一種用于檢測NGAL膠體金試紙條制造技術

本實用新型專利技術公開了一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，包括塑料底襯、塑料底襯上面的中間部分粘有硝酸纖維素膜、連接于硝酸纖維素膜一端的金標墊、連接于硝酸纖維素膜另一端的吸水墊、連接于所述金標墊的樣品墊，所述的硝酸纖維素膜中間部位檢測線包被有NGAL抗體，所述的金標墊上涂布有金標記的NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。本實用新型專利技術可對急性腎功能衰竭進行早期預測，快速，操作簡單，適合床邊快速診斷。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術屬于臨床醫學診斷領域，具體涉及一種用于檢測中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)膠體金試紙條。
技術介紹
繼發于腎小管細胞損傷(包括缺血性損傷或腎毒性損傷)的急性腎功能衰竭(AFR)，盡管在支持治療法中取得了重大的進展，但是仍然是臨床醫學和腎病學中普遍而潛在破壞性的難題，該疾病具有持續的死亡率和高發病率的特點。研究表明，中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)作為Iipocalin家族的一個新的成員，是診斷急性腎損傷的重要標志物之一。美國專利2004/0219603描述了中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)作為檢測腎小管細胞損傷早期發作的尿生物標記物。近年美國臨床化學協會(AACC)年度會議的研究結果發表得知檢測尿中中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白可能有助于臨床醫生檢測心臟移植患者環孢霉素誘導的毒性，以及調節環孢霉素劑量以預防其對腎臟造成的不可逆傷害。Kim RW等表明心臟手術后尿及血中的NGAL在術后6小時達到最高水平，且尿NGAL及血NGAL水平與術后急性腎損傷AKI及不良預后相關。目前，檢測NGAL的方法主要有免疫吸附劑測定法(ELISA)，中國專利CN101566633涉及膠乳增強免疫比濁法、夾心法ELISA、競爭法ELISA來測定NGAL的水平。然而，該方法對檢測設備有一定要求，操作繁瑣，檢測時間長，不能對急性腎功能衰竭進行快速早期預測，不能用于床邊快速診斷。
技術實現思路
為了解決上述現有技術存在的問題，本技術提供了一種快速靈敏、定量檢測NGAL膠體金試紙條。一方面，該試紙條利用待測抗原與抗體反應在檢測線處形成顏色的深淺與樣本中的NGAL濃度成正比，結合免疫分析儀檢測顏色的深淺實現定量檢測；另一方面，利用該試紙條檢測NGAL快速得到檢測結果，可對急性腎功能衰竭進行快速早期預測，有利于臨床應用的推廣。為解決該問題，本技術采用以下技術方案得以實現一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，包括塑料底襯、塑料底襯上面的中間部分粘有硝酸纖維素膜、連接于硝酸纖維素膜一端的金標墊、連接于硝酸纖維素膜另一端的吸水墊、連接于所述金標墊的樣品墊，硝酸纖維素膜中間部位檢測線包被有NGAL抗體，所述的金標墊上涂布有金標記的NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。所述硝酸纖維素膜中間部位包被NGAL抗體的檢測線與包被兔抗人IgG抗體的控制線平行。所述的檢測線包被抗體的是一種針對NGAL抗原的特異性NGAL單克隆抗體。所述的膠體金標記抗體為能夠與待測NGAL抗原特異性結合的另一種NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。所述金標墊與樣品墊的材料為聚酯膜或玻璃纖維膜。所述的膠體金標記抗體與檢測線包被抗體具有不同的表位，通過雙抗夾心法對中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白進行檢測。本技術涉及一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，該試紙條可以解決現階段主要運用免疫吸附劑測定法(ELISA)對NGAL進行檢測，存在對檢測設備要求高及檢測時間長的難題。通過本試紙條利用待測抗原與抗體反應在檢測線處形成顏色的深淺與樣本中的NGAL濃度成正比，結合免疫分析儀檢測顏色的深淺實現定量檢測。利用該試紙條檢測NGAL快速得到檢測結果，可對急性腎功能衰竭進行快速早期預測，有利于臨床應用的推廣。附圖說明圖I為一種用于檢測NGAL膠體金試紙條結構示意圖。圖2為一種用于檢測NGAL膠體金試紙條檢測陰性模式圖。圖3為一種用于檢測NGAL膠體金試紙條檢測陽性模式圖。其中，I.塑料底襯；2.硝酸纖維素膜；3.金標墊；4.