本發明專利技術提供了一種蛇龍珠葡萄品種葡萄病毒病的脫除與苗木快繁方法，包括營養系初選、試管苗莖尖培養、熱處理脫毒、試管苗移栽馴化、病毒檢測、無病毒苗木快繁步驟；其有益效果為：經過使用本發明專利技術方法蛇龍珠葡萄品種的脫毒效果可達90%以上，能夠突出生產目的性，使脫毒工作更加簡捷、有效，節省了人力、物力和財力，有效提高了該葡萄品種的成活率。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于葡萄種植領域，尤其是涉及一種蛇龍珠葡萄品種的病毒脫除種植方法。
技術介紹
蛇龍珠是我國釀造紅葡萄酒的優良品種之一，與赤霞珠、品麗珠并稱為“三珠”，在我國主要分布在膠東半島沙(砂)地葡萄園和寧夏產區。以其原料釀造的單品種酒酒質好，呈寶石紅色、果香濃，酒體豐滿圓潤，典型性強，無論是山東膠東半島還是西北的寧夏賀蘭山東麓地區，以蛇龍珠為原料釀制的單品種酒均表現出獨特優良品質，是我國最具發展潛力的釀酒葡萄品種之一。張裕公司和寧夏西夏王葡萄酒業有限公司生 產的蛇龍珠干紅葡萄酒曾獲得國際大獎，得到了消費者認可，也取得了較好的口碑和經濟效益，一些國際同行對中國西部生產的蛇龍珠葡萄酒也給予了一定的贊譽。蛇龍珠葡萄品種具有較強的抗旱性、抗瘠薄性，其根系較發達，生長力旺盛，種植在較瘠薄的土壤上產量高、質量好，而種植在肥沃的土壤上，常表現為旺長結果量少，同時該品種進入結果期晚、產量低、樹勢難控制。蛇龍珠品對病毒病抵抗力低，尤其是扇葉病毒、卷葉病毒和蕃茄環斑病毒，蛇龍珠葡萄品種感染此幾類病毒非常廣泛嚴重，20世紀80年代中期，王朝公司自山東引種蛇龍珠在薊縣建立基地，并作為釀造干紅葡萄酒的主要原料，但是由于病毒病嚴重，至90年代初，基地大部分蛇龍珠葡萄植株由于感染卷葉病毒，樹勢衰弱，并逐漸死亡。1996年，寧夏銀廣夏葡萄釀酒公司自山東引種的上千畝蛇龍珠也因卷葉病毒病而遭受損失；因此病毒病是限制該品種發展的一大障礙。因此在天津等華北地區引入蛇龍珠葡萄品種的種植需要建立嚴格科學的管理種植方法，尤其是需要找出針對性的病毒脫除解決方法，才能獲得較高的產量和質量。
技術實現思路
針對上述的不足，經過多年實踐調查和研究、生產中初步應用，本專利技術人專利技術了一種病毒脫除方法，這種方法是解決蛇龍珠品種栽培技術上存在問題的根本措施，能有效快速脫除病毒，提高蛇龍珠葡萄品種的成活率。—種蛇龍珠葡萄品種葡萄病毒病的脫除與苗木快繁方法，包括營養系初選、試管苗莖尖培養、熱處理脫毒、試管苗移栽馴化、病毒檢測、無病毒苗木快繁步驟，其中I)營養系初選步驟春季在蛇龍珠釀酒葡萄品種園選擇無明顯扇葉病毒癥狀的植株，作好標記，在此基礎上于當年秋季選擇結果性狀良好、無明顯或無卷葉病毒癥狀的植株，并作好標記；2)試管苗莖尖培養步驟先于轉年春季五月份，在葡萄品種園中剪取做好標記的各植株健康嫩梢上部，去掉葉片，剪成單芽莖段，用自來水沖洗2 — 3小時，備用；在超凈工作臺上，將上述備用單芽莖段用70%的酒精浸洗振蕩10秒鐘后，用O. 1%升汞加一滴吐溫，搖動5 - 10分鐘后，用無菌水沖洗4-5次，剪除兩端接觸藥液部分，剪成I- 2厘米單芽芽段，插于培養基上，進行培養，得到試管組培苗；3)熱處理脫毒步驟在超凈工作臺無菌條件下，將上述試管組培苗莖尖剪下O. 1-0. 5cm，接種到培養基上，進行培養，成苗后繼代培養，擴大繁殖待其生根；生根后，將其直接置于培養箱中，溫度最初為25°C，以后用一個星期時間逐漸升溫至37± I°C，并在該條件下培養I個月；4)試管苗移栽馴化步驟 取上述熱處理后的試管苗的莖尖，O. 3-0. 