本發明專利技術是從枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制劑，其提取方法為：枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣經甲醇超聲提取3次，合并提取液，減壓干燥得甲醇總提取物，將甲醇總提取物加水溶解后，分別用等體積的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，減壓回收溶劑，得正己烷提取物、乙酸乙酯提取物；剩下的水層經大孔樹脂柱處理，甲醇洗脫，得甲醇洗脫物、水洗脫物，采取α-葡萄糖苷酶活性體系追蹤，發現正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脫物均表現出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性，將上述三種提取物經硅膠柱色譜，ODS柱色譜以及高效液相制備色譜分離得到14個化合物。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種藥物的提取分離方法及應用，特別是一種從枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的方法及其應用。
技術介紹
α -葡萄糖苷酶(a -glucosidase)是一類能夠從含有α -葡萄糖苷鍵底物的非還原端催化水解α-葡萄糖基的酶的總稱，其廣泛分布于生物體中，參與食物消化、糖蛋白的生物合成，多糖及糖復合物的合成與分解代謝等許多生物代謝過程。抑制α-葡萄糖苷酶的活性可調節細胞表面的復合糖質，而糖尿病、肥胖癥、高血脂、炎癥、癌變、免疫反應和病毒感染等都和細胞表面的復合糖質有密切關系，因此，開發出適當的α -葡萄糖苷酶抑制 劑類藥物，可以治療很多疾病。枸杞(Lycium)是我國傳統的中草藥，首載于《神農本草經》，之后歷代本草對其都有詳盡的記載。果實入藥稱枸杞子，味甘，性平。有滋補肝腎，益精明目功效。主治肝腎陰虛、頭暈目眩、腰膝酸痛等證。現代免疫學和臨床醫學多項試驗表明枸杞果實及枸杞多糖可有效提高機體免疫調節功能，治療糖尿病及其并發癥，具有抗突變、抗腫瘤、抗疲勞、延緩衰老、明目養顏保肝降血糖等功效。而對枸杞籽的研究不多，一般主要用于提取具有醫療保健作用的枸杞油，提取后的殘渣則視為廢物，但枸杞籽和果是包含在一起的，且籽約占干果的四分之一重量，為了開發利用枸杞籽及其提取枸杞油后廢棄的殘渣，我們對其進行了化學成分及生物活性的研究。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種從枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的制備方法及其應用。本專利技術的目的按照下述方案實現從枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣中提取α -葡萄糖苷酶活性抑制劑的方法，其步驟為枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣經甲醇超聲提取3次，合并提取液，減壓干燥得甲醇總提取物，將甲醇總提取物加水溶解后，分別用等體積的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，減壓回收溶劑，得正己烷提取物、乙酸乙酯提取物；剩下的水層經大孔樹脂柱處理，甲醇洗脫，得甲醇洗脫物、水洗脫物，采取α-葡萄糖苷酶活性體系追蹤，發現正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脫物均表現出一定的α -葡萄糖苷酶抑制活性，將上述三種提取物經硅膠柱色譜，ODS柱色譜以及高效液相制備色譜分離得到14個化合物，結構和名稱見附圖Io所述抑制劑的用途，是將其用作臨床治療II型糖尿病治療的首選藥和I型糖尿病的胰島素治療的輔助藥物；所述抑制劑的用途，是將其用作預防艾滋病的輔助藥物；所述抑制劑的用途，是將其用作阻止腫瘤血管生長的抗腫瘤藥物。α -葡萄糖苷酶抑制活性的測定本專利技術以4-硝基酚-2-D-吡喃葡萄糖苷(縮寫PNPG)為反應底物，具體的反應體系為25 μ L PNPG，加入25 μ L各種濃度的樣品溶液后，加入25 μ L α-葡萄糖苷酶，再加Λ 175 μ L磷酸鹽緩沖液，在混合器上混合10分鐘后。在37°C反應15分鐘，加入IM Na2CO350 μ L終止反應，在405nm波長處測定吸收值。通過不加樣品測定樣品空白，不加α -葡萄糖苷酶測定陰性對照。樣品的抑制率通 過以下公式計算抑制率) = (0DNegative control-0DB1ank) (0Dsampie ODganlP^e blank) I ^^Negative controlIank^附圖說明附圖I是本專利技術從枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣中提取得到的14個化合物的名稱及結構示意圖。附圖2是本專利技術枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣提取工藝流程圖，圖中，LB代表枸杞；M為甲醇；N為乙腈汀為O. 06%三氟乙酸；HAc為3%的醋酸；例如12% NT是12%的乙腈溶液(包含O. 06%三氟乙酸);IC50為半數致死率；HPLC為制備高效液相色譜法。單體化合物的IC50 (半數致死率)單位Mm具體實施例方式下面通過具體實施例對本專利技術進行描述。但本專利技術的范圍并不僅限于此。I、提取與分離枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣各I. OOkg經甲醇超聲提取3次，合并提取液，減壓干燥得甲醇總提取物8. 97g，該提取物具有抗α-葡萄糖苷酶活性，IC50為2. 