包含小肽的細胞培養基制造技術

提供了細胞培養基、濃縮培養基和給料、制造細胞培養基和給料的方法以及培養細胞的方法。將一種或多種小肽包括二肽添加至細胞培養基中，以提供增強的穩定性和改善的條件來培養細胞。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】包含小肽的細胞培養基背景細胞培養基提供了在受控、人工和體外環境中維持和生長細胞所必需的營養物。細胞培養基的營養配方(nutrient formulation)、pH和重量摩爾滲透壓濃度(osmolality)隨參數例如細胞類型、細胞密度和使用的培養系統的變化而變化。培養基制劑已被用于培養許多細胞類型，包括動物、植物和細菌細胞。培養的細胞具有許多用途，包括用于生理過程的研究和有用的生物學物質的產生。此類有用的產物的實例包括多肽，例如單克隆抗體、激素、生長因子、酶和其它目標多肽。此類產物具有許多商業和治療性應用，并且隨著重組DNA技術的出現，可對細胞進行工程改造以產生大量的此類產物。培養的細胞還常規地用于分離、鑒定和生長可被用作載體和/或疫苗的病毒。因此，體外培養細胞的能力不僅對于細胞生理學的研究是重要的，而且對于否則不能以具有成本效益的方法獲得的有用物質的產生是必需的。細胞培養基制劑已良好地公開于文獻中，并且許多培養基是商購可得的。在早期·細胞培養工作中，培養基制劑基于血液的化學成分和物理化學性質(例如，重量摩爾滲透壓濃度、pH 等)并且被稱為“生理溶液” Ringer, S. , J. Physiol. 3:380-393(1980) ; Waymouth,C. , In:Cellsand Tissues in Culture,第 I 卷，Academic Press, London, pp. 99-142(1965) ;ffaymouth, C. , In Vitro 6:109-127(1970)。然而，在氧/ 二氧化碳分壓以及營養物、維生素和痕量元素的濃度方面，哺乳動物身體的不同組織中的細胞暴露于不同的微環境，因此，不同細胞類型的成功體外培養通常需要使用不同的培養基制劑。細胞培養基的典型組分包括氨基酸、有機和無機鹽、維生素、礦物質、痕量金屬、糖、脂質和核酸，其類型和量可取決于給定的細胞或組織類型的具體要求而變化。谷氨酰胺通常用于細胞培養基，因為已顯示其為培養的細胞的主要能量來源。在1959年，Eagle顯示，哺乳動物細胞培養物的最佳生長所必需的谷氨酰胺的量為其它氨基酸的量的3至10倍。Eagle等人，Science 130:432-37(1959)。然而，谷氨酰胺在水溶液中和在升高的溫度下不穩定，形成焦谷氨酸鹽和氨，這對某些細胞可具有毒性。Roth等人，InVitro Cellular&Developmental Biology 24(7) :696-98 (1988)。因此，通常在即將使用時將谷氨酰胺添加至細胞培養基中。或者，為了避免有毒物質如焦谷氨酸鹽和氨的形成，可在細胞培養基中使用含谷氨酰胺的二肽(例如丙氨酰-谷氨酰胺或甘氨酰-谷氨酰胺)替代谷氨酰胺Roth等人，In Vitro Cellular&Developmental Biology24 (7) : 696-98 (1988)。還已使用谷氨酸來替代谷氨酰胺，以減少氨在細胞培養基中的積累，參見Cell Culture Technologyfor Pharmaceuticaland Cell-Based Therapies, 52, Sadettin Ozturk 和 Wei-Shou Hueds. , Taylor 和 Francis Group (2006)。其它人已提出酰化二肽例如丙氨酰谷酰胺，以使二肽在加熱滅菌條件下更穩定。例如，美國專利No. 