本發明專利技術公開了一種NAT2基因多態性檢測液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對G99A位點的SEQ?IDNO.15和SEQ?ID?NO.16；針對C190T位點的SEQ?ID?NO.17和SEQ?ID?NO.18；針對T249C位點的SEQ?ID?NO.19和SEQ?ID?NO.20；針對C389T位點的SEQ?IDNO.21和SEQ?ID?NO.22；針對G498A位點的SEQ?ID?NO.23和SEQ?ID?NO.24；針對A711G位點的SEQ?ID?NO.25和SEQ?ID?NO.26；和/或針對G765A位點的SEQID?NO.27和SEQ?ID?NO.28；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發明專利技術所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種NAT2基因多態性檢測特異性引物和液相芯片。
技術介紹
N2乙酸基轉移酶2基因(N2 acetyl transferase 2 gene, NAT2)位于人類第8對染色體短臂2區2帶(8p22)，編碼區長870bp，主要編碼藥物II相代謝酶-N2乙?；D移酶。NAT2基因多態性主要存在7個位點的突變，某些位點突變將直接導致其編碼代謝酶活性改變，從而影響其對一些藥物代謝以及致癌物質的滅活或活化，因而導致一些藥物相關性疾病及癌癥的發生。目前，檢測NAT2基因多態性最常用的是聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)-限制性片段長度多態法(RFLP)，但其特異性相對直接測序法和實時熒光PCR較低，操作相對也較繁瑣；直接測序法特異性、敏感性最高，但檢測時宜選用單克隆PCR產物測序，且過程復雜，影響因素多，耗時較長，價格較昂貴，對于篩查或大樣本研究經濟上難以承受；PCR_單鏈構象多態法、反向點雜交法也有不少研究運用，但其敏感性、特異性也易受操作條件影響；熒光定量PCR具有操作簡便、結果快捷、量化等優點，但是，該技術存在樣品易污染，易發生交叉反應，假陽性率高的缺點。此外，以上方法都存在著檢測通量的局限性，每次只能檢測一種突變類型，不能滿足實際應用的需要。本專利技術目標檢測的NAT2基因突變位點，如表所示權利要求1.一種NAT2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，包括有 (A).針對不同突變位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為針對 G99A 位點的 SEQ ID NO. 15 和 SEQ ID NO. 16 ;針對 C190T 位點的 SEQ ID NO. 17和 SEQ ID NO. 18 ;針對 T249C 位點的 SEQ IDNO. 19 和 SEQ ID NO. 20 ;針對 C389T 位點的SEQ ID NO. 21 和 SEQ ID NO. 22 ;針對 G498A 位點的 SEQ ID NO. 23 和 SEQ ID NO. 24 ;針對A711G 位點的 SEQ IDNO. 25 和 SEQ ID NO. 26 ;和 / 或針對 G765A 位點的 SEQ ID NO. 27 和SEQ IDNO. 28 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO. I SEQ ID NO. 14 ； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 29 SEQID NO. 42，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).用于擴增出需要檢測的、具有相應突變位點的目標序列的引物。2.根據權利要求I所述的NAT2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為SEQ ID NO. 43 和 SEQ ID NO. 44。3.根據權利要求I所述的NAT2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為針對G99A位點的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQID NO. 16組成的序列；針對C190T位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 18組成的序列；針對T249C位點的由SEQ ID NO. 5和SEQID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對C389T位點的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 22組成的序列；針對G498A位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQID NO. 24組成的序列；針對A711G位點的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 25組成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ ID NO. 26組成的序列；和/或針對G765A位點的由SEQ IDNO. 13和SEQ ID NO. 27組成的序列及由SEQ ID NO. 14和SEQ ID NO. 28組成的序列。4.根據權利要求I所述的NAT2基因多態性檢測液相芯片，其特征是， (A).所述ASPE引物為:針對G99A位點的由SEQID NO. I和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 16組成的序列；針對C190T位點的由SEQ ID NO. 3和SEQID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 18組成的序列；針對T249C位點的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQID NO. 6和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對C389T位點的由SEQ ID NO. 7和SEQID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQID NO. 22組成的序列；針對G498A位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 24組成的序列；針對A711G位點的由SEQ ID NO. 11和SEQID NO. 25組成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ ID NO. 26組成的序列；和針對G765A位點的由 SEQ ID NO. 13 和 SEQ ID NO. 27 組成的序列及由 SEQ ID NO. 14 和 SEQ IDN0. 28 組成的序列； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 29 SEQID NO. 42，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).所述擴增引物為SEQ ID NO. 43 和 SEQ ID NO. 44。5.根據權利要求1-4任一項所述的NAT2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5-10個T。6.一種用于NAT2基因多態性檢測的特異性引物，其特征是，所述特異性引物序列為針對 G99A 位點的 SEQ ID NO. 15 和 SEQ ID NO. 16 ;針對 C190T 位點的 SEQ ID NO. 17 和 SEQID NO. 18 ;針對 T249C 位點的 SEQ ID NO. 19 和 SEQ IDNO. 20 ;針對 C389T 位點的 SEQ IDNO. 21 和 SEQ ID NO. 22 ;針對 G498A 位點的 SEQ ID NO. 23 和 SEQ ID NO. 24 ;針對 A711G位點的 SEQ ID NO. 25 和 SEQ IDNO. 26本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種NAT2基因多態性檢測液相芯片，其特征是，包括有：(A).針對不同突變位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物：每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為：針對G99A位點的SEQ？ID？NO.15和SEQ？ID？NO.16；針對C190T位點的SEQ？ID？NO.17和SEQ？ID？NO.18；針對T249C位點的SEQ？IDNO.19和SEQ？ID？NO.20；針對C389T位點的SEQ？ID？NO.21和SEQ？ID？NO.22；針對G498A位點的SEQ？ID？NO.23和SEQ？ID？NO.24；針對A711G位點的SEQ？IDNO.25和SEQ？ID？NO.26；和/或針對G765A位點的SEQ？ID？NO.27和SEQ？IDNO.28；所述tag序列選自SEQ？ID？NO.1～SEQ？ID？NO.14；(B).有anti？tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti？tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti？tag序列選自SEQ？ID？NO.29～SEQID？NO.42，且所述anti？tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有相應突變位點的目標序列的引物。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：許嘉森，吳詩揚，
申請(專利權)人：廣州益善生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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