33mg/mL。將甲醇總提取物加水溶解后，分別用等體積的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，減壓回收溶劑，得正己烷提取物I. 90g、乙酸乙酯提取物I. 30g。剩下的水層經大孔樹脂柱處理，甲醇洗脫，得甲醇洗脫物0.52g、水洗脫物4.61g。采取α-葡萄糖苷酶活性體系追蹤，發現正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脫物均表現出一定的α -葡萄糖苷酶抑制活性，IC50分別為2. llmg/mL, I. 57mg/mL, I. 89mg/mL。因此將上述三部分經硅膠柱色譜，ODS柱色譜以及高效液相制備色譜等方法，分離得到14個化合物，其分離流程圖如附圖2所示。2、14種化合物化學成分的結構鑒定化合物I :白色固體(甲醇)，在254nm下有暗斑，分子式為C17H17NO3。氫譜的低場區給出兩組AA' BB'偶合系統的芳香質子信號δ7. 39(1H，d，J=8.6Hz，H-2，6)，6.72(lH，d，J=8.6Hz，H-3，5)和 5 7. 05(1H, d,J=8. 6Hz,H-2/，6' ),6. 75(1H, d,J=8. 6Hz,H-3'，5')，推測該化合物中應有兩個1，4 二取代的苯基片段；一組反式雙鍵質子信號δ 7. 44 (1Η, d，J=15. 7Ηζ, Η_7)，6·38(1Η，d，J=15. 7，Hz, H_8);高場區給出一組 A2M2 偶合系統的質子信號 δ3. 46(2H，t，J=7. 2Hz，H-8' ),2. 75 (2H, t, J=7. 2Hz, W~T )。碳譜給出17個碳信號，其中包括I個羰基碳信號δ 169. 3 (C=O)，兩個孤立的連氧芳香碳信號δ 160.5 (C-4)，157.0 (C-f );兩個反式烯碳信號 δ 141. 8 (C-7)，118. 6 (C-8);—個連氮碳信號S42.6(C-8');進一步說明該化合物為對羥基桂皮酸與對羥基苯乙胺酰化脫水而成的酰胺。根據以上數據將該化合物鑒定為N-反式-香豆酰酪胺(N-(p-trans-coumaroyl)tyramine)化合物2 :白色固體(甲醇)，在254nm下有暗斑，分子式為C17H17NO3，氫譜的低場區給出兩組AA, BB'偶合系統的芳香質子信號δ 7. 36 (1Η, d, J=8. 6Hz, H-2,6), 6. 69 (1H, d,J=8. 6Hz，H-3，5)和 δ 7. 01(lH，d，J=8. 6Hz，H-2'，6' ) ,6. 72(lH,d, J=8. 6Hz,H-3/ ,5')，推測該化合物中應有兩個1，4 二取代的苯基片段；一組順式雙鍵質子信號δ6.61(1Η，d，J=12. 5Hz, H-7)，5· 79 (1H，d，J=12. 5，Hz, H_8);高場區給出一組A2M2偶合系統的質子信號δ 3. 39 (2H，t，J=8. IHz，H-8' ),2. 69(2H, t, J=8. 1Ηζ,Η-7/ )。化合物 2 與化合物 I 的氫譜和碳譜數據很相似，差別在于化合物2的雙鍵為順式雙鍵。通過與化合物I比較，將該化合物鑒定為N-順式-香豆酰酪胺(N-(p-cis-coumaroyl本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種從枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣中提取α？葡萄糖苷酶活性抑制劑的方法，其提取步驟為：枸杞籽及其提取枸杞油后的殘渣經甲醇超聲提取3次，合并提取液，減壓干燥得甲醇總提取物，將甲醇總提取物加水溶解后，分別用等體積的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，減壓回收溶劑，得正己烷提取物、乙酸乙酯提取物；剩下的水層經大孔樹脂柱處理，甲醇洗脫，得甲醇洗脫物、水洗脫物，采取α？葡萄糖苷酶活性體系追蹤，發現正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脫物均表現出一定的α？葡萄糖苷酶抑制活性，將上述三種提取物經硅膠柱色譜，ODS柱色譜以及高效液相制備色譜分離得到14個化合物，分別為N？反式？香豆酰酪胺(N？(p？trans？coumaroyl)tyramine)(1)、N？順式？香豆酰酪胺(N？(p？cis？coumaroyl)tyramine)(2)、N？反式？對羥基苯乙基阿魏酰胺(N？p？trans？hydroxyphenethyl？ferolamine)(3)、大麻酰胺己(cannabisin？F)(4)、大海米酰胺(grossamide)(5)、芥子醛(sinapaldehyde)(6)、阿魏醛(ferulaldehyde)(7)、對羥基苯甲醛(p？hydroxy？benzaldehyde)(8)、香草酸(vanillic？acid)(9)、對香豆酸(trans？p？hydroxycinnamic？acid)(10)、3？羥基？1？(4？羥基？3？甲氧基苯基)丙？1？酮(3？hydroxy？1？(4？hydroxy？3？methoxyphenyl)propan？1？one)(11)、2，3？二羥基？1？(4？羥基？3？甲氧基苯基)丙？1？酮(2，3？dihydroxy？1？(4？hydroxy？3？methoxyphenyl)propan？1？one)(12)、東莨菪素(scopoletine)(13)，東莨菪苷(scopoloside)(14)。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：李巍，王英華，小池一男，付紅偉，謝鵬，
申請(專利權)人：寧夏回族自治區藥品檢驗所，李巍，
類型：發明
國別省市：
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