本發(fā)明專利技術(shù)涉及逆轉(zhuǎn)或降低食管癌放療增敏劑、篩選方法及其用途。具體而言涉及對逆轉(zhuǎn)或降低食管癌放療抗性基因的基因沉默劑、沉默方法及其用途。本發(fā)明專利技術(shù)通過對選擇的特定抗性基因的沉默，能夠有效地實現(xiàn)放療的增敏效果，進而能夠更好地進行個體化治療，為食管癌的治療提供更有效的治療方案。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物技術(shù)和免疫治療領(lǐng)域，具體而言涉及逆轉(zhuǎn)或降低食管癌放療抗性的增敏劑、篩選方法及其用途。進一步地，涉及對食管癌放療抗性基因的基因沉默劑、沉默方法及其用途。本專利技術(shù)通過對選擇的特定抗性基因的沉默，能夠有效地實現(xiàn)放療的增敏效果，進而能夠更好地進行個體化治療，為食管癌的治療提供更有效的治療方案。
技術(shù)介紹
食管癌是常見的惡性腫瘤，在全世界是第六位癌癥相關(guān)的死亡原因[EnzingerPC&Mayer RJ. Esophageal cancer. N Engl J Med 2003 ;349 :2241 2252]。已知放射治療是食管癌的主要治療手段之一，但局部失敗率高達50% -55%，即使增加放療或化療劑量仍然不能改善局控率[Cooper J 等人，Radiation Therapy Oncology Group for the Chemoradiotherapy of locally advanced esophageal cancer Long-term follow-upof a prospective randomized trial (RT0G85-01). JAMA 1999 ;281 :16231627 ;MinskyB 等人，INT 0123 (Radiation Therapy Oncology Group 94-05)phase III trial ofcombinedmodality therapy for esophageal cancer :High_dose versus standard-doseradiation therapy. J Clin Oncol 2002 ;20 :11671174]。目前研究發(fā)現(xiàn)放療局部失敗除了與腫瘤乏氧、劑量限制性毒性降低照射量等因素有關(guān)外，與放射抵抗密切相關(guān)。可以說放射抵抗是放療后局部復(fù)發(fā)的主要原因。體內(nèi)食管癌瘤中某些基因的表達狀態(tài)直接影響著癌細胞的放射抗性[K Fukuda等人，Differentialgene expression profiles of radioresistant oesophageal cancer cell linesestablished by continuous fractionated irradiation. British Journal of cancer，2004 ；91 (8) :1543-1550] o對局部失敗率高達50% -55%的這部分患者人群，有必要尋找與食管癌的放療抗性相關(guān)基因，并以之為靶點獲得能夠增敏放療抗性基因的增敏劑，借助這種篩選抑制或者消除放療抗性，進而為這部分食管癌患者提供個體化治療，提高患者的生存率。
技術(shù)實現(xiàn)思路
為了實現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，專利技術(shù)人進行了多方面的研究工作，先在抗性敏感基因搜索方面進行了大量工作。主要包括應(yīng)用包含48000個探針的Illumine_6_V3人類全基因組芯片，對比調(diào)查了經(jīng)多次照射產(chǎn)生放射抵抗性的食管癌細胞系KYSE-170R及其親代細胞系KYSE-170的基因表達譜差異。由qRT-PCR和Western blot證實該基因確實存在差異表達。應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾體系在體內(nèi)外驗證差異基因與放射抵抗的關(guān)系，并對該基因在食管癌患者病理組織中的表達情況進行回顧性分析。試驗結(jié)果表明食管癌細胞系KYSE-170R及其親代細胞系KYSE-170的基因在未照射、照射后8小時及照射后24小時分別有945，733和1232個表達差異基因。qRT-PCR結(jié)果提示相對于親代細胞系KYSE-170，放射抵抗細胞系KYSE-170R在未照射、照射后8小時及照射后24小時AKR1C3分別有9. 39，5. 94和9. 20倍的表達上調(diào)。Western blot結(jié)果證實，在未照射的放射抵抗細胞系KYSE-170R中AKR1C3蛋白表達量顯著高于親代細胞系KYSE_170(P< O. 05)。應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾體系沉默AKR1C3后，放射抵抗細胞系KYSE-170R的放射敏感性顯著增強，應(yīng)用AKR1C3過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)親代細胞系KYSE-170發(fā)現(xiàn)其放射抵抗性顯著增強。