5cm左右，進行組織培養，培養溫度為25±2°C，待培養瓶中的試管苗長至6 — 7cm時，在培養室或溫室中將瓶口打開，敞口鍛煉2-3天后，去掉培養基，用20 - 25°C的水沖洗掉瓊脂，栽入盛有蛭石的周轉箱中，并用玻璃板或塑料薄膜蓋好，保持其內小氣候，濕度100%，溫度25°C，每天噴水一次，并通風I. 5-2小時，3天后可開一小縫隙放風，以后逐漸將縫隙加大，直至全部揭開，每周噴一次營養液，馴化10天后，將其移入培養缽中培養成苗；5)病毒檢測將營養缽中生長的葡萄苗的葉子取下，進行病毒檢測，檢測苗木是否帶有葡萄病毒病；其中主要檢測檢測苗木是否帶有葡萄扇葉病毒、卷葉病毒和蕃茄環斑病毒。6)無病毒苗木快繁將上述檢測無病毒的葡萄苗采用培養基進行上述步驟中組培、擴大繁殖及移載馴化，形成無病毒苗木的快速繁殖。其中上述步驟中所使用的培養基為B5+0. 2ppmIAA+0. Olppm 6_BA培養基，培養基的厚度為2. 3—2. 5cm。上述培養基的制備方法為將^+0· 2ppmIAA+0. Olppm 6-BA，附加蔗糖濃度2%，瓊脂濃度O. 4-0. 6%，將PH值調至為5. 8，在I. 2—1. 3KG/CM2的高壓鍋壓力下，滅菌時間15 —20分鐘制得。其中所述試管苗莖尖培養步驟中單芽芽段在培養基上的培養條件為培養室溫度25±2°C，光照時間每天12小時，照度為雙管40W日光燈。葡萄扇葉病毒和卷葉病毒主要癥狀表現季節分別是春季和秋季，所以在進行營養系初選時應根據生產需要，兼顧產量、質量、病毒、生長勢等幾方面因素進行篩選；在培養基的篩選制備過程中，選用了匕培養基加不同濃度、不同類激素進行最適培養基的篩選，通過對不同培養基上成活的莖段進行培養觀察，發現以B5+0. 2ppmIAA+0. 01ppm6-BA培養基上的莖段生根速度快，數量適中，根和莖比例協調，且萌芽后生長良好，植株粗壯，在繼代培養基中，該培養基仍適用。本專利技術的有益效果為經過使用本專利技術方法蛇龍珠葡萄品種的脫毒效果可達90%以上，能夠突出生產目的性，使脫毒工作更加簡捷、有效，節省了人力、物力和財力，有效提高了該葡萄品種的成活率。具體實施例方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步說明，但不限定本專利技術的保護范圍。，采取如下步驟進行(I)營養系初選葡萄扇葉病毒和卷葉病毒主要癥狀表現季節分別是春季和秋季。根據生產需要，春季，在蛇龍珠釀酒葡萄品種園選擇無明顯扇葉病毒癥狀的植株，作好標記，在此基礎上于當年秋季選擇結果性狀良好、無明顯或無卷葉病毒癥狀的植株，并作好標記。優系篩選應結合生產實際進行。(2)試管苗莖尖培養于轉年春季五月份，在葡萄品種園中剪取做好標記的各品種植株健康嫩梢上部，帶回實驗室，去掉葉片，剪成單芽莖段，用自來水沖洗2 — 3小時，備用；在超凈工作臺上，將單芽段用70 %的酒精浸洗振蕩10秒鐘后，用O. 1%升汞加一滴吐溫，搖動5 - 10分鐘，用無菌水沖洗4-5次，剪除兩端接觸藥液部分，剪成I 一 2厘米單芽芽段，插于培養基上，進行培養得到試管組培苗；培養條件為培養室溫度25±2°C，光照時間每天12小時，照度為雙管40W日光燈。(3)熱處理脫毒在進行營養系初選的基礎上，用莖尖培養和熱處理 相結合的方法，對蛇龍珠葡萄品種主要病毒(扇葉病毒、卷葉病毒和蕃茄環斑病毒)進行脫除，具體步驟為在葡萄試管組培苗繼代培養的過程中，對每次取莖尖的組培苗作上標記，留待作為組培苗的脫毒材料；在超凈工作臺無菌條件下，將試管組培苗莖尖剪下O. 1-0. 5cm，接種到其最適培養基上，進行培養，成苗后繼代培養，擴繁成40-50瓶試管苗。其中培養基的厚度較常規培養的厚，大約2. 3—2. 5cm,以防熱處理過程中培養基干枯。待上述莖尖培養的40—50瓶試管苗生根后，將其直接置于培養箱中，溫度最初為25V,以后大約用一個星期時間逐漸升溫至37土1°C，并在該條件下培養近I個月，然后取熱處理后的試管苗的莖尖(O. 3—0. 5cm左右)，進行組織培養，培養溫度為25±2°C。