本發明專利技術公開了一種血斑標本采集和處理方法及其采集卡干血斑DNA提取方法。所述血斑標本采集和處理方法，包括以下步驟：（1）采血；（2）采集卡血斑處理；（3）采集卡干血斑的保存；（4）采集卡干血斑的遞送。本發明專利技術的血斑標本可在常溫保存，耐運輸，方便送檢，可代替抗凝全血作為基因診斷的DNA提取標本。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物
，具體是一種血斑標本采集和處理方法及其采集卡干血斑DNA提取方法。
技術介紹
目前，用于地中海貧血基因診斷的DNA是從抗凝全血中提取的。該方法用檸檬酸鈉或EDTA抗凝管保存靜脈血，需在_20°C冰箱中低溫保存，不耐運輸，送檢不方便。因些，急需一種方便運輸的樣本采集方法和高提取率的DNA提取方法
技術實現思路
本專利技術的目的是為了解決上述問題，提供一種血斑標本采集和處理方法及其采集卡干血斑DNA提取方法。本專利技術是通過以下技術方案實現的 一種血斑標本采集和處理方法，包括以下步驟 (1)米血 Φ ·嬰兒采血 ()用熱毛巾溫浴采血部位不超過41°C，3 5分鐘； (i i)酒精消毒，用無菌紗布墊擦干； (iii)針刺，無菌紗布墊擦去第一滴血； (Iv )用血樣標本采集卡蘸取單個血滴，讓血滴充分浸潤采血圈，形成血斑；至少采集3個米血圈； 上述嬰兒米血，6周 4月或小于5kg的嬰兒米用腳后跟米血法；4 10月或5 IOkg的嬰兒采用腳大拇指采血；大于10月或大于IOkg的嬰兒采用手指采血；②·采用靜脈采血，用檸檬酸鈉或EDTA抗凝管靜脈血，采集的抗凝全血用移液器移取75 80ul全血，對準血樣標本采集卡采血圈中心緩慢將血液滴加在采集卡上，形成血斑，避免氣泡產生；至少采集3個血圈； 上述靜脈采血用于嬰兒之外的人群； (2)采集卡血斑處理 血樣采集完畢后，將制成的采集卡在干燥桌面放置3 4小時風干，形成干血斑，不要放在太陽下晾曬或用任何人工方法(如烘干機)加速干燥；(3)采集卡干血斑的保存 采集卡風干后，將每張采集卡分裝入封口袋中，并在封口袋中放入干燥劑，輕輕將封口袋的空氣擠壓出去在封口，遵循一袋一卡的原則，以避免交叉污染； (4)采集卡干血斑的遞送 準確填寫樣本信息卡后，將采集卡和信息卡一同放入大信封，采用常溫運輸。上述采集卡干血斑DNA提取方法，包括以下步驟 (1)將采集卡上的2個或以上血斑用打孔器打孔3*3mm(或將圓形的血斑剪下后，剪為約3*3_的樣品)，置于I. 5ml離心管中； (2)加入300 400ul的TissueLysis Buffer,加入20ul蛋白酶K，震蕩混勻； (3)56°C溫浴lh，期間顛倒混勻3 5次； (4)取200ul上清液轉入新的I.5ml離心管中，加入200ul的溶液L，70°C溫浴IOmin,期間顛倒2 3次； (5)加入200ul4°C的無水乙醇，室溫放置5min ； (6)將液體轉入帶硅膠柱的2ml離心管中，IOOOOrpm離心lmin，倒掉離心管的收集管中的廢液，將硅膠柱放入收集管中； (7)在硅膠柱中加入500ul溶液Wl，10000rpm離心lmin，倒掉收集管中的廢液，將硅膠柱放入收集管中； (8)在娃膠柱中加入500ul溶液W2,IOOOOrpm離心lmin,倒掉收集管中的廢液； (9)重復步聚8； (10)將硅膠柱放入收集管中，12000rpm空管離心3min，倒掉收集管中的廢液； (11)將硅膠柱放入新的I.5ml離心管中，開蓋靜置I 2min，往硅膠柱中心加入60ul的TE洗脫液，靜置2 5min, 12000rpm離心2min,棄柱得DNA ； 所述溶液L為含有10% GuSCN、10% Tris的水溶液，溶液Wl為含有10%GuSCN、P/oEDTA、25%無水乙醇的水溶液，溶液W2為含有75%無水乙醇的水溶液，TE洗脫液為含有l%Tris、1%EDTA的水溶液，以上溶液除無水乙醇是體積濃度外，其他的皆為質量百分比濃度。本專利技術采用過柱法的提取DNA，操作簡單，快速省時，獲得的DNA純度高。血斑標本可在常溫保存，耐運輸，方便送檢，可代替抗凝全血作為基因診斷的DNA提取標本。附圖說明圖I為本專利技術所采用的血樣標本采集卡。圖2為采集卡干血斑。具體實施例方式以下通過實施例對本專利技術進行詳細的說明。實施例 一、對22個成年人進行本專利技術的血斑標本采集和處理 I.靜脈采血用檸檬酸鈉抗凝管靜脈血，采集的抗凝全血用移液器移取80ul全血，對準如圖I所示的血樣標本采集卡采血圈中心緩慢將血液滴加在采集卡上，形成血斑，避免氣泡產生；采集3個血圈；2.采集卡血斑處理 血樣采集完畢后，將制成的采集卡在干燥桌面放置4小時風干，形成如圖2所示的干血斑； 3.采集卡干血斑的保存 采集卡風干后，將每張采集卡分裝入封口袋中，并在封口袋中放入干燥劑，輕輕將封口袋的空氣擠壓出去在封口，遵循一袋一卡的原則，以避免交叉污染； 4.