mg,生長素O. 09 O.25mg,分裂素6BA0. Img,烯腺嘌呤O. 02mg,其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分。步驟(4)壯苗培養(yǎng)基每升含水解酪蛋白O. 12g，蔗糖22g，卡拉膠Sg，a_萘乙酸0.8mg,肌醇60mg,鹽酸硫胺6mg,甘氨酸3. Omg,煙酸I. 5mg,卩引哚丁酸O. 3mg, D-泛酸 丐1.5mg,吡哆辛鹽酸O. 8mg,生長素O. 12mg,蘋果汁12g，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。步驟⑵ ⑷中所用的培養(yǎng)基PH為4. 5 6. 5，培養(yǎng)溫度18 32°C，每天光照6 16小時，光照度800 2500Lx，芽尖為芽苞生長點(diǎn)O. I O. 5mm組織，葉片為頂尖葉片1/2處O. I O. 8mm組織，小植株的高度為I 3cm，小苗為苗高3 8cm，每株苗有2 8條根，無變異白化苗。步驟(2) (4)中所用的培養(yǎng)基均分裝入薄膜袋中，每袋20ml，分裝好后密封、高溫消毒10 20分鐘，取出放在無菌室降溫貯存，在無菌室的超凈工作臺上接上對應(yīng)的外植體或小植株后，用封口機(jī)把接好種的培養(yǎng)基袋封口，再放到培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)基分裝的薄膜袋，均為定向聚丙烯薄膜袋。當(dāng)小苗形成的植株長至3 8厘米時，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7 14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移至裝有營養(yǎng)土的營養(yǎng)杯栽培，經(jīng)2 5個月生長得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。中苗最好為苗高15cm以上，每株苗有分叉2 8條，有3 10條根以上，須根多，葉片厚濃綠，無病蟲，無變異苗白化苗。本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的優(yōu)點(diǎn)是國內(nèi)外沒有關(guān)于利用組培技術(shù)生產(chǎn)牛大力種苗的專利和相關(guān)報道，只有實(shí)生苗繁殖的應(yīng)用。本專利技術(shù)采用獨(dú)創(chuàng)的培養(yǎng)基，使用定向聚丙烯薄膜袋作培養(yǎng)器皿，降低成本，可以脫除多種植物病毒，避免病毒引起的品種退化和減產(chǎn)造成的損失，使原來的優(yōu)良種性得到保持；繁殖快且量大、成苗快、種苗品質(zhì)好、移栽成活率高，品種遺傳物質(zhì)變異小，高產(chǎn)。本專利技術(shù)具有操作性強(qiáng)，應(yīng)用價值高，環(huán)保，對環(huán)境無任何不良影響，具有獨(dú)創(chuàng)性。牛大力經(jīng)濟(jì)價值高，全身是寶。鮮品可煲湯，藤與根可烘干入藥，單株產(chǎn)量在2 5公斤。本方法具有繁殖快；移栽成活率高；基因不變異，能保持原來品種的優(yōu)良性狀；高產(chǎn)等特點(diǎn)。具體實(shí)施例方式本專利技術(shù)的最佳實(shí)施例是這樣的，以下實(shí)施例是對本專利技術(shù)的進(jìn)一步說明，不是對本專利技術(shù)的限制實(shí)施例I(I)采外植體選用當(dāng)年成薯野生牛大力的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采回，選取芽苞放清水沖洗，然后用洗衣粉本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種牛大力種苗組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于通過采外殖體、無菌分化、快速增殖、壯苗培養(yǎng)，再裝袋育壯苗，采用牛大力莖段、芽苞和葉片作為外植體，消毒，配制分化培養(yǎng)基，壯苗培養(yǎng)基，用定向聚丙烯薄膜袋作為培養(yǎng)皿器，接種，培養(yǎng)，其技術(shù)工藝步驟如下：(1)采外植體，選定牛大力的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采集，選取芽苞和嫩葉放清水沖洗，然后用飽和洗衣粉水清洗，再用流動的清水漂洗5～10分鐘。(2)無菌分化，把漂洗干凈的牛大力芽苞或嫩葉片作為外植體，在無菌接種室工作臺上用72％～75％的酒精消毒10～15秒后，用無菌水沖洗3～8次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒10～30分鐘，再用無菌水漂洗6～10次，后置于10～15％的過氧化氫中消毒10～15分鐘，再用無菌水漂洗4～8次去掉外表雜物。把所消毒的芽苞、葉片放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后取下頂尖的芽尖0.2～0.25mm組織，用接種針接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)5～20天得到小植株，所述的分化培養(yǎng)基每升含椰子汁50～150ml，蔗糖15～45g，卡拉膠6～10g，肌醇50～150mg，甘氨酸1～3mg，煙酸1～3mg，D？泛酸鈣0.1～0.5mg，吡哆辛鹽酸0.2～3.5mg，生長素0.09～0.25mg，分裂素6BA0.1～0.3mg，烯腺嘌呤0.01～0.03mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分。(3)快速增殖，培養(yǎng)5～20天后，將誘導(dǎo)出的小植株切割成0.3～0.5mm后接入新的分化培養(yǎng)基中，多次繼代采用分化培養(yǎng)基，在每次轉(zhuǎn)袋過程中，不斷淘汰白化苗和污染袋苗，剪除枯黃葉片，經(jīng)5～10次轉(zhuǎn)袋培養(yǎng)后，得到的小植株再進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。(4)壯苗培養(yǎng)，將無菌分化增殖獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)45～60天得到小苗，所述的壯苗培養(yǎng)基每升含水解酪蛋白1～5g，蔗糖10～35g，卡拉膠6～10g，a？萘乙酸0.2～5.0mg，肌醇20～120mg，鹽酸硫胺5～15mg，甘氨酸1.5～6.0mg，煙酸0.5～5mg，吲哚丁酸0.1～3mg，D？泛酸鈣1～6mg， 吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長素0.09～0.25mg，蘋果汁10～30g，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：馮志祥，張桂琴，黃雪娟，
申請(專利權(quán))人：馮志祥，
類型：發(fā)明
國別省市：