本發明專利技術涉及人黑色素瘤抗原MAGE-A3蛋白B細胞表位重組蛋白的制備及應用。本發明專利技術公開了一種以全長的MAGE-A3蛋白為基礎篩選獲得的3個含B細胞表位的多肽。本發明專利技術還公開了所述B細胞表位多肽的編碼氨基酸和核苷酸序列。本發明專利技術還公開了所述B細胞表位多肽在預防、治療和診斷MAGE-A3表達陽性腫瘤中的用途。本發明專利技術所述的MAGE-A3蛋白B細胞表位重組蛋白具有很強的免疫原性和抗原性，應用前景良好。
【技術實現步驟摘要】
人黑色素瘤抗原MAGE-A3B細胞表位及其應用
本專利技術屬于生物制藥及診斷領域，更具體地，本專利技術涉及來自于人黑色素瘤抗原MAGE-A3蛋白上的三個B細胞表位及其編碼核酸，其制備方法及其在預防、治療和診斷MAGE-A3表達陽性腫瘤中的應用。
技術介紹
人黑色素瘤抗原(melanomaantigengenes，MAGE)基因首先在人黑色素瘤細胞系中發現，是一個大家族包括A、B、C、D、E和F六個亞家族。其中，MAGE-A3編碼的腫瘤抗原是一分子量為48KDa的胞漿蛋白，由314個氨基酸殘基組成。MAGE-A3基因不僅表達于以黑色素瘤為主的惡性腫瘤組織中，還以較大比例表達于多種組織類型的各種腫瘤，如肺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、肝細胞癌、骨肉瘤、白血病、膀胱癌、腦瘤和卵巢腫瘤等，尤其消化道腫瘤如胃癌、食道癌、結腸直腸癌可呈高表達(參見TaharaK，MoriM，SadanagaN，SakamotoY，KitanoS，MakuuchiM.ExpressionoftheMAGEgenefamilyinhumanhepatocellularcarcinoma.Cancer，1999，85(6)：1234-1240；FischerC，GudatF，StulzP，NoppenC，SchaeferC，ZajacP，TrutmannM，KocherT，ZuberM，HarderF，HebererM，SpagnoliGC.HighexpressionofMAGE-3proteininsquamouscelllungcarcinoma.IntJCancer1997，71(6)：1119-1121；InoueH，MoriM，HondaM，LiJ，ShibutaK，MimoriK，UeoH，AkiyoshiT.Theexpressionoftumor-rejectionantigen″MAGE″genesinhumangastriccarcinoma.Gastroenterology.1995；109(5)：1522-5.)。MAGE-A3抗原在除睪丸和胎盤組織外的正常組織細胞不表達，但由于睪丸和胎盤組織的固有生理屏障可以避免由MAGE-A3被識別產生的自身免疫損傷，因此，MAGE-A3為腫瘤特異性的腫瘤共同抗原。同時也證明了其具有良好的免疫原性，因而認為MAGE-A3是腫瘤特異性免疫診斷和治療的理想靶抗原。(參見VandenEynde，B.J.，andP.vanderBruggen.Tcelldefinedtumorantigens.Curr.Opin.Immunol.1997，9：684-693；Marturano，J.，R.Longhi，V.Russo，andM.P.Protti.EndosomalproteasesinfluencetherepertoireofMAGE-A3epitopesrecognizedinvivobyCD4Tcells.CancerRes.2008，68：1555-1562；Manici，S.，T.Sturniolo，M.A.Imro，J.Hammer，F.Sinigaglia，C.Noppen，G.Spagnoli，B.Mazzi，M.Bellone，P.Dellabona，andM.P.Protti.MelanomacellspresentaMAGE-3epitopetoCD4cytotoxicTcellsinassociationwithhistocompatibilityleukocyteantigenDR11.J.Exp.Med.1999，189：871-876.)目前，腫瘤是我國的多發病和常見病，已嚴重威脅人類健康，采取有效的治療和控制措施已迫在眉睫。雖然，以手術和放療、化療為主的腫瘤的治療有了長足的進步，但療效尚不能令人滿意。近年來，大量實驗研究表明，基于腫瘤相關抗原(TAA)或腫瘤特異性抗原(TSA)發展起來的腫瘤治療性疫苗，能有效激活免疫系統、殺傷腫瘤細胞，因而尋求基于腫瘤抗原的有效疫苗是防治腫瘤的主要途徑之一。