機制探討初步結(jié)果提示，AKR1C3沉默引起的放射敏感性增強，很可能與ROS晚聚集和放療后48小時內(nèi)G2期細胞阻滯有關(guān)。在對食管癌患者病理組織中的表達·情況進行回顧性分析中，專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)AKR1C3表達于食管癌細胞，正常食管粘膜細胞，間質(zhì)細胞及小血管上皮中。正常食管粘膜細胞的表達量明顯低于高分化食管鱗癌細胞；高分化食管鱗癌細胞表達量明顯高于低分化食管鱗癌細胞。而且后續(xù)的研究表明，AKR1C3可能會為食管癌，尤其是食管高分化鱗癌，提供新的放射增敏藥物作用靶點。總之，經(jīng)過上述多方面努力，專利技術(shù)人終于找到了與食管癌抗性相關(guān)的基因-AKR1C3 (Homo sapiens aldo-keto reductase family 1，memberC3(3-alphahydroxysteroid dehydrogenase, type II) (AKR1C3)，經(jīng)檢索發(fā)現(xiàn)該序列的 Genbank 號為NM—003739，其全序列如下I gcccattgtt tttgtaatct ctgaggagaa gcagcagcaa acatttgcta gtcagacaag61 tgacagggaa tggattccaa acaccagtgt gtaaagctaa atgatggcca cttcatgcct121 gtattgggat ttggcaccta tgcacctcca gaggttccga gaagtaaagc tttggaggtc181 acaaaattag caatagaagc tgggttccgc catatagatt ctgctcattt atacaataat241 gaggagcagg ttggactggc catccgaagc aagattgcag atggcagtgt gaagagagaa301 gacatattct acacttcaaa gctttggtcc acttttcatc gaccagagtt ggtccgacca361 gccttggaaa actcactgaa gaaagctcaa ttggactatg ttgacctcta tcttattcat421 tctccaatgt ctctaaagcc aggtgaggaa ctttcaccaa cagatgaaaa tggaaaagta481 atatttgaca tagtggatct ctgtaccacc tgggaggcca tggagaagtg taaggatgca541 ggattggcca agtccattgg ggtgtcaaac ttcaaccgca ggcagctgga gatgatcctc601 aacaagccag gactcaagta caagcctgtc tgcaaccagg tagaatgtca tccgtatttc661 aaccggagta aattgctaga tttctgcaag tcgaaagata ttgttctggt tgcctatagt721 gctctgggat ctcaacga本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
逆轉(zhuǎn)或降低食管癌放療抗性的增敏藥物，其為AKR1C3基因表達抑制劑或沉默劑。
【技術(shù)特征摘要】
1.逆轉(zhuǎn)或降低食管癌放療抗性的增敏藥物，其為AKR1C3基因表達抑制劑或沉默劑。2.權(quán)利要求I的增敏藥物，其中還含有藥學(xué)上可接受的佐劑。3.權(quán)利要求I的增敏藥物，其中的食管癌是食管鱗癌。4.AKR1C3基因表達抑制劑或沉默劑在制備用于逆轉(zhuǎn)或降低食管癌放療抗性的增敏治療的藥物中的用途。5.食管癌放射抗性增敏劑的初步篩選方法，其包括 (1)提供高表達AKR1C3基因的宿主細胞； (2)提供候選藥物； (3)使(I)的宿主細胞和(2)的候選藥物在合適的條件下接觸； (4)檢測(3)中的經(jīng)過候選藥物作用的宿主細胞的AKR1C3基因的表達；和 (5)能夠使AKR1C3基因表達下調(diào)或者消失的候選藥物，判定為具有食管癌放射抗性增敏劑潛力的藥物。6.食管癌放射抗性增敏劑的細胞水平篩選方法，其包括 (1)提供高表達AKR1C3基因的食管癌細胞； (2)提供候選藥物； (3)使(I)的食管癌細胞和(2)的候選藥物在合適的條件下接觸； (4)檢測(3)中的經(jīng)過候選藥物作用的食管癌細胞的AKR1C3基因的表達； (5)將使AKR1C3基因表達下調(diào)或者消失，同時保持食管癌細胞存活的候選藥物判定為食管癌放射抗性增敏劑。7.權(quán)利要求6的方法，其中的食管癌細胞是KYSE-170R細胞系或者轉(zhuǎn)化了AKR1C3表達載體的KYSE-17...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周德敏，高獻書，熊偉，趙靜，張禮和，
申請(專利權(quán))人：北京大學(xué)，北京大學(xué)第一醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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