5，534，538描述了用于腸道或胃腸外營養的N-酰基二肽，其中N-酰基二肽在加熱滅菌條件下比相應的非酰化的二肽更穩定，并且其中N-酰基有利地在其到達腎臟之前延遲了二肽的斷裂。美國專利No. 5，534，538還發現，N-酰基丙氨酰谷酰胺是用于細胞培養基的適當的谷氨酰胺來源，與相應的非酰化的二肽(丙氨酰谷酰胺)相似，其為細胞培養基的已知組分(參見上文Roth等人)。美國專利No. 5，534，538還描述，N-酰基二肽優于游離二肽，這至少部分因為N-酰基二肽在加熱滅菌條件下的增強的穩定性。因此，美國專利No. 5，534，538實際上教導，不要使用其中N-末端氨基酸具有游離氨基的二肽。本申請人已發現，某些氨基酸如酪氨酸在用以獲得最大細胞生長或蛋白質產量所期望的濃度上具有有限的溶解度。本申請人還已發現，其它氨基酸如半胱氨酸在含水細胞培養基中，特別地在濃縮的細胞培養基中是不穩定的并且易于隨時間過去發生沉淀。特別地，因為半胱氨酸具有硫基，因此其易于進行氧化還原反應，其中兩個半胱氨酸殘基通過二硫鍵連接在一起形成胱氨酸(SCH2CH(NH2)CO2H)2t5胱氨酸在水中具有低溶解度并且易于從溶液中沉淀出來。因此，一直以來無法產生耐貯存的、包含最大細胞生長和/或蛋白質產量所需濃度的酪氨酸和半胱氨酸的液體細胞培養基。本申請人還嘗試通過在含水細胞培養基中使用低于期望濃度的酪氨酸或半胱氨酸來解決該問題。這樣做時，能夠獲得可接受的含水貯存期。然而，這是在犧牲最佳細胞生長、蛋白質產生或病毒產生的情況下實現的。換句話說，與具有最佳濃度的酪氨酸和半胱氨酸的細胞培養基相比較，具有更低濃度的酪氨酸和半胱氨酸的細胞培養基支持減少的細胞生長和/或蛋白質產生。因此，目前存在對這樣的培養基、濃縮培養基或濃縮補料(feedsupplement)的需要，其包含足以支持最大細胞生長和/或蛋白質或病毒產生的量的酪氨酸和半胱氨酸，同時避免因酪氨酸的有限溶解度或半胱氨酸的有限穩定性(包括半胱氨酸隨時間過去易于從溶液中沉淀出來的傾向)引起的問題。此外，還需要以濃縮形式存在的此類補料，以便其添加不會極大地增加終細胞培養系統的體積。還存在這樣的需要當添加此類營養給料時，所得的系統的PH和重量摩爾滲透壓濃度可自動被平衡，并且培養基或濃縮的給料可以以液體或干燥形式獲得。最后，存在對這樣的單方案、濃縮補料的需要，其包含足以支持最大細胞生長和/或蛋白質產生和/或高質量的蛋白質表達的量的半胱氨酸和酪氨酸。概述本專利技術的組合物，部分涉及細胞培養基、濃縮培養基或濃縮補料，其包含支持最大細胞生長和/或蛋白質或病毒產生的濃度的半胱氨酸和酪氨酸，同時避免因它們有限的溶解度和穩定性引起的問題。在一個方面，培養基、濃縮補料或濃縮培養基可以是無血清組合物。在一個方面，組合物可包含人血清組分，如人血清白蛋白。在其它方面，人血清白蛋白可以是重組的(r-人血清白蛋白)，來源于重組來源，在一些優選的情況下，來自植物來源如稻、玉米、小麥、馬鈴薯、或來自真菌來源，或來自酵母或公知用于本領域(無異物培養(xeno-free culture))的其它等同微生物。在另一個方面，培養基、濃縮補料或濃縮培養基可以為無蛋白質的組合物。在另一個方面，培養基、濃縮補料或濃縮培養基可以為無蛋白質-水解產物的組合物，并且還可以不含蛋白質-水解產物的級分。在某些方面，培養基、濃縮補料或濃縮培養基可以為無血清、無蛋白質和無蛋白質水解產物的組合物。在優選方面，此類組合物可包含化學成分明確的、無血清、無蛋白質和無任何蛋白質水解產物或其級分的組分。在某些實施方案中，具有一種或多種小肽或一種或多種二肽的細胞培養基、濃縮培養基或細胞培養補料也不包含如下物質的一種或多種脂質、水解產物或本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：S·巴雷特，S·雅各比亞，
申請(專利權)人：生命技術公司，
類型：
國別省市：