采集卡干血斑的遞送 準確填寫樣本信息卡后，將采集卡和信息卡一同放入大信封，采用常溫運輸。 上述采集卡干血斑DNA提取 1.將采集卡上的2個圓形的血斑剪下后，剪為3*3mm的樣品，置于I. 5ml離心管中(每處理完一個樣本后，剪刀均需用75%乙醇擦拭，晾干后在酒精燈上燒熱)； 2.加入300ul的Tissue Lysis Buffer,加入20ul蛋白酶K,震蕩混勻； 3.56°C溫浴lh，期間顛倒混勻4次； 4.取200ul上清液轉入新的I.5ml離心管中，加入200ul的溶液L，70°C溫浴lOmin，期間顛倒3次； 5.加入200ul4°C的無水乙醇，室溫放置5min ； 6.將液體轉入帶硅膠柱的2ml離心管中，IOOOOrpm離心lmin，倒掉離心管的收集管中的廢液，將硅膠柱放入收集管中； 7.在硅膠柱中加入500ul溶液Wl (使用前先檢查是否加入無水乙醇)，IOOOOrpm離心lmin，倒掉收集管中的廢液，將硅膠柱放入收集管中； 8.在硅膠柱中加入500ul溶液W2 (使用前先檢查是否加入無水乙醇)，IOOOOrpm離心lmin，倒掉收集管中的廢液； 9.重復步聚8； 10.將硅膠柱放入收集管中，12000rpm空管離心3min，倒掉收集管中的廢液； 11.將硅膠柱放入新的I.5ml離心管中，開蓋靜置2min，往硅膠柱中心加入60ul的TE洗脫液(55°C預熱)，靜置5min，12000rpm離心2min，棄柱得血斑DNA。二、對上述22個成年人進行傳統的抗凝全血DNA采集和處理 使用傳統檢測手段對同樣的22個成年人進行抗凝全血DNA的采集和處理，得到抗凝全血 DNA。三、樣品檢測 將上述提取的血斑DNA和抗凝全血DNA采用潮州凱普生物化學有限公司生產的α -和β-地中海貧血基因檢測試劑盒進行地貧基因檢測。22例抗凝全血DNA和血斑DNA的地貧基因檢測結果如下權利要求1.一種血斑標本采集和處理方法，包括以下步驟 (1)米血 X .嬰兒采血 G )用熱毛巾溫浴采血部位不超過41°C，3 5分鐘； Gi)酒精消毒，用無菌紗布墊擦干； Gii)針刺,無菌紗布墊擦去第一滴血； (IV )用血樣標本采集卡蘸取單個血滴，讓血滴充分浸潤采血圈，形成血斑；至少采集3個米血圈； 上述嬰兒米血，6周 4月或小于5kg的嬰兒米用腳后跟米血法；4 10月或5 IOkg的嬰兒采用腳大拇指采血；大于10月或大于IOkg的嬰兒采用手指采血； I ·采用靜脈采血，用檸檬酸鈉或EDTA抗凝管靜脈血，采集的抗凝全血用移液器移取75 80ul全本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種血斑標本采集和處理方法，包括以下步驟：（1）采血.？嬰兒采血（）用熱毛巾溫浴采血部位：不超過41℃，3～5分鐘；（）酒精消毒，用無菌紗布墊擦干；（）針刺，無菌紗布墊擦去第一滴血；（）用血樣標本采集卡蘸取單個血滴，讓血滴充分浸潤采血圈，形成血斑；至少采集3個采血圈；上述嬰兒采血，6周～4月或小于5kg的嬰兒采用腳后跟采血法；？4～10月或5～10kg的嬰兒采用腳大拇指采血；大于10月或大于10kg的嬰兒采用手指采血；.？采用靜脈采血，用檸檬酸鈉或EDTA抗凝管靜脈血，采集的抗凝全血用移液器移取75～80ul全血，對準血樣標本采集卡采血圈中心緩慢將血液滴加在采集卡上，形成血斑，避免氣泡產生；至少采集3個血圈；上述靜脈采血用于嬰兒之外的人群；（2）采集卡血斑處理血樣采集完畢后，將制成的采集卡在干燥桌面放置3～4小時風干，形成干血斑；（3）采集卡干血斑的保存采集卡風干后，將每張采集卡分裝入封口袋中，并在封口袋中放入干燥劑，輕輕將封口袋的空氣擠壓出去在封口，遵循一袋一卡的原則，以避免交叉污染；？（4）采集卡干血斑的遞送準確填寫樣本信息卡后，將采集卡和信息卡一同放入大信封，采用常溫運輸。408010dest_path_image001.jpg,2012103642947100001dest_path_image002.jpg,143885dest_path_image003.jpg,2012103642947100001dest_path_image004.jpg,936261dest_path_image005.jpg,2012103642947100001dest_path_image006.jpg...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：蘇彬峰，邱美蘭，盧敏，
申請(專利權)人：廣東凱普生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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