二酰甘油酰基轉移酶基因及其用途制造技術

本發明專利技術涉及二酰甘油酰基轉移酶、編碼該酶的多核苷酸等。本發明專利技術提供例如含有序列號1或4的堿基序列的多核苷酸、編碼由序列號2的氨基酸序列組成的蛋白質的多核苷酸、含有該多核苷酸的表達載體及轉化體、使用該轉化體的脂質或脂肪酸的制造方法或含有通過該制造方法制造的脂質或脂肪酸的食品等。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及編碼新型二酰甘油酰基轉移酶的多核苷酸及其利用方法。
技術介紹
作為貯藏脂質的三酰甘油通過向二酰甘油轉移酰基而生成。向二酰甘油轉移酰基的酶被稱為二酰甘油酰基轉移酶(diacylglycerol acyltransferase DGAT),已知將酰基CoA作為酰基供體(酰基給予體)的類型的酰基CoA: 二酰甘油酰基轉移酶(acyl-CoA:diacylglycerol acyltransferase) (EC :2· 3. I. 20)，將憐脂作為酸基供體的類型的憐脂二酸甘油酸基轉移酶(phospholipids:diacylglycerolacyltransferase:憐脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)) (EC :2. 3. I. 158)。將酰基CoA作為酰基供體的DGAT由于一級結構不同，可分為DGATl和DGAT2的2·個家族。(非專利文獻I及2)。此外，有關磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)基因，已知從酵母及植物等中克隆(專利文獻I、非專利文獻3及4)，其中，有關來自擬南芥的磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)，已知有可將磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺等各種磷脂作為酰基給予體，且可轉移Cltl-C22的酰基等(非專利文獻5)。菌類中研究較多的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中，作為編碼DGAT的基因，已知有屬于DGAT2家族的DGAl (Y0R245C)(非專利文獻6)及作為磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)的LROl (YNR008W)。雖然由于由此2個基因編碼的酶占據了酵母的DGAT活性的大部分，但即使同時破壞這些基因，DGAT活性也不會完全喪失。已知有關該殘留DGAT活性，由作為酰基CoA:甾醇酰基轉移酶基因的AREl基因和ARE2基因編碼的酶的DGAT活性決定(非專利文獻7)。作為脂質生產菌的高山被孢霉(Mortierella alpina:M. alpina)中，至今為止已報道的有將酰基CoA作為酰基供體的4種DGAT及其基因(2種DGATl家族基因和2種DGAT2家族基因)(專利文獻2及3、非專利文獻8)。但在高山被孢霉(M. alpina)中，將磷脂作為酰基供體的磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)的同源物還不為人所知。已知Λ5脂肪酸去飽和酶為氧化二高-Y-亞麻酸(DGLA)并催化花生四烯酸(ARA)生成的酶，但在高山被孢霉(M. alpina)中，因為主要作用于作為磷脂酰膽堿的酰基而存在的二高-Y -亞麻酸(DGLA)，所以，花生四烯酸作為磷脂酰膽堿的酰基而生成(非專利文獻9)。因此，為了促進高山被孢霉(M. alpina)中含有花生四烯酸的三酰甘油的生成，需要從作為磷脂酰膽堿等磷脂的酰基而存在的花生四烯酸中生成含有花生四烯酸的三酰甘油的酶。現有技術文獻專利文獻專利文獻I日本特表2002-541783公報專利文獻2美國專利申請公開第2006/0094086號說明書專利文獻3美國專利申請公開第2006/0091087號說明書非專利文獻非專利文獻I Proc. Natul. Acad. Sci. USA，95，13018-13023，1998非專利文獻2 J. B. C.，276 (42)，38862-38869，2001非專利文獻3 J. B. C.，275 (21)，15609-15612,2000非專利文獻4 Proc. Natl. Acd. Sci. USA, 97(12)，6487-6492非專利文獻5 Plant Physiology，135，1324-1335非專利文獻6 J. Bacteriol.，184，519-524，2002非專利文獻7 J. B. C. ,277(8) ,6478-6482，2002 非專利文獻8日本2003年農藝化學會大會要旨集非專利文獻9 J. B. C. ,278(37) ,35115-35126，200
技術實現思路