(4)試管苗移栽馴化待培養瓶中的試管苗長至6 — 7厘米時本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種蛇龍珠葡萄品種葡萄病毒病的脫除與苗木快繁方法，其特征在于包括營養系初選、試管苗莖尖培養、熱處理脫毒、試管苗移栽馴化、病毒檢測、無病毒苗木快繁步驟，其中：1）營養系初選步驟：春季在蛇龍珠釀酒葡萄品種園選擇無明顯扇葉病毒癥狀的植株，作好標記，在此基礎上于當年秋季選擇結果性狀良好、無明顯或無卷葉病毒癥狀的植株，并作好標記；2）試管苗莖尖培養步驟：先于轉年春季五月份，在葡萄品種園中剪取做好標記的各植株健康嫩梢上部，去掉葉片，剪成單芽莖段，用自來水沖洗2－3小時，備用；在超凈工作臺上，將上述備用單芽莖段用70％的酒精浸洗振蕩10秒鐘后，用0.1%升汞加一滴吐溫，搖動5－10分鐘后，用無菌水沖洗4？5次，剪除兩端接觸藥液部分，剪成1－2厘米單芽芽段，插于培養基上，進行培養，得到試管組培苗；3）熱處理脫毒步驟：在超凈工作臺無菌條件下，將上述試管組培苗莖尖剪下0.1？？0.5cm，接種到培養基上，進行培養，成苗后繼代培養，擴大繁殖待其生根；生根后，將其直接置于培養箱中，溫度最初為25℃，以后用一個星期時間逐漸升溫至37±1℃，并在該條件下培養1個月；4）試管苗移栽馴化步驟：取上述熱處理后的試管苗的莖尖，0.3？？0.5cm左右，進行組織培養，培養溫度為25±2℃，待培養瓶中的試管苗長至6－7cm時，在培養室或溫室中將瓶口打開，敞口鍛煉2？3天后，去掉培養基，用20－25℃的水沖洗掉瓊脂，栽入盛有蛭石的周轉箱中，并用玻璃板或塑料薄膜蓋好，保持其內小氣候，濕度100％，溫度25℃，每天噴水一次，并通風1.5？？2小時，3天后可開一小縫隙放風，以后逐漸將縫隙加大，直至全部揭開，每周噴一次營養液，馴化10天后，將其移入培養缽中培養成苗；5）病毒檢測將營養缽中生長的葡萄苗的葉子取下，進行病毒檢測，檢測苗木是否帶有葡萄病毒病；6）無病毒苗木快繁將上述檢測無病毒的葡萄苗采用培養基進行上述步驟中組培、擴大繁殖及移載馴 化，形成無病毒苗木的快速繁殖。...
【技術特征摘要】
1.一種蛇龍珠葡萄品種葡萄病毒病的脫除與苗木快繁方法，其特征在于包括營養系初選、試管苗莖尖培養、熱處理脫毒、試管苗移栽馴化、病毒檢測、無病毒苗木快繁步驟，其中 1)營養系初選步驟 春季在蛇龍珠釀酒葡萄品種園選擇無明顯扇葉病毒癥狀的植株，作好標記，在此基礎上于當年秋季選擇結果性狀良好、無明顯或無卷葉病毒癥狀的植株，并作好標記； 2)試管苗莖尖培養步驟 先于轉年春季五月份，在葡萄品種園中剪取做好標記的各植株健康嫩梢上部，去掉葉片，剪成單芽莖段，用自來水沖洗2 — 3小時，備用； 在超凈工作臺上，將上述備用單芽莖段用70 %的酒精浸洗振蕩10秒鐘后，用O. 1%升汞加一滴吐溫，搖動5 - 10分鐘后，用無菌水沖洗4-5次，剪除兩端接觸藥液部分，剪成I 一2厘米單芽芽段，插于培養基上，進行培養，得到試管組培苗； 3)熱處理脫毒步驟 在超凈工作臺無菌條件下，將上述試管組培苗莖尖剪下O. 1-0. 5cm，接種到培養基上，進行培養，成苗后繼代培養，擴大繁殖待其生根；生根后，將其直接置于培養箱中，溫度最初為25°C，以后用一個星期時間逐漸升溫至37± I°C，并在該條件下培養I個月； 4)試管苗移栽馴化步驟 取上述熱處理后的試管苗的莖尖，O. 3-0. 5cm左右，進行組織培養，培養溫度為25±2°C，待培養瓶中的試管苗長至6 — 7cm時...
【專利技術屬性】
技術研發人員：尹吉泰，張福慶，張軍，
申請(專利權)人：中法合營王朝葡萄釀酒有限公司，
類型：發明
國別省市：
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