目前，腫瘤疫苗的研究有：①腫瘤細胞疫苗：用逆轉錄病毒、腺病毒載體將外源基因導入腫瘤細胞內以提高腫瘤細胞的免疫原性，實驗證明在體內外能誘導特異性的CTL反應。但自體腫瘤細胞疫苗易致耐受，而異體腫瘤疫苗又易被機體清除。②合成多肽疫苗：隨著分子模擬技術和計算機技術對各種腫瘤抗原表位篩選的應用，越來越多腫瘤抗原Th和CTL表位的被發現、鑒定，TAA或TSA的特異性CTL表位肽，可產生特異性的抗腫瘤免疫。合成多肽疫苗已進入臨床II期試驗，但免疫原性弱是其一大缺點。③DNA疫苗：選用TAA或TSA基因克隆到質粒載體后作為疫苗，可在體內外有效地刺激機體產生特異性的抗腫瘤CTL免疫效應。。④腫瘤抗原負載的樹突狀細胞(DC)疫苗：將TAA或TSA的CTL表位多肽誘導DC作為疫苗，可誘導機體產生特異性免疫保護效應，用MAGE-3CTL多肽處理的DC，觀察到7位進展期胃癌腫瘤患者中的3位發生了腫瘤消退。⑤腫瘤抗原嵌合多表位的研究：我國研究者報道，對3個前列腺腫瘤特異性抗原的多個T細胞表位進行預測、篩選、鑒定，并通過分子克隆技術構建了嵌合DNA疫苗，并將趨化因子和免疫球蛋白的Fc段基因共同克隆在真核載體上，制備了趨化腫瘤抗原基因疫苗，在小鼠體內產生了有效的抗腫瘤免疫效應。總之，以表位為基礎的疫苗研究顯示了其治療和預防腫瘤的誘人前景。表位是抗原分子中可與CTL、Th和B細胞表面受體結合，并誘導特異性細胞免疫和體液免疫反應，從而產生免疫保護作用的一段氨基酸序列。表位疫苗(Epitopevaccine)是新近發展起來，具有獨特設計思路，以抗原表位為基礎制備的疫苗。由于表位疫苗設計的獨特性，與減毒活疫苗、滅活苗及其他幾種新型的疫苗相比，表位疫苗具有：①安全、無毒、穩定，可以直接刺激機體產生特異性免疫反應，其分子結構小而簡單，不會引起自身免疫反應或免疫抑制；②可對抗原表位進行精確的定位，并可對T、B細胞抗原表位進行不同組合，制成針對多種病原體的疫苗。因而，通過篩選富含多個CTL、Th和B細胞優勢表位的氨基酸序列為抗原，可達到既能誘導免疫應答又可減少免疫病理反應的目的；能夠有效增強表位提呈的效率；同時可保持B細胞表位的天然構象等。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供MAGE-A3蛋白上三種B細胞表位的重組蛋白，其編碼核酸、其制備方法及其應用。在本專利技術的第一方面，提供三種分離的B細胞表位蛋白，所述蛋白的氨基酸序列分別為：(a)MAGE-A3蛋白上第5-23位氨基酸序列；和(b)MAGE-A3蛋白上第112-131位氨基酸序列；和(c)MAGE-A3蛋白上第232-246位氨基酸序列。在一個優選例中，所述的蛋白不包括全長的MAGE-A3蛋白(SEQIDNO：7)。在另一優選例中，所述的蛋白具有SEQIDNO：1、NO：2和NO：3所示的氨基酸序列。在另一優選例中，所述的蛋白的氨基酸序列分別如SEQIDNO：1NO：2和NO：3所示。在本專利技術的第二方面，提供三種分離的MAGE-A3蛋白B細胞表位的核酸，所述核酸編碼所述的蛋白。在另一優選例中，所述的核酸的核苷酸序列選自：(1)SEQIDNO：4所示的核苷酸序列本文檔來自技高網...
【技術保護點】
來自人黑色素瘤抗原MAGE？A3蛋白的三個分別含多個T和B細胞表位(免疫優勢表位)的氨基酸序列分別為：(a)MAGE？A3蛋白上第5？23位氨基酸序列；和(b)MAGE？A3蛋白上第112？131位氨基酸序列；和(c)MAGE？A3蛋白上第232？246位氨基酸序列。
【技術特征摘要】
1.來自人黑色素瘤抗原MAGE-A3蛋白的B細胞表位，其特征在于，所述表位為MAGE-A3蛋白上第5-23位氨基酸序列。2.如權利要求1所述的B細胞表位，其特征在于，所述的B細胞表位的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。3.編碼如權利要求1所述的B細胞表位的核酸。4.如權利要求3所述的核酸，其特征在于，所述的核酸序列如SEQIDNO：4所示。5.一種重組載體，所述載體包含權利要求3或4所述的核酸。6.一種遺傳工程化的宿主細胞，所述宿主細胞：(i)含有權利要求5所述的載體；或(ii)基因組中整...
【專利技術屬性】
技術研發人員：朱冠保，張麗芳，程駿，朱珊麗，劉納新，薛向陽，沈賢，陳俊，
申請(專利權)人：溫州醫學院，
類型：發明
國別省市：
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