在如上所述的情況下，為了在高山被孢霉(M. alpina)中生成含有花生四烯酸的三酰甘油，期望有用的新型的酶。本專利技術者深入研究的結果，成功地克隆了編碼作為脂質生產菌高山被孢霉(M. alpina)的磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)的同源物(MaLROl)的基因，從而完成了本專利技術。即本專利技術提供以下多核苷酸、蛋白質、表達載體、轉化體、使用該轉化體的脂質或脂肪酸組合物及食品等的制造方法以及根據該制造方法制造的食品等。即本專利技術如下。[I] 一種多核苷酸，其特征在于，為選自以下(a) (e)中任一項所述的多核苷酸(a)多核苷酸，其含有序列號I或4的堿基序列；(b)多核苷酸，其編碼由序列號2的氨基酸序列組成的蛋白質；(c)多核苷酸，其編碼由序列號2的氨基酸序列中I 100個氨基酸發生缺失、取代、插入及/或附加的氨基酸序列組成，且具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質；(d)多核苷酸，其編碼具有與序列號2的氨基酸序列有60%以上同一性的氨基酸序列，且具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質 '及(e)多核苷酸，其為與由序列號I或4的堿基序列的互補堿基序列組成的多核苷酸在嚴謹條件下雜交的多核苷酸，且編碼具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質。[2]根據上述[I]中所述的多核苷酸，其特征在于，為以下(f)或(g)中任一項所述的多核苷酸(f)多核苷酸，其編碼由序列號2的氨基酸序列中I 10個氨基酸發生缺失、取代、插入及/或附加的氨基酸序列組成，且具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質 '及(g)多核苷酸，其編碼具有與序列號2的氨基酸序列有75%以上同一性的氨基酸序列，且具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質。[3]根據上述[I]中所述的多核苷酸，其特征在于，含有序列號I或4的堿基序列。[4]根據上述[I]中所述的多核苷酸，其特征在于，編碼由序列號2的氨基酸序列組成的蛋白質。[5]根據上述[I] [4]中任一項所述的多核苷酸,其特征在于,為DNA。[6] 一種蛋白質,其特征在于，由上述[I] [5]中任一項所述的多核苷酸編碼。[7] 一種載體，其特征在于，含有上述[I] [5]中任一項所述的多核苷酸。[8] 一種非人轉化體，其特征在于，導入了上述[I] [5]中任一項所述的多核苷酸。[9] 一種非人轉化體，其特征在于，導入了上述[7]中所述的載體。[10]根據上述[8]或[9]中所述的轉化體，其特征在于，所述轉化體為脂質生產菌。[11]根據上述[10]中所述的轉化體，其特征在于，所述脂質生產菌為高山被孢霉 (Mortierella alpina)。[12] 一種脂質或脂肪酸組合物的制造方法，其特征在于，從上述[8] [11]中任一項所述的轉化體的培養物中提取脂質或脂肪酸組合物。[13]上述[12]中所述的方法，其特征在于，所述脂質為三酰甘油。[14]根據上述[12]中所述的方法，其特征在于，所述脂肪酸為花生四烯酸或二I^-Y-亞麻酸。[15] 一種食品、醫藥品、化妝品或肥皂，其特征在于，含有通過上述[12]中所述的制造方法提取的脂質或脂肪酸組合物。本專利技術的多核苷酸可用于脂質生產菌(例如高山被孢霉(M. alpina))、酵母、植物等的轉化。即將本專利技術的多核苷酸導入適合的宿主細胞內，制成轉化體，通過在該轉化體內表達本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2009.12.21 JP 2009-2892871.一種多核苷酸,其特征在于,為選自以下(a) (e)中任一項所述的多核苷酸 (a)多核苷酸，其含有序列號I或4的堿基序列； (b)多核苷酸，其編碼由序列號2的氨基酸序列組成的蛋白質； (C)多核苷酸，其編碼由序列號2的氨基酸序列中I 100個氨基酸發生缺失、取代、插入及/或附加的氨基酸序列組成，且具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質； (d)多核苷酸，其編碼具有與序列號2的氨基酸序列有60%以上同一性的氨基酸序列，且具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質；及 (e)多核苷酸，其為與由序列號I或4的堿基序列的互補堿基序列組成的多核苷酸在嚴謹條件下雜交的多核苷酸，且編碼具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質。2.根據權利要求I中所述的多核苷酸，其特征在于，為以下(f)或(g)中任一項所述的多核苷酸 (f)多核苷酸，其編碼由序列號2的氨基酸序列中I 10個氨基酸發生缺失、取代、插入及/或附加的氨基酸序列組成，且具有二酰甘油酰基轉移酶活性的蛋白質；及 (g)多核苷酸，其編碼具有與序列號2的氨基酸序列有75%以上同一性的氨基酸序列，且具有二酰甘油酰基轉移酶活...

【專利技術屬性】
技術研發人員：落合美佐，
申請(專利權)人：三得利控股株式會社，
類型：
國別省市：