樣品墊；5.吸水墊；6.控制線；7.檢測線；8.樣品槽；A.層析方向。具體實施方式下面具體結合附圖和具體實施方式對本技術做詳細的說明。如圖I所示，一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，包括塑料底襯I、塑料底襯I上面的中間部分粘有硝酸纖維素膜2、連接于硝酸纖維素膜2 —端的金標墊3、連接于硝酸纖維素膜2另一端的吸水墊5、連接于所述金標墊3的樣品墊4。所述的硝酸纖維素膜2中間部位檢測線7包被有NGAL抗體，所述的金標墊3上涂布有金標記的NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。所述的硝酸纖維素膜2上有一條檢測線7和一條控制線6。所述檢測線7是將NGAL單克隆抗體使用20mM的PBS (PH7. 2)稀釋到2mg/ml的濃度，O. 8ul/cm在硝酸纖維素膜上劃線，然后在干燥箱內20°C干燥12小時得到。所述控制線6是將兔抗鼠IgG抗體按4mg/ml的濃度，O. 8ul/cm在硝酸纖維素膜上劃線，該線與檢測線平行，然后在干燥箱內20°C干燥12小時得到。所述金標墊3的制備將制作金標墊的材料聚酯膜放入緩沖液(50mmol/L的PBS、O. 5% 的酪蛋白、O. 5% 的 PVP、1% 的蔗糖、O. 02% 的 Triton、50mmol/L 的 NaCl)中浸泡 2 4小時，取出后，25°C干燥8h，然后將膠體金一NGAL抗體復合物用噴金儀均勻的鋪在經過預處理的金標墊上，噴量最好控制在I. 0ul/cm*3道，25°C干燥4h，密封干燥保存。所述的樣品墊4是將樣品墊用PBS緩沖液(100mmol/L的PBS、1%的酪蛋白、1%的PVP,1%的蔗糖、O. 1%的Triton、IOOmmoI/L的NaCl)浸泡2 4h，取出后25°C干燥8h備用。將上述樣品墊4、吸水紙5、硝酸纖維素膜2、金標墊3粘貼在塑料底襯I上，再用斬切機切成一定寬度的試紙條。使用方法采集樣本(尿液、全血、血清、血漿)放入干凈的樣杯中，將樣品點在試紙條樣品墊處，顯色區位兩條紅色線，則檢測結果為陽性(如圖3所示);僅控制區出現紅色帶時，結果為陰性(如圖2所示)；控制區未出現紅色線，表明試紙無效。 采集樣本(尿液、全血、血清、血漿)放入干凈的樣杯中，將樣品點在試紙條樣品墊處，反應5 10分鐘后將試紙條放入FIA8000免疫定量分析儀，讀取顏色信號，進行定量測定。權利要求1.一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，包括塑料底襯(I)、塑料底襯(I)上面的中間部分粘有硝酸纖維素膜(2)、連接于硝酸纖維素膜(2)—端的金標墊(3)、連接于硝酸纖維素膜(2)另一端的吸水墊(5)、連接于所述金標墊(3)的樣品墊(4)，其特征在于所述的硝酸纖維素膜(2 )中間部位檢測線(7 )包被有NGAL抗體，所述的金標墊(3 )上涂布有金標記的NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。2.根據權利要求I所述一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，其特征在于所述硝酸纖維素膜(2)中間部位包被NGAL抗體的檢測線(7)與包被兔抗人IgG抗體的控制線(6)平行。專利摘要本技術公開了一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，包括塑料底襯、塑料底襯上面的中間部分粘有硝酸纖維素膜、連接于硝酸纖維素膜一端的金標墊、連接于硝酸纖維素膜另一端的吸水墊、連接于所述金標墊的樣品墊，所述的硝酸纖維素膜中間部位檢測線包被有NGAL抗體，所述的金標墊上涂布有金標記的NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。本技術可對急性腎功能衰竭進行早期預測，快速，操作簡單，適合床邊快速診斷。文檔編號G01N33/577GK202676704SQ20122032358公開日2013年1月16日 申請日期2012年7月6日 優先權日2012年7月6日專利技術者蘇恩本, 王勇, 黃力本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于檢測NGAL膠體金試紙條，包括塑料底襯（1）、塑料底襯（1）上面的中間部分粘有硝酸纖維素膜（2）、連接于硝酸纖維素膜（2）一端的金標墊（3）、連接于硝酸纖維素膜（2）另一端的吸水墊（5）、連接于所述金標墊（3）的樣品墊（4），其特征在于所述的硝酸纖維素膜（2）中間部位檢測線（7）包被有NGAL抗體，所述的金標墊（3）上涂布有金標記的NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：蘇恩本，王勇，黃力，陳偉，
申請(專利權)人：南京基蛋生物科技有限公司，
類型：實用